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猪三种细胞因子基因的克隆与序列测定 被引量：3
1
作者 陈国华 孙世铎 +3 位作者 景志忠 罗启慧 窦永喜 蒙学莲 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第6期432-436,共5页
利用RTPCR技术,从植物凝集素(PHA)、脂多糖(LPS)诱导的猪外周血淋巴细胞(PBMC)中成功地克隆了IL2、IL4、IFNα1基因,诱导后第6～24h细胞因子转录基因量最丰富;诱导剂LPS和PHA联合使用的效果优于LPS或PHA单独使用的诱导效果。序列测定与... 利用RTPCR技术,从植物凝集素(PHA)、脂多糖(LPS)诱导的猪外周血淋巴细胞(PBMC)中成功地克隆了IL2、IL4、IFNα1基因,诱导后第6～24h细胞因子转录基因量最丰富;诱导剂LPS和PHA联合使用的效果优于LPS或PHA单独使用的诱导效果。序列测定与分析表明,克隆的IL2、IL4和IFNα1基因与相应的参考序列的同源性分别是98.5%、99.0%和97.6%。 展开更多
关键词 克隆 猪 白介素-2基因 白介素-4基因 α1-干扰素基因 脂多糖 植物凝集素
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腺相关病毒介导人α1干扰素基因在淋巴细胞中表达的研究 被引量：1
2
作者 林锋 贾杰 +1 位作者 陈智 邱平 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2003年第3期169-171,共3页
为了探讨人α1干扰素基因和腺相关病毒重组体pWP8A -hIFNα1在淋巴细胞中表达的情况 ,将pWP8A-hIFNα1以磷酸钙转染法转入淋巴细胞 ,于转染后 2 4小时、48小时、72小时和 1周分别提取细胞总DNA、RNA和蛋白质 ;经PCR、Southernblot,逆转... 为了探讨人α1干扰素基因和腺相关病毒重组体pWP8A -hIFNα1在淋巴细胞中表达的情况 ,将pWP8A-hIFNα1以磷酸钙转染法转入淋巴细胞 ,于转染后 2 4小时、48小时、72小时和 1周分别提取细胞总DNA、RNA和蛋白质 ;经PCR、Southernblot,逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)和酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测该重组体在淋巴细胞中表达人α1干扰素情况。结果显示 ,pWP8A -hIFNα1转染淋巴细胞后 2 4小时检测到细胞内含人α1干扰素mRNA和蛋白质 ,并持续表达 1周以上。 展开更多
关键词 腺相关病毒 人α1干扰素基因 淋巴细胞 表达 基因治疗
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腺相关病毒与人α_1干扰素基因重组体的构建
3
作者 林锋 贾杰 +1 位作者 陈智 邱平 《中国热带医学》 CAS 2004年第1期32-33,34,共3页
目的　构建腺相关病毒载体 (pWP8A)与人α1 干扰素 (hIFNα1 )基因重组体。　方法　用多聚酶链反应 (PCR)方法扩增获得hIFNα1 基因 ;以T A克隆方法将PCR扩增hIFNα1 基因亚克隆到PCR2 1质粒中 ,产生PCR2 1-hIFNα1 ;用EcoRI酶切PCR2 ... 目的　构建腺相关病毒载体 (pWP8A)与人α1 干扰素 (hIFNα1 )基因重组体。　方法　用多聚酶链反应 (PCR)方法扩增获得hIFNα1 基因 ;以T A克隆方法将PCR扩增hIFNα1 基因亚克隆到PCR2 1质粒中 ,产生PCR2 1-hIFNα1 ;用EcoRI酶切PCR2 1-hIFNα1 后回收hIFNα1 基因片断 ,将此片断连接到pWP8A的EcoRI位点上 ,构建重组体pWP8A-hIFNα1 ;pWP8A -hIFNα1 转化JM10 9大肠杆菌扩增 ,hIFNα1 基因经测序鉴定符合Genebank中hIFNα1 序列 ,并用BamHI酶和XbalI酶双酶切鉴定hIFNα1 基因插入方向。　结果　经PCR扩增获得 5 67bphIFNα1 基因 ;构建重组体pWP8A -hIFNα1 ,经测序证实pWP8A -hIFNα1 中的hIFNα1 与Genebank中hIFNα1 序列相同 ,用BamHI酶和XbalI酶双酶切鉴定hIFNα1 基因插入方向正确的重组体pWP8A -hIFNα1 。　结论　成功构建腺相关病毒载体 (pWP8A)与人α1 干扰素(hIFNα1 )基因的重组体。 展开更多
关键词 腺相关病毒 人α1干扰素基因 基因重组 真核细胞 基因治疗 转基因载体
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