牛奶主要过敏原αs1-酪蛋白全长与片段区基因的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定 被引量：6

1

作者 曹燕娟 胡东生 +3 位作者 刘志刚 陈思 罗新萍 黄钟 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期601-605,共5页

目的:克隆并表达牛奶中主要过敏原αs1-酪蛋白的全长及N端、C端两个片段区基因,用于筛选与制备牛奶主要过敏原的单克隆抗体。方法:利用RT-PCR技术克隆αs1-酪蛋白基因,测序后将目的片段克隆入原核表达质粒pET载体,转化至大肠杆菌(E.coli... 目的:克隆并表达牛奶中主要过敏原αs1-酪蛋白的全长及N端、C端两个片段区基因,用于筛选与制备牛奶主要过敏原的单克隆抗体。方法:利用RT-PCR技术克隆αs1-酪蛋白基因,测序后将目的片段克隆入原核表达质粒pET载体,转化至大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)。经IPTG诱导表达,获得重组αs1-酪蛋白。用Ni2+亲和层析柱纯化,用Western blot和ELISA检测重组蛋白与牛奶过敏患者血清IgE的结合活性。结果:克隆获得αs1-酪蛋白全长的开放阅读框基因为645bp(含终止密码子),编码214个氨基酸。N、C端片段区基因(含终止密码子)分别为285、294bp,编码94、97个氨基酸。三种重组蛋白均能以可溶性表达形式纯化,经Western blot和ELISA检测都具有较好的免疫原性,而αs1-酪蛋白全长的免疫原性更强。结论:成功地克隆和表达了αs1-酪蛋白全长及N、C端两个片段区基因,为研制牛奶主要过敏原的单克隆抗体,制备牛奶主要过敏原的检测试剂奠定了基础。 展开更多

关键词 牛奶过敏原 αs1-酪蛋白 基因克隆 表达

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漏芦对奶山羊乳腺上皮细胞酪蛋白合成相关基因表达的影响 被引量：4

2

作者 刘莉莉 杨炳友 《河南农业科学》 北大核心 2020年第4期160-166,共7页

为探讨漏芦对泌乳动物乳腺酪蛋白合成的调节机制,利用细胞活力分析仪检测漏芦乙醇提取物(25、50、100、200、400、600、800μg/mL)对奶山羊乳腺上皮细胞活力和增殖能力的影响,并选择不抑制细胞生长增殖的乙醇提取物剂量,研究其对奶山羊... 为探讨漏芦对泌乳动物乳腺酪蛋白合成的调节机制,利用细胞活力分析仪检测漏芦乙醇提取物(25、50、100、200、400、600、800μg/mL)对奶山羊乳腺上皮细胞活力和增殖能力的影响,并选择不抑制细胞生长增殖的乙醇提取物剂量,研究其对奶山羊乳腺上皮细胞酪蛋白合成相关基因mRNA表达的影响;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测乳腺上皮细胞αs1-酪蛋白(CSN1S1)、αs2-酪蛋白(CSN1S2)、β-酪蛋白(CSN2)、κ-酪蛋白(CSN3)、信号转导与转录激活因子5(STAT5)、蛋白质酪氨酸激酶2(JAK2)、哺乳动物雷帕霉素蛋白(mTOR)、真核细胞翻译启动因子4E结合蛋白1(4EBP1)及核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)基因的mRNA表达水平。结果表明,较高剂量(200~800μg/mL)的漏芦乙醇提取物明显抑制了奶山羊乳腺上皮细胞的活力和增殖能力(P<0.05),故后续试验添加25、50、100μg/mL的漏芦乙醇提取物处理乳腺上皮细胞;漏芦乙醇提取物可明显上调细胞酪蛋白基因CSN1S1、CSN1S2、CSN2、CSN3及酪蛋白合成相关基因STAT5、JAK2、mTOR、S6K1的mRNA表达水平(P<0.05),但显著下调了4EBP1基因的mRNA表达水平(P<0.05)。由此可见,漏芦乙醇提取物能通过调节奶山羊乳腺上皮细胞酪蛋白合成相关基因的表达,进而促进乳腺细胞酪蛋白的合成。 展开更多

关键词 漏芦 奶山羊 乳腺上皮细胞 αs1-酪蛋白 αs2-酪蛋白 Β-酪蛋白 κ-酪蛋白 基因表达

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包埋固定化酶降解牛奶αs1-酪蛋白过敏性研究 被引量：6

3

作者 汝成业 张娟 +2 位作者 堵国成 陈坚 李江华 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期387-392,共6页

利用海藻酸钠固定化蛋白酶,探求其对牛奶过敏原αs1-酪蛋白的特异性降解。以固定化酶的活力回收率为指标,探究了固定化的条件、固定化酶的部分性质以及固定化酶在去除牛奶过敏原蛋白的应用。结果表明:最优固定化条件为,海藻酸钠质量分数... 利用海藻酸钠固定化蛋白酶,探求其对牛奶过敏原αs1-酪蛋白的特异性降解。以固定化酶的活力回收率为指标,探究了固定化的条件、固定化酶的部分性质以及固定化酶在去除牛奶过敏原蛋白的应用。结果表明:最优固定化条件为,海藻酸钠质量分数为4.0%,Ca Cl2的质量分数为3.0%,固定化时间0.5 h,固定化酶量为V(海藻酸钠)∶V(酶液)为1∶3,固定化效率达到67.5%;固定后的酶最适反应温度70℃,最适反应p H 10.0,连续使用6次后剩余酶活达到40.0%以上;将固定化酶作用于2.0%脱脂奶粉溶液中,60℃条件下反应25 min过敏原αs1-酪蛋白得到特异性降解。 展开更多

关键词 海藻酸钠 固定化酶 αs1-酪蛋白 过敏原

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牛乳αS1-酪蛋白与大豆蛋白交叉过敏原的识别鉴定 被引量：5

4

作者 丛艳君 吕晓哲 +2 位作者 李晔 刘迪 李邻峰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第18期70-75,共6页

为识别牛乳αS1-酪蛋白和大豆蛋白的交叉过敏原,鉴定其致敏特性,揭示交叉过敏机理,首先以牛乳过敏患者血清、αS1-酪蛋白小鼠单克隆抗体为探针,通过免疫印迹方法识别大豆蛋白交叉过敏原,然后通过生物信息学工具比对了交叉过敏原与αS1-... 为识别牛乳αS1-酪蛋白和大豆蛋白的交叉过敏原,鉴定其致敏特性,揭示交叉过敏机理,首先以牛乳过敏患者血清、αS1-酪蛋白小鼠单克隆抗体为探针,通过免疫印迹方法识别大豆蛋白交叉过敏原,然后通过生物信息学工具比对了交叉过敏原与αS1-酪蛋白的氨基酸序列相似性,进而通过体外消化实验和加热实验探究交叉过敏原的稳定性。结果表明:牛乳αS1-酪蛋白和大豆蛋白的交叉过敏原为β-伴大豆球蛋白α亚基(Gly m Bd 60K),十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳结果表明Gly m Bd 60K在2 min消化完全,并且加热对过敏原的交叉反应性没有影响。 展开更多

关键词 αS1-酪蛋白 大豆蛋白 交叉过敏原 稳定性

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亚油酸对奶牛乳腺上皮细胞乳脂肪和乳蛋白合成相关基因表达的影响 被引量：4

5

作者 李大彪 李红磊 +4 位作者 邢媛媛 于永强 王卫云 陈玲 李平 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2016年第3期257-264,共8页

该文主要研究了添加不同浓度的亚油酸（顺-9,顺-12-十八碳二烯酸）（0、20、40、80、120μmol/L）对奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells,BMECs）乳脂和乳蛋白合成相关基因表达的影响。通过MTT法检测细胞活力,利用甘油... 该文主要研究了添加不同浓度的亚油酸（顺-9,顺-12-十八碳二烯酸）（0、20、40、80、120μmol/L）对奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells,BMECs）乳脂和乳蛋白合成相关基因表达的影响。通过MTT法检测细胞活力,利用甘油三酯试剂盒检测BMECs内甘油三酯（triglyceride,TAG）的合成量,实时荧光定量PCR检测乳脂和乳蛋白合成相关基因的表达。结果表明：（1）添加20μmol/L的亚油酸能促进BMECs的增殖,120μmol/L的亚油酸组BMECs的相对增殖率显著低于对照组（P〈0.05）;（2）40μmol/L和80μmol/L亚油酸添加组BMECs中TAG的合成量显著高于对照组（P〈0.05）;（3）添加20μmol/L亚油酸显著上调αs1-酪蛋白（casein alpha s1 identifiers symbols,CSN1S1）和κ-酪蛋白（κ-casein,CSN3）基因的表达,而80μmol/L和120μmol/L亚油酸显著下调CSN1S1和CSN3基因的表达（P〈0.05）;（4）120μmol/L亚油酸上调了真核启始4E结合蛋白-1（eukaryotic initiation factor 4E-binding-protein-1,4EBP1）基因的表达,下调了核糖体蛋白S6激酶-1（ribosomal protein S6 kinase-1,RPS6K1）基因的表达（P〈0.05）;（5）添加20~120μmol/L亚油酸显著下调脂肪酸合酶（fatty acid synthase,FASN）、硬脂酰辅酶A去饱和酶（stearoyl-Co A desaturase,SCD）、脂肪酸结合蛋白-3（fatty acid-binding protein-3,FABP3）的基因表达（P〈0.05）;（6）20μmol/L亚油酸添加组过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARG）基因表达量显著高于对照组,而120μmol/L亚油酸组PPARG、固醇调节元件结合因子-1（sterol regulatory element binding factor-1,SREBF1）的表达量显著低于对照组（P〈0.05）。综上所述,20~40μmol/L的亚油酸对BMECs乳脂肪和乳蛋白合成有较好的促进效果。 展开更多

关键词 奶牛乳腺上皮细胞 细胞活力 αs1-酪蛋白 κ-酪蛋白 甘油三酯 乳脂合成相关基因

原文传递

牛奶中主要过敏原α(s1)-酪蛋白的生物信息学分析 被引量：4

6

作者 范安妮 佘之蕴 +2 位作者 梁宇斌 张娟 周臣清 《食品安全质量检测学报》 CAS 2016年第12期4740-4744,共5页

目的用生物信息学方法分析预测牛奶中主要过敏原α_（s1）-酪蛋白的结构与功能。方法从Genbank搜索α_（s1）-酪蛋白的氨基酸序列,采用多种生物信息学分析手段对该序列进行分析预测,包括信号肽、疏水性、跨膜区、活性位点、B细胞表位、... 目的用生物信息学方法分析预测牛奶中主要过敏原α_（s1）-酪蛋白的结构与功能。方法从Genbank搜索α_（s1）-酪蛋白的氨基酸序列,采用多种生物信息学分析手段对该序列进行分析预测,包括信号肽、疏水性、跨膜区、活性位点、B细胞表位、二级结构和三级结构。结果α_（s1）-酪蛋白的1~16位是信号肽,无跨膜区,有3个糖基化位点、5个酪蛋白激酶磷酸化位点、3个蛋白激酶C磷酸化位点。IEDB数据库预测α_（s1）-酪蛋白的抗原区分别为氨基酸的16~29、45~50、52~54、56~70、74~75、77~86、94~104、142~152、173~179和185~210,同时预测构建了α_（s1）-酪蛋白的二级结构和三级结构。结论预测得到的α_（s1）-酪蛋白结构和功能信息,可为牛奶过敏原酪蛋白的致敏机制研究及检测方法建立提供信息基础。 展开更多

关键词 过敏原 α(s1）-酪蛋白 生物信息学 牛奶

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水牛乳αs1酪蛋白多态性对类蒙特利杰克半硬质干酪品质的影响 被引量：4

7

作者 李玲 唐艳 +5 位作者 黄丽 农皓如 曾庆坤 任大喜 杨攀 冯玲 《食品安全质量检测学报》 CAS 2016年第10期3986-3991,共6页

目的分析水牛乳αs1酪蛋白(αs1-cαsein)多态性对类蒙特利杰克干酪品质的影响。方法采用反相高效液相色谱法分析不同水牛乳样品αs1-cαsein的多态性,依据αs1-cαsein多态性制成半硬质类蒙特利杰克干酪,比较其在组成、质构和色差等方... 目的分析水牛乳αs1酪蛋白(αs1-cαsein)多态性对类蒙特利杰克干酪品质的影响。方法采用反相高效液相色谱法分析不同水牛乳样品αs1-cαsein的多态性,依据αs1-cαsein多态性制成半硬质类蒙特利杰克干酪,比较其在组成、质构和色差等方面的差异。结果水牛乳αs1-cαsein存在AB和BB两种表型。以混合样品为对照制成类蒙特利杰克干酪后,在干酪成份上,BB型干酪中乳脂肪含量显著低于AB型;在质构方面,BB型干酪的硬度和弹性分别为41.21 N和6.3 1 mm,显著高于AB型(29.45 N,5.56 mm)和混合组(38.21 N,5.25 mm),此外BB型具有更高的胶粘性和咀嚼性;在色泽方面,BB型干酪的B值显著低于AB组,表明黄色程度低于AB型。结论水牛乳αs1-cαsein存在多态性,且αs1-cαsein的多态性会影响类蒙特利杰克干酪的品质。 展开更多

关键词 αs1-酪蛋白 多态性 水牛乳 类蒙特利杰克干酪

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α_(s1)-酪蛋白IgE抗原决定簇的识别 被引量：2

8

作者 丛艳君 任发政 云战友 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第17期232-235,共4页

以αs1-酪蛋白氨基酸序列为模板,错位合成αs1-酪蛋白多肽,以收集到的牛乳过敏患者血清为抗体,鉴定αs1-酪蛋白IgE抗原决定簇,分析影响致敏性的关键氨基酸,探讨牛乳过敏机理。结果表明:αs1-酪蛋白IgE抗原决定簇有5条,它们在αs1-酪蛋... 以αs1-酪蛋白氨基酸序列为模板,错位合成αs1-酪蛋白多肽,以收集到的牛乳过敏患者血清为抗体,鉴定αs1-酪蛋白IgE抗原决定簇,分析影响致敏性的关键氨基酸,探讨牛乳过敏机理。结果表明:αs1-酪蛋白IgE抗原决定簇有5条,它们在αs1-酪蛋白的定位分别为aa21～35、aa26～40、aa91～105、aa141～155、aa186～200。影响αs1-酪蛋白致敏性的关键氨基酸为组氨酸、谷氨酸、脯氨酸。说明特异性水解抗原决定簇或定点修饰过敏原氨基酸实现脱敏的方法是可行的。 展开更多

关键词 牛奶 αs1-酪蛋白 IGE 抗原决定簇

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磷脂和硫酸肝素对α_(s1)-酪蛋白淀粉样纤维沉淀形成的影响 被引量：3

9

作者 尹建元 John A.Carver +1 位作者 David C.Thorn 刘继华 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1894-1898,共5页

利用ThT荧光分析法、透射电子显微镜和圆二色光谱检测αs1-酪蛋白形成淀粉样纤维沉淀(Fibril)的动力学过程,优化了其形成条件,研究了Fibril形成的影响因素.实验结果表明,αs1-酪蛋白在65℃高温下,pH=5～5.4的范围内,加热144 h以上,可以... 利用ThT荧光分析法、透射电子显微镜和圆二色光谱检测αs1-酪蛋白形成淀粉样纤维沉淀(Fibril)的动力学过程,优化了其形成条件,研究了Fibril形成的影响因素.实验结果表明,αs1-酪蛋白在65℃高温下,pH=5～5.4的范围内,加热144 h以上,可以形成Fibril.在此过程中,αs1-酪蛋白的二级结构由α螺旋构象向β折叠构象转变.甘油磷酸胆碱D6PC可以显著地促进αs1-酪蛋白Fibril的形成,并呈浓度依赖性,说明一定条件下蛋白质可能与细胞膜的磷脂之间存在相互作用,从而导致酪蛋白二级构象的转变.硫酸肝素对αs1-酪蛋白形成Fibril无影响,说明硫酸肝素对蛋白质二级构象的影响作用因蛋白质的不同而不同,与不同蛋白质的Fibril形成机制相关. 展开更多

关键词 αs1--酪蛋白 淀粉样纤维沉淀 磷脂 硫酸肝素 ThT荧光分析法

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低聚半乳糖糖基化法降低牛乳α_(s1)-酪蛋白抗原性和免疫原性 被引量：2

10

作者 夏薇 张帆 +2 位作者 赖莹 杨铮 许美玉 《中国食物与营养》 2011年第1期50-53,共4页

用等电点沉淀法从牛乳中提取酪蛋白,根据αs-酪蛋白对尿素溶液溶解特性从酪蛋白中提取αs-酪蛋白,并用阴离子交换层析使αs1-酪蛋白与αs2-酪蛋白分离。用低聚半乳糖通过在一定条件下的美拉德反应对αs1-酪蛋白进行糖基化处理,通过竞争E... 用等电点沉淀法从牛乳中提取酪蛋白,根据αs-酪蛋白对尿素溶液溶解特性从酪蛋白中提取αs-酪蛋白,并用阴离子交换层析使αs1-酪蛋白与αs2-酪蛋白分离。用低聚半乳糖通过在一定条件下的美拉德反应对αs1-酪蛋白进行糖基化处理,通过竞争ELISA实验检测αs1-酪蛋白糖基化产物的抗原性。结果表明,该糖基化产物的抗原抗体结合常数Kd较αs1-酪蛋白上升3.7倍,即低聚半乳糖糖基化处理使αs1-酪蛋白的抗原性得到显著降低。用动物实验和非竞争ELISA实验检测αs1-酪蛋白糖基化产物的免疫原性,结果显示免疫原性降低19%,该实验证实对降低牛乳αs1-CN抗原性和免疫原性具有显著效果,为开发较理想的、切实可行的新脱敏奶粉生产技术提供了科学依据。 展开更多

关键词 αs1-酪蛋白 低聚半乳糖 糖基化 抗原性 免疫原性

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特异性水解α_(s1)-酪蛋白过敏原IgE作用表位aa 83~105的蛋白酶筛选

11

作者 刘迪 吕晓哲 +5 位作者 丛艳君 张倩倩 李邻峰 梁萌 高吉安 邱学宇 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第2期126-133,共8页

探索特异性水解α_(s1)-酪蛋白作用表位的蛋白酶筛选方法。首先通过固相合成法合成α_(s1)-酪蛋白作用表位aa 83~105,纯化鉴定后,偶联牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)制备完全抗原,然后免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,进而建立... 探索特异性水解α_(s1)-酪蛋白作用表位的蛋白酶筛选方法。首先通过固相合成法合成α_(s1)-酪蛋白作用表位aa 83~105,纯化鉴定后,偶联牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)制备完全抗原,然后免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,进而建立间接竞争酶联免疫吸附测定方法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),以α_(s1)-酪蛋白制备的单克隆抗体及建立的方法为对照。结果表明:合成作用表位的纯度在90%以上,与BSA偶联比为6.31。单克隆抗体的亚型为IgG_(1),效价可达到1∶320 000,可以与α_(s1)-酪蛋白发生特异性免疫反应,与大豆蛋白无交叉反应。建立的间接竞争ELISA,竞争抑制曲线回归方程为y=-9.22x+100.78(R^(2)=0.989 1),方法重复性、精确性均较好,检出限低于α_(s1)-酪蛋白单克隆抗体建立的方法,初步筛选到木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶水解液的抗原残留量较小,需要进一步通过体内实验验证结果。α_(s1)-酪蛋白作用表位aa 83~105 G_(1)型单克隆抗体制备成功,为新型α_(s1)-酪蛋白作用表位aa 83~105低致敏配方粉的开发,提供了ELISA检测高灵敏专用单克隆工具抗体。 展开更多

关键词 α_(s1)-酪蛋白 作用表位 单克隆抗体 抗原残留量 蛋白酶

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EGC和EGCG降低α_(s1)-酪蛋白致敏小鼠过敏反应

12

作者 郭红蕾 于晓凤 +2 位作者 张倩倩 丛艳君 李邻峰 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第11期181-189,共9页

为研究茶多酚中的表没食子儿茶素(EGC)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的抗α_(s1)-酪蛋白致敏机理,首先用α_(s1)-酪蛋白致敏BALB/C小鼠,在激发阶段用EGC和EGCG给予营养干预,以降低α_(s1)-酪蛋白致敏小鼠的过敏反应。以小鼠体内肥... 为研究茶多酚中的表没食子儿茶素(EGC)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的抗α_(s1)-酪蛋白致敏机理,首先用α_(s1)-酪蛋白致敏BALB/C小鼠,在激发阶段用EGC和EGCG给予营养干预,以降低α_(s1)-酪蛋白致敏小鼠的过敏反应。以小鼠体内肥大细胞蛋白酶含量、组胺含量、特异性抗体IgE水平、细胞因子分泌水平以及组织病理学观察为主要指标,评价EGC和EGCG降低α_(s1)-酪蛋白致敏小鼠过敏反应的能力。结果表明:EGC和EGCG均可显著降低过敏小鼠的肥大细胞蛋白酶、组胺、特异性IgE抗体和Th2型细胞因子水平。同时,组织病理学结果显示:EGC和EGCG显著降低肠、胸腺、脾脏和肺的病变程度。本研究结果可为茶多酚调控牛乳过敏原致敏反应发生的路径提供理论参考,未来可从信号转导和基因表达水平方面进一步探讨抗过敏机制。 展开更多

关键词 α_(s1)-酪蛋白 表没食子儿茶素 表没食子儿茶素没食子酸酯 抗过敏

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基于BALB/C小鼠模型评价牛乳αs1-酪蛋白的致敏特性 被引量：1

13

作者 丛艳君 刘家琦 +2 位作者 于晓凤 吕晓哲 李晔 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第3期21-30,共10页

目的:评价过敏原的过敏症机理。方法:首先通过口腔灌胃的致敏方式建立αs1-酪蛋白致敏的BALB/C小鼠模型,通过测定小鼠特异性IgE抗体水平进行模型鉴定。评价αs1-酪蛋白对小鼠肥大细胞蛋白酶、组胺、细胞因子水平的影响,并进行临床和病... 目的:评价过敏原的过敏症机理。方法:首先通过口腔灌胃的致敏方式建立αs1-酪蛋白致敏的BALB/C小鼠模型,通过测定小鼠特异性IgE抗体水平进行模型鉴定。评价αs1-酪蛋白对小鼠肥大细胞蛋白酶、组胺、细胞因子水平的影响,并进行临床和病理切片观察。结果:第42天用αs1-酪蛋白大剂量灌胃小鼠后,各组小鼠特异性IgE抗体水平显著升高,都产生不同程度的过敏症状,且中、高剂量组小鼠过敏反应强于低剂量组;以阴性小鼠为对照,致敏小鼠的肥大细胞蛋白酶、组胺、IL-4、IL-5、IL-10和IFN-γ细胞因子含量均显著升高,且随着致敏剂量的增加而增加;组织病理切片结果显示:αs1-酪蛋白中剂量和高剂量组小鼠产生了明显的炎症反应,局部肺泡隔塌陷或增厚,脾脏和胸腺中有淋巴结病灶产生,且小肠黏膜间质有炎细胞浸润。结论:基于BALB/C小鼠模型进一步揭示了αs1-酪蛋白的致敏机理。 展开更多

关键词 αs1-酪蛋白 过敏原 动物模型 致敏机理

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人TPO基因定点整合荷斯坦牛αs1-酪蛋白基因打靶载体构建

14

作者 刘庆友 李海涛 +1 位作者 崔奎青 石德顺 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2008年第2期93-98,114,共7页

应用LA-PCR的方法,从荷斯坦牛基因组中成功地扩增获得6.0 kb和1.78 kb两个基因片段,其中6.0 kb包括αs1-酪蛋白基因5′调控序列到第三内含子部分,1.78 kb包括αs1-酪蛋白基因第十二内含子到第十四内含子之间序列,作为打靶载体的同源臂;... 应用LA-PCR的方法,从荷斯坦牛基因组中成功地扩增获得6.0 kb和1.78 kb两个基因片段,其中6.0 kb包括αs1-酪蛋白基因5′调控序列到第三内含子部分,1.78 kb包括αs1-酪蛋白基因第十二内含子到第十四内含子之间序列,作为打靶载体的同源臂;从新生儿血液基因组中扩增获得5.5 kb的血小板生成素(thrombopoietin,TPO)基因组序列,包括第一内含子部分序列到3′终止子后的序列。以水牛β-酪蛋白基因的5′调控区4.4 kb片段为启动子,以pLoxp质粒为打靶载体骨架,加上同源臂片段和目的基因TPO的片段,经多步酶切-连接-转化-筛选-鉴定基因重组过程,最终建成长达25 kb的人TPO基因定点整合荷斯坦牛αs1-酪蛋白基因打靶载体,PCR和酶切分析表明载体构建正确,为研制定点整合荷斯坦牛乳腺生物反应器奠定了基础。 展开更多

关键词 血小板生成素 定点整合 αs1-酪蛋白载体

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用牛αS1-酪蛋白基因构建乳腺生物反应器表达载体的研究 被引量：2

15

作者 管晓斌 李春笑 赖松家 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第23期6140-6141,6190,共3页

牛αS1-酪蛋白基因是制备乳腺生物反应器常用的表达载体,可以指导外源基因在动物乳腺中高水平表达。对牛αS1-酪蛋白基因的结构、表达载体的各种调控元件及其研究应用进展等方面作一综述。

关键词 牛αS1-酪蛋白基因 表达载体 乳腺生物反应器 转基因

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大通牦牛三个功能基因部分序列的PCR-RFLP研究 被引量：2

16

作者 白文林 郑玉才 +3 位作者 尹荣焕 窦全林 颜卉 罗光彬 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2006年第4期13-15,共3页

采用PCR-RFLP技术,检测了大通牦牛α_(S1)-酪蛋白(α_(S1)-casein,α_(S1)-CN)基因、κ酪蛋白(κ-casein,κ-CN)基因和生长激素(growth hormone,GH)基因部分序列的遗传多态性。结果表明大通牦牛群体中α_(S1)-CN基因PCR-RFLP位点呈单态;... 采用PCR-RFLP技术,检测了大通牦牛α_(S1)-酪蛋白(α_(S1)-casein,α_(S1)-CN)基因、κ酪蛋白(κ-casein,κ-CN)基因和生长激素(growth hormone,GH)基因部分序列的遗传多态性。结果表明大通牦牛群体中α_(S1)-CN基因PCR-RFLP位点呈单态;κ-CN基因和GH基因2个PCR-RFLP位点均呈多态性。κ-CN基因PCR-RFLP位点等位基因A和B的基因频率分别为0.1117和0.8883;GH基因PCR-RFLP位点等位基因A和B的基因频率分别为0.1755和0.8255。适合性卡方检验结果表明,大通牦牛GH基因和κ-CN基因PCR-RFLP位点的基因型分布均极显著偏离Hardy-Weinberg平衡定理(P<0.01);该3个位点平均基因一致度和基因多样度分别为0.8374和0.1626。 展开更多

关键词 大通牦牛 αS1-酪蛋白基因 Κ-酪蛋白基因 生长激素基因 多态性

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牛αS1-酪蛋白基因5’-调节区的分子克隆

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作者 杨卫民 沈孝宙 +3 位作者 孙雪茵 彭红 劳为德 陈受宜 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第2期108-111,共4页

用牛αSl-酪蛋白cDNA作探针,从牛基因组文库中筛选出一段αSl-酪蛋白基因序列。由限制内切酶图谱和Southern印迹分析可以确定其中含有完整的αSl-酪蛋白基因的5’调节区。

关键词 牛 牛αS1-酪蛋白 基因 5'调节区 分子克隆

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连续3步基因抓捕构建牛αS1酪蛋白-人tPA杂合基因座

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作者 吕月蒙 吴晓洁 +3 位作者 周艳荣 熊福银 林艳丽 陈红星 《生物技术通讯》 CAS 2011年第6期796-800,共5页

目的:构建一个利用牛αS1酪蛋白基因座完整的上下游调控序列指导人组织型纤溶酶原激活剂(tPA)基因组序列在乳腺特异性高效表达的牛αS1酪蛋白-人tPA杂合基因座。方法:采用连续3步基因抓捕的方法。首先,以pBR322载体作为骨架,插入预先无... 目的:构建一个利用牛αS1酪蛋白基因座完整的上下游调控序列指导人组织型纤溶酶原激活剂(tPA)基因组序列在乳腺特异性高效表达的牛αS1酪蛋白-人tPA杂合基因座。方法:采用连续3步基因抓捕的方法。首先,以pBR322载体作为骨架,插入预先无痕连接在一起的6个同源臂,构成能连续进行3次基因抓捕的抓捕载体;然后,在大肠杆菌内利用Red同源重组系统介导的缺口修复技术,第一步从含牛αS1酪蛋白基因座的细菌人工染色体(BAC)上亚克隆9 kb的牛αS1酪蛋白基因3'端侧翼序列到抓捕载体上,第二步从人tPA BAC上亚克隆17 kb的从起始密码子(ATG)到终止密码子(TGA)的人tPA基因组序列,第三步从牛αS1酪蛋白BAC上亚克隆20 kb的牛αS1酪蛋白基因5'端完整侧翼序列,并使这3个基因片段在抓捕载体上自动无痕地连接在一起,形成一个长约46kb的牛αS1酪蛋白-人tPA杂合基因座。结果:经过PCR扩增、限制性内切酶消化和序列测定验证,构建的杂合基因座中,原牛αS1酪蛋白基因组编码序列从起始密码子到终止密码子被人tPA基因组序列精确置换。结论:连续三步基因抓捕构建杂合基因座乳腺表达载体的技术,为乳腺生物反应器高效表达大载体的制备提供了探索性研究。 展开更多

关键词 杂合基因座 细菌人工染色体 牛αS1酪蛋白 组织型纤溶酶原激活剂

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青海本地黄牛乳中一种新α_(S1)酪蛋白等位基因 被引量：8

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作者 张才骏 王勇 +1 位作者 卢福山 龙成林 《青海畜牧兽医杂志》 1999年第5期7-9,共3页

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对８４ 头青海本地黄牛乳汁中αＳ１酪蛋白（αＳ１ＣＮ） 进行分析时，发现一种新的αＳ１ＣＮ 基因Ｅ，它以杂合子的方式存在，基因频率为０００６０ 。

关键词 青海本地黄牛 牛乳 酪蛋白 αs1-CN^E 等位基因

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青海本地黄牛乳中发现α_(s1)-CN^D等位基因 被引量：1

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作者 张才骏 王勇 卢福山 《动物科学与动物医学》 1999年第5期10-11,共2页

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对６４头青海本地黄牛乳汁中αｓ１－酪蛋白（αｓ１－ＣＮ）进行分析时，发现αｓ１－ＣＮＤ等位基因。它以杂合子形式存在，基因频率为０．０１５６．

关键词 αs1-酪蛋白 等位基因 牛乳 青海本地黄牛

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