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一种带增强子的原核高效表达载体的构建及初步应用 被引量：34
1
作者 罗文新 张军 +5 位作者 杨海杰 李少伟 谢小燕 逄淑强 李少菁 夏宁邵 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期578-581,共4页
构建的 pTO T7大肠杆菌高效融合表达载体 ,调控序列中有一个Ω序列和一个T7启动子串联 ;多克隆位点 (MCS)包括 8个常用酶切位点 ;可进行融合表达或者非融合表达 ,根据不同的需要加以选择 ;融合蛋白N端为T7g10的 12个起始氨基酸 ,C端为Hi... 构建的 pTO T7大肠杆菌高效融合表达载体 ,调控序列中有一个Ω序列和一个T7启动子串联 ;多克隆位点 (MCS)包括 8个常用酶切位点 ;可进行融合表达或者非融合表达 ,根据不同的需要加以选择 ;融合蛋白N端为T7g10的 12个起始氨基酸 ,C端为His标签 ;含kan抗性基因作为选择标记。将增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因克隆至 pTO T7载体 ,在E .coli中的表达结果表明 ,融合EGFP达到菌体总蛋白量的 5 0 %以上 ,90 %以上的融合蛋白以可溶性形式存在 ,融合后的EGFP仍保持原有的荧光性质。与同时构建的不含Ω序列的 pT T7载体的表达产量的比较研究结果表明 ,Ω序列在 pTO T7载体中能显著提高表达效率。 展开更多
关键词 增强子 原核细胞 表达载体 PTO-T7 ω序列
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抗对硫磷基因工程四价抗体在大肠杆菌中高效表达与鉴定 被引量：5
2
作者 张付凯 乔亚奇 +2 位作者 王磊 兰丽平 潘家荣 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期118-122,175,共6页
为提高抗对硫磷基因工程四价抗体在大肠杆菌中可溶性表达量,本研究利用克隆技术得到四价抗体基因sc-sa,将该融合基因连接至表达载体pTO-T7的Ω序列和T7启动子下游,构建成功的表达质粒导入大肠杆菌OrigamiB(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE... 为提高抗对硫磷基因工程四价抗体在大肠杆菌中可溶性表达量,本研究利用克隆技术得到四价抗体基因sc-sa,将该融合基因连接至表达载体pTO-T7的Ω序列和T7启动子下游,构建成功的表达质粒导入大肠杆菌OrigamiB(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot鉴定表达产物,Ni亲和层析纯化蛋白,间接非竞争ELISA法测定该四价抗体的亲和力。结果表明在大肠杆菌OrigamiB(DE3)中表达分子量约为46kDa的四价抗体,0.1mmol/L的IPTG在30℃条件下诱导原核表达,外源蛋白占菌体总蛋白含量近50%,纯化后可溶性蛋白纯度在90%以上,ELISA结果显示该抗体与对硫磷结合呈阳性,抗体效价在1∶1×106以上,亲和常数为6.84×108L/mol。与母源抗体和相应单链抗体相比,利用pTO-T7载体四价抗体在大肠杆菌OrigamiB(DE3)中可实现高效表达,且抗体效价和亲和力均得到进一步提高。 展开更多
关键词 ω序列 四价抗体 原核表达
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Ω序列和3'poly(dA)长度与基因表达效率的关系 被引量：10
3
作者 毛立群 郭三堆 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1998年第12期1166-168,共1页
基因表达效率是由基因的转录水平和翻译水平决定的。提高基因的表达效率可以是在转录水平上应用转录效率高的启动子（如３５Ｓ启动子）增强转录，也可以是在翻译水平上应用病毒的引导序列和３′ｐｏｌｙ（Ａ）增强翻译。来自烟草花叶病... 基因表达效率是由基因的转录水平和翻译水平决定的。提高基因的表达效率可以是在转录水平上应用转录效率高的启动子（如３５Ｓ启动子）增强转录，也可以是在翻译水平上应用病毒的引导序列和３′ｐｏｌｙ（Ａ）增强翻译。来自烟草花叶病毒（ＴＭＶ）ＲＮＡ５′非翻译区的引... 展开更多
关键词 表达载体 ω序列 poly(dA) GUS基因 瞬间表达
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二阶中立型逐段常变量微分方程的伪ω周期解
4
作者 张克玉 《山东教育学院学报》 2009年第1期65-68,共4页
给出了二阶中立型逐段常变量微分方程d2/dt2(x(t)+p(t)x(t-1))=qx(2[t+1/2]+g(t,x(t),x([t]))d2/dt2(x(t)+p(t)x(t-1))=qx(2[t+1/2]+f(t)的伪ω周期解存在唯一性的充分条件.
关键词 伪ω周期解 伪ω周期序列 逐段常变量 中立型微分方程
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逐段常变量微分方程的伪ω周期解(英文)
5
作者 张克玉 吴立伟 《山东教育学院学报》 2010年第1期62-63,共2页
给出了逐段常变量微分方程y(t)=A(t)y(t)+B(t)y([t])+f(t)的伪ω周期解存在唯一性的充分条件。
关键词 伪ω周期解 伪ω周期序列 逐段常变量 微分方程
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向量测度的算子分解
6
作者 黄雪冰 施慧华 《华侨大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2014年第2期238-240,共3页
利用向量测度与算子的一一对应关系,给出可列可加测度的算子表示,并进一步由推广的YosidaHewitt定理证明定义在B(Ω,Σ)=span{χA,A∈Σ}上的取值于自反空间X的算子,可唯一分解成w*-范序列连续算子与纯连续算子之和.
关键词 ω*-范序列 连续算子 纯连续算子 向量测度 Yosida-Hewitt定理
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