急性脑缺血大鼠海马和齿状回神经元β-NGF与NGFRs基因表达变化对其生存影响的研究 被引量：6

1

作者 崔瑾 于士柱 +5 位作者 张天林 管欣琴 安同岭 王虔 李庆有 杨露春 《现代神经疾病杂志》 2003年第3期137-141,共5页

目的探讨急性脑缺血时大鼠海马各区及齿状回神经元β-神经生长因子(β-nervegrowthfactor,β-NGF)及其受体trkA2和p75NGFR基因表达变化对神经元生存的影响。方法采用mRNA原位杂交、免疫组织化学染色和原位细胞凋亡检测等方法,分别观察... 目的探讨急性脑缺血时大鼠海马各区及齿状回神经元β-神经生长因子(β-nervegrowthfactor,β-NGF)及其受体trkA2和p75NGFR基因表达变化对神经元生存的影响。方法采用mRNA原位杂交、免疫组织化学染色和原位细胞凋亡检测等方法,分别观察各缺血组和对照组大鼠海马各区及齿状回神经元上述3种基因表达的变化和神经元凋亡状况。结果正常大鼠海马和齿状回神经元均表达β-NGF、trkA2和p75NGFRmRNA及蛋白,无神经元凋亡。急性脑缺血后,海马CA1、CA2和CA3区均出现大量凋亡的神经元,其密度均明显高于同组CA4区及齿状回(P<0.01)。缺血组海马CA1、CA2和CA3区神经元β-NGF、trkA2和p75NGFRmRNA及蛋白的表达水平均低于对照组的对应区域(P<0.05或P<0.01),它们的表达水平彼此间均呈正相关(r=0.213～0.835,P<0.05～P<0.0001),并均与对应区域的凋亡神经元密度呈负相关(r=?0.551～?0.823,P<0.0001)。缺血组CA4区及齿状回神经元β-NGF及其受体的表达无显著变化,且与凋亡无相关关系。结论β-NGF以自分泌和(或)旁分泌方式发挥神经元保护作用,β-NGF可能对其两种受体的表达具有正性诱导作用,缺血引起的β-NGF及其两种受体表达减少可能是导致对缺血敏感的海马CA1、CA2和CA3区神经元凋亡的重要因素。 展开更多

关键词 急性脑缺血 海马 齿状回神经元 β-ngf ngfRs 基因表达

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人β-NGF基因的体外扩增、克隆及其序列的分析 被引量：4

2

作者 韩晓枫 张澜生 朱寿彭 《苏州医学院学报》 1999年第12期1271-1273,共3页

目的　对人β－ ＮＧＦ基因进行体外扩增和克隆及其序列分析，为其在真核细胞中的表达及其临床应用打下基础。方法　本实验设计并合成一对特异性引物，采用聚合酶链反应分别从人脑ｃＤＮＡ 和人睾丸ｃＤＮＡ 以及人脑基因组ＤＮＡ中扩... 目的　对人β－ ＮＧＦ基因进行体外扩增和克隆及其序列分析，为其在真核细胞中的表达及其临床应用打下基础。方法　本实验设计并合成一对特异性引物，采用聚合酶链反应分别从人脑ｃＤＮＡ 和人睾丸ｃＤＮＡ 以及人脑基因组ＤＮＡ中扩增出β－ 神经生长因子（β－ ＮＧＦ）基因，并和Ｔ４ 载体相连接，经筛选得到人β－ ＮＧＦ克隆，并用Ｓａｎｇｅｒ 双脱氧末端终止法进行序列分析。结果　凝胶电泳显示在预期的位置出现阳性条带。 展开更多

关键词 克隆 序列分析 β-ngf 基因 体外扩增

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人β-NGF基因在COS-7细胞中的表达及其生物学活性的研究 被引量：4

3

作者 韩晓枫 张澜生 +2 位作者 缪竞诚 周■ 朱寿彭 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期310-312,共3页

目的研究人β-神经生长因子(β-NGF)cDNA在真核细胞中的表达及其表达产物的活性。方法将质粒pGEM-β-NGF进行酶切并回收β-NGF cDNA片段，构建重组真核表达载体pcDNA3-β-NGF。利用脂质体Lipofectamine方法转染COS-7细胞，对阳性克隆CO... 目的研究人β-神经生长因子(β-NGF)cDNA在真核细胞中的表达及其表达产物的活性。方法将质粒pGEM-β-NGF进行酶切并回收β-NGF cDNA片段，构建重组真核表达载体pcDNA3-β-NGF。利用脂质体Lipofectamine方法转染COS-7细胞，对阳性克隆COS-7细胞的mRNA和培养上清分别进行Northern blot分析和观察对PC12细胞突起生长的作用。结果β-NGF基因在COS-7细胞中获得表达。阳性克隆COS-7细胞培养上清能够促进PC12细胞突起生长。结论目的基因在COS-7细胞中成功表达β-NGF蛋白，并具有良好的生物学活性。 展开更多

关键词 神经生长因子 基因克隆 生物学活性 基因表达 COS-T细胞

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^(125)Ⅰ示踪研究β-NGF对血脑屏障的通透性 被引量：1

4

作者 朱寿彭 韩晓枫 张澜生 《同位素》 CAS 2002年第2期65-68,共4页

从胎儿脑中提取β-NGF,采用透析和离子交换纤维素层析法分离得到β-NGF提取物,并用SDS-PAGE电泳测得β-NGF相对分子量为13kD,用等电聚焦电泳测得β-NGF等电点分别为9.0、9.2和9.3;通过对PC12细胞培养观察到β-NGF可促进PC12细胞的生长... 从胎儿脑中提取β-NGF,采用透析和离子交换纤维素层析法分离得到β-NGF提取物,并用SDS-PAGE电泳测得β-NGF相对分子量为13kD,用等电聚焦电泳测得β-NGF等电点分别为9.0、9.2和9.3;通过对PC12细胞培养观察到β-NGF可促进PC12细胞的生长。动物实验结果表明,静脉注入^(125)I-β-NGF后15min时,有(2.41±0.12)％的摄入量可透过血脑屏障;30min时,进入脑组织中的^(125)I-β-NGF即可增至(4.20±0.07)％。这为开展β-NGF的临床治疗应用提供了科学依据。 展开更多

关键词 β-ngf 血脑屏障 通透性 碘125 标记 放射性同位素 神经生长因子 神经系统疾病 治疗

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定向诱导小鼠原始生殖细胞向肝细胞分化的研究 被引量：3

5

作者 刘晓萍 高英茂 邴鲁军 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期650-654,共5页

目的探索诱导小鼠原始生殖细胞向肝细胞定向分化的最佳条件。方法分离提取小鼠的原始生殖细胞,体外培养扩增后,接种到6孔培养板中。向不同孔中分别加入不同浓度的bFGF、EGF、-βNGF、RA、肝细胞提取液和与胎肝组织分隔培养,进行诱导分... 目的探索诱导小鼠原始生殖细胞向肝细胞定向分化的最佳条件。方法分离提取小鼠的原始生殖细胞,体外培养扩增后,接种到6孔培养板中。向不同孔中分别加入不同浓度的bFGF、EGF、-βNGF、RA、肝细胞提取液和与胎肝组织分隔培养,进行诱导分化。用靛青绿摄入试验和α-1-抗胰蛋白酶(AAT)、白蛋白(ALB)免疫细胞化学染色鉴定原始生殖细胞向肝细胞分化的状况。结果与胎肝组织分隔培养2 d,可见原始生殖细胞向肝样细胞分化,分化细胞呈圆形和星形,圆形细胞多呈簇状,可以摄入靛青绿呈绿色,并呈AAT和ALB免疫阳性着色,培养12 d时分化率达80%。肝细胞提取液也可诱导原始生殖细胞向肝样细胞分化,12 d时分化率达70%以上;0.5 g/L和1 g/L的肝细胞提取液的诱导分化率无显著差异;但是0.5 g/L提取液诱导组圆形细胞较多;而1 g/L肝提取液诱导组,星状分化细胞多。β-神经生长因子(-βNGF)诱导4 d,可见肝样细胞出现,随诱导时间延长,分化细胞增多,圆形分化细胞较多,12 d时分化率达60%以上;20μg/L和50μg/L两种浓度的-βNGF诱导分化率无显著差异。bFGF、EGF、RA诱导组未见ALB免疫反应阳性细胞。RA可以增强-βNGF的诱导分化作用,使星状细胞增多明显。结论-βNGF和肝细胞因子可诱导原始生殖细胞向肝细胞定向分化。 展开更多

关键词 原始生殖细胞 肝细胞 β-神经生长因子 碱性成纤维细胞生长因子 表皮生长因子 维甲酸 诱导分化 小鼠

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β-神经生长因子对阿尔茨海默病大鼠模型的治疗作用 被引量：1

6

作者 陈伯文 孙宝凤 +1 位作者 尚尔宁 沈惠明 《临床和实验医学杂志》 2006年第10期1477-1478,共2页

目的评价β-神经生长因子(β-NGF)对大鼠阿尔茨海默病的预防及治疗作用。方法采用大鼠每日腹腔注射D-半乳糖,连续6周给药造备大鼠痴呆模型,第4周起尾静脉注射β-NGF,每周2次。以Y型迷宫检测各组大鼠的学习记忆能力,用生化试剂盒测大脑... 目的评价β-神经生长因子(β-NGF)对大鼠阿尔茨海默病的预防及治疗作用。方法采用大鼠每日腹腔注射D-半乳糖,连续6周给药造备大鼠痴呆模型,第4周起尾静脉注射β-NGF,每周2次。以Y型迷宫检测各组大鼠的学习记忆能力,用生化试剂盒测大脑皮层匀浆的诱导型一氧化氮合酶(iNS)、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果β-NGF中、大剂量组与模型组比较,学习、记忆成绩明显提高(P<0.05)。与模型组比较,β-NGF各剂量组可剂量依赖性的显著升高中、大剂量组SOD活力(P<0.05),降低iNOS、MDA含量明显(P<0.05,P<0.01)。结论β-NGF对老年性痴呆有一定的治疗作用。其作用机理可能与降低大脑皮层iNOS、MDA含量,提高SOD活性,减轻过氧化损伤有关。 展开更多

关键词 β-ngf 老年性痴呆 INOS SOD MDA

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外源性β-NGF对骨缺损区骨形成和改建的调节作用 被引量：1

7

作者 卢萌 卓丽莉 +3 位作者 茅传青 王锦 王承勇 陈伟辉 《中国口腔颌面外科杂志》 CAS 2017年第3期193-197,共5页

目的:探讨β-NGF对骨缺损区新骨形成和改建的影响。方法:利用手术方法建立大鼠颅骨骨缺损模型,采用微渗透泵于骨缺损区局部持续导入外源性β-NGF。通过H-E染色、Gomori改良三色染色技术,检测术后3、7、14、21和28 d不同时间点骨缺损区... 目的:探讨β-NGF对骨缺损区新骨形成和改建的影响。方法:利用手术方法建立大鼠颅骨骨缺损模型,采用微渗透泵于骨缺损区局部持续导入外源性β-NGF。通过H-E染色、Gomori改良三色染色技术,检测术后3、7、14、21和28 d不同时间点骨缺损区的新生骨量,探讨β-NGF对骨缺损区新骨形成和改建的影响。应用Image-Pro Plus 6.0软件对骨缺损区中兴趣区域的新骨形成进行半定量测定,采用SPSS 19.0软件包对所得数据进行统计分析。结果:成功建立大鼠颅骨骨缺损局部持续导入β-NGF给药模型。H-E染色结果显示,导入β-NGF侧(实验组)与无β-NGF导入侧(对照组)均有新骨形成。Gomori改良三色染色结果发现,21、28 d时,实验组与对照组的新骨形成呈现明显增加,且实验组的新骨形成量显著多于对照组(P<0.05),28 d时的成熟骨量实验组显著多于对照组(P<0.05)。结论:骨缺损区导入外源性β-NGF可能会促进新骨形成与骨改建。 展开更多

关键词 β-ngf 骨缺损 骨形成 骨改建

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β-NGF对人翼状胬肉成纤维细胞增生的影响 被引量：1

8

作者 赵春明 张明昌 +1 位作者 晏雪莹 毛晓春 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期955-959,共5页

目的观察神经生长因子β(β-NGF)对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增生的影响,探讨翼状胬肉的发病机制。方法对翼状胬肉组织标本行组织块培养。待细胞生长汇合至80%后以0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA1∶1混合消化细胞,取3～5代细胞用... 目的观察神经生长因子β(β-NGF)对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增生的影响,探讨翼状胬肉的发病机制。方法对翼状胬肉组织标本行组织块培养。待细胞生长汇合至80%后以0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA1∶1混合消化细胞,取3～5代细胞用于实验。通过细胞中波形蛋白、角蛋白及α平滑肌肌动蛋白的表达鉴定培养的细胞,免疫荧光法检测HPF中β-NGF受体trkA、p75的表达,MTT法检测不同质量浓度β-NGF对HPF的作用,Westernblot及RT-PCR法半定量检测细胞核抗原(PCNA)来评估HPF的增生。结果波形蛋白、α平滑肌肌动蛋白、trkA和p75在HPF中呈阳性表达;MTT结果显示,在β-NGF作用12、24、48、72和96h后,48h为β-NGF促增生的高峰期;在不同质量浓度β-NGF(5～50ng/mL)作用下,HPF中PCNA蛋白及mRNA的表达与0和1ng/mLβ-NGF作用组之间比较差异均有统计学意义(Fprotein=24.980,P=0.000;FmRNA=64.490,P=0.000)。结论NGF可能通过结合两受体trkA、p75促进了HPF的增生。 展开更多

关键词 翼状胬肉 成纤维细胞 β-神经生长因子 TRKA P75 神经生长因子受体

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毛囊干细胞合成β-NGF及其受体p75NTR对皮肤创伤的早期修复作用 被引量：1

9

作者 林森 周红利 聂政 《成都医学院学报》 CAS 2010年第4期301-305,共5页

目的以切除全层表皮为激发条件,排除表皮干细胞对创伤部位进行愈合修复的影响,同时检测在愈合修复过程中β-NGF及其受体p75NTR的表达,探讨它们对创伤愈合以及HFSC分化和迁移的可能影响。方法随机选择36只乳鼠,利用外科微创手术制作在体... 目的以切除全层表皮为激发条件,排除表皮干细胞对创伤部位进行愈合修复的影响,同时检测在愈合修复过程中β-NGF及其受体p75NTR的表达,探讨它们对创伤愈合以及HFSC分化和迁移的可能影响。方法随机选择36只乳鼠,利用外科微创手术制作在体创伤模型,使用超薄冰冻切片和免疫组织化学技术,检测创伤修复过程中2～12 h时间点的β-NGF及其受体p75NTR对早期创伤修复作用,使用毛囊干细胞特异性标志物描述其变化。双盲半定量方法检测阳性表达强度。结果组内分析结果显示全层表皮创伤后β-NGF的变化无具有统计学意义;p75NTR的变化在2、4和6 h与其他时间点差异具有统计学意义(P<0.05)。组间分析结果显示全层表皮创伤后β-NGF与对照组相比在2～12 h差异统计学意义(P>0.05);p75NTR与对照组相比在4 h差异具有统计学意义(P<0.05)。干细胞标志物β1-integrin,CD34和K15无明显变化,但是在12h时间点有下降趋势。结论β-NGF与p75NTR的表达不一致性体现在4h,提示p75NTR可能参与创伤发生时规律性的变化。毛囊干细胞SC特异性标志物β1-integrin、CD34和K15的降低提示毛囊干细胞可能在这一时期开始发生转变。 展开更多

关键词 创伤 毛囊干细胞 β-ngf P75NTR 干细胞特异性标志物

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浓缩铀^(235)U内污染对脑内蛋白组分的作用

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作者 朱寿彭 张澜生 +1 位作者 缪竞诚 郝福荣 《中国辐射卫生》 2002年第3期134-136,共3页

目的　研究不同水平浓缩铀内污染机体时 ,对脑内主要蛋白组分的变化。方法　通过低温高速离心、离子交换层析、以及透析过程 ,从SD大白鼠脑中经分离纯化 ,获得 β -NGF ,并经PC12细胞突起生长试验鉴定其活性。结果　发现浓缩铀内污染机... 目的　研究不同水平浓缩铀内污染机体时 ,对脑内主要蛋白组分的变化。方法　通过低温高速离心、离子交换层析、以及透析过程 ,从SD大白鼠脑中经分离纯化 ,获得 β -NGF ,并经PC12细胞突起生长试验鉴定其活性。结果　发现浓缩铀内污染机体时 ,可导致 β -NGF得率降低 ,并与内污染剂量成线性关系 ,同时可导致脑内蛋白质裂解 ,从而使SDS -PAGE电泳图谱中主要蛋白组分分子量范围扩大 ,条带增加。结论　浓缩铀内污染诱发机体脑组织的放射毒理效应是可导致脑内蛋白质的裂解 ,同时可使 β 展开更多

关键词 浓缩铀 内污染 脑蛋白 β-ngf 放射毒理效应 β-神经生长因子 ^235U

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人脑神经生长因子基因的体外扩增 被引量：1

11

作者 李昌龙 陈俊杰 +3 位作者 王若菡 程汉华 林佳 杨鲁川 《华西医科大学学报》 CAS CSCD 1993年第4期353-355,共3页

作者设计并合成一对特异性DNA引物,采取聚合酶链反应技术,分别从人脑cDNA文库和人脑基因组DNA中成功地制备了神经生长因子β亚基(β-NGF)基因片段,为该基因表达载体的构建奠定了基础。

关键词 聚合酶链反应 神经生长因子 基因

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体外培养条件下毛囊bulge细胞分泌的β神经生长因子的检测

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作者 林森 杨恬 +2 位作者 曾益军 金旻 向明明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期892-895,共4页

目的定性定量地检测毛囊bu lge细胞体外培养条件下分泌的β-神经生长因子(-βnerve growth factor,β-NGF)及其与bu lge细胞生长状态的关系。方法首先使用显微操作技术剥离出原代组织,然后培养原代细胞,使用超薄切片和透射电镜技术来观... 目的定性定量地检测毛囊bu lge细胞体外培养条件下分泌的β-神经生长因子(-βnerve growth factor,β-NGF)及其与bu lge细胞生长状态的关系。方法首先使用显微操作技术剥离出原代组织,然后培养原代细胞,使用超薄切片和透射电镜技术来观察原代细胞超微结构,使用酶联免疫吸附(enzym e linked immunosorbent assay,ELISA)方法测定原代bu lge细胞分泌的β-NGF,利用免疫细胞化学(immunocytochem istry,ICC)方法检测原代细胞中β-NGF的表达。结果成功培养出原代bu lge细胞,ICC方法检测到原代培养的bu lge细胞质表达强阳性β-NGF。超薄切片和透射电镜技术能够显示出原代培养bu lge细胞的内部结构,即核质比大,细胞器较少。通过ELISA方法能够测定出原代细胞分泌的β-NGF与体外原代培养的bu lge细胞特性呈规律性变化。结论原代bu lge细胞分泌的β-NGF呈规律性表达,即生长高峰时期表达最为丰富,这与毛囊bu lge细胞的生长状态具有规律性变化有关,因此他们具有必然的联系。 展开更多

关键词 毛囊 β-ngf bulge细胞

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大鼠胚胎背部皮肤基底层β-NGF和p75NTR的表达规律

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作者 林森 连小华 杨恬 《四川解剖学杂志》 2008年第2期20-21,24,共3页

目的探讨大鼠胚胎背部皮肤β-NGF和p75NTR的表达规律。方法使用冰冻超薄切片结合免疫组织化学染色方法和显色半定量统计方法。结果大鼠胚胎背部皮肤呈现逐渐增厚的趋势,其中毛囊隆突区并不明显,但可明显观察到基底层细胞的表达变化。结... 目的探讨大鼠胚胎背部皮肤β-NGF和p75NTR的表达规律。方法使用冰冻超薄切片结合免疫组织化学染色方法和显色半定量统计方法。结果大鼠胚胎背部皮肤呈现逐渐增厚的趋势,其中毛囊隆突区并不明显,但可明显观察到基底层细胞的表达变化。结论形态学观察说明毛囊发生初期毛囊干细胞(hair follicle stem cell,HFSC)不仅仅定位于毛囊上段,β-NGF和p75NTR的表达有差异。背部皮肤基底层细胞具有干细胞特性,未分化为表皮细胞或者毛囊中的各种细胞。β-NGF和p75NTR的表达变化可能与毛囊干细胞以及毛囊的生物学特性有关。 展开更多

关键词 大鼠胚胎 背部皮肤 基底层 β-ngf P75NTR

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人β-神经生长因子前体基因的克隆及序列分析 被引量：1

14

作者 范波胜 朱涵 +4 位作者 闻公灵 章茜 王天云 柴玉荣 赵青赞 《河南实用神经疾病杂志》 2004年第4期44-45,共2页

目的 对人β-NGF前体基因的克隆及序列分析,为其在真核细胞中表达并获得具有神经生长因子活性的蛋白及临床应用打下基础。方法 从人血白细胞中提取基因组DNA,采用PCR技术,扩增出含前导肽及信号肽的β-NGF前体基因并与PUC18载体连接,经... 目的 对人β-NGF前体基因的克隆及序列分析,为其在真核细胞中表达并获得具有神经生长因子活性的蛋白及临床应用打下基础。方法 从人血白细胞中提取基因组DNA,采用PCR技术,扩增出含前导肽及信号肽的β-NGF前体基因并与PUC18载体连接,经筛选得到重组质粒PUC18-β-NGF,经酶切及序列分析进行鉴定。结果 经序列测定与Genebank中已知序列(V01511)相比较,完全一致。结论 从人白细胞DNA中获得了人β-NGF前体基因,为神经生长因子的基因治疗提供了条件。 展开更多

关键词 β-神经生长因子 前体基因 克隆 序列分析 聚合酶链反应

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脊髓损伤修复的复合透明质酸水凝胶支架的构建及其评价 被引量：1

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作者 刘东 朱冬昀 +3 位作者 彭长亮 张程 赵杰 高春正 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2017年第9期53-59,共7页

目的评价接枝Nogo-66受体(NgR)抗体和多聚左旋赖氨酸(PLL)的透明质酸(HA)水凝胶支架的作用,及转染β神经生长因子(β-NGF)基因的内皮祖细胞(EPCs)能否在支架内稳定表达外源基因。方法采用冰冻干燥法制备多孔HA水凝胶材料,将NgR抗体和PL... 目的评价接枝Nogo-66受体(NgR)抗体和多聚左旋赖氨酸(PLL)的透明质酸(HA)水凝胶支架的作用,及转染β神经生长因子(β-NGF)基因的内皮祖细胞(EPCs)能否在支架内稳定表达外源基因。方法采用冰冻干燥法制备多孔HA水凝胶材料,将NgR抗体和PLL接枝到HA支架上。体外培养EPCs,并通过携带β-NGF腺病毒转染EPCs,将EPCs与支架共培养,通过扫描电镜观察支架结构,将细胞按处理方式及培养方式分为β-NGF+组、Scaffold-β-NGF+组、β-NGF-组、Scaffold-β-NGF-组、对照组和Scaffold-对照组。采用细胞活力(CCK-8)法及HE法检测EPCs在支架上的生长情况,采用乳酸脱氢酶(LDH)-细胞毒性法检测支架的细胞毒性,采用ELISA法、Rt-PCR法和Western blotting法检测β-NGF的表达。结果制备的支架具备三维多孔结构,孔径(200±15)μm,大小较均一,EPCs在支架上的生长明显优于培养板中的生长状况(F=468 518.044,P<0.001),且随时间推移,细胞数目差异有统计学意义(F=2 678 658.138,P<0.001),支架的细胞毒性相比培养板无明显异常(F=0.680,P=0.429)。EPCs在支架上可以稳定表达β-NGF,且Scaffold-β-NGF+组mRNA及蛋白质的表达量均优于β-NGF+组(mRNA:F=651.554,P<0.001;蛋白:F=14 671.733,P<0.001)。结论 EPCs与NgR抗体-PLL复合A水凝胶支架具有良好的生物相容性。该HA水凝胶支架有望作为修复脊髓损伤的组织工程载体。 展开更多

关键词 腺病毒 β-神经生长因子 内皮祖细胞 透明质酸水凝胶支架 脊髓损伤

原文传递

人β-NGF融合蛋白真核表达载体的构建及其表达研究

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作者 蓝培基 吴良银 吴朝晖 《医学检验与临床》 2022年第4期1-5,共5页

研究构建一种能高效、稳定表达且易分离纯化人神经生长因子的pcDNA3.1-TM-FactorXa-β-NGF真核表达载体,此载体能在CHO细胞中表达具有高活性的rh-β-NGF。实验利用Trizol溶液从人胎盘中提取总RNA,利用分光光度计测定总RNA浓度后经RT-PC... 研究构建一种能高效、稳定表达且易分离纯化人神经生长因子的pcDNA3.1-TM-FactorXa-β-NGF真核表达载体,此载体能在CHO细胞中表达具有高活性的rh-β-NGF。实验利用Trizol溶液从人胎盘中提取总RNA,利用分光光度计测定总RNA浓度后经RT-PCR克隆β-NGF基因,然后添加TM-FactorXa跨膜元件,实验成功构建了pcDNA3.1-TM-FactorXa-β-NGF真核表达载体,用LipofectamineTM 2000把此载体转染CHO细胞进行表达,收集表达酶切液,透析后经DEAE-Sepharose F F和Sephadex G-75层析,经Bradford法蛋白定量后,利用Western-blot和ELISA等方法对目标蛋白进行质量检测,研究结果表明:人β-NGF融合蛋白能高效表达,细胞总蛋白中β-NGF含量进行ELISA检测结果为602μg/mL,对照组<1.15E-03μg/mL。SDS-PAGE电泳结果在13KD有明显的目标蛋白条带。此载体是一种能高效、稳定表达重组人神经生长因子,且易分离纯化的真核表达载体。实验添加TM-FactorXa跨膜元件达到可控酶切,以便更有利于目的蛋白的分离收集纯化,为下一步开展rh-β-NGF活性鉴定奠定基础。 展开更多

关键词 β-ngf 真核表达载体 CHO细胞

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人胎脑和SD大鼠脑中β—NGF的提取 被引量：1

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作者 郝福荣 张永芳 +2 位作者 苏丽萍 缪竞诚 朱寿彭 《苏州医学院学报》 2001年第6期625-628,共4页

目的　研究拟获得快速高效的β—NFG(β -神经生长因子 )纯化方法 ,并为其生物特性研究和临床应用奠定基础。方法　通过低温高速离子、离子交换层析、透析等过程 ,从人胎脑和SD大鼠脑中分离纯化 β -NGF ,用SDS -PAGE分析其分子量和纯... 目的　研究拟获得快速高效的β—NFG(β -神经生长因子 )纯化方法 ,并为其生物特性研究和临床应用奠定基础。方法　通过低温高速离子、离子交换层析、透析等过程 ,从人胎脑和SD大鼠脑中分离纯化 β -NGF ,用SDS -PAGE分析其分子量和纯度 ,并经PC12细胞突起生长试验鉴定其生物学活性。结果　从人胎脑和SD大鼠脑中分离纯化得到的 β -NGF提取物在SDS -PAGE图上均呈单一条带 ,它们都能很好地促进PC12细胞长出突起 ,且人胎脑β -NGF提取物促进PC12细胞长出突起的能力和人重组 β -NGF差别无显著性。 结论　实验获得了纯度高且生物活性良好的 β -NGF。在分离纯化的其他参数不变时 ,分离纯化过程的总时间和温度对 β -NGF的得率和生物学活性有明显影响。 展开更多

关键词 蛋白质 脑 神经生长因子 分离纯化

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β-NGF减轻H_2O_2对HUVECs的损伤 被引量：1

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作者 王刚 周敬群 《基础医学与临床》 CSCD 2015年第2期228-230,共3页

血管内皮细胞损伤被认为是导致动脉粥样硬化的重要病理原因之一,且多与氧化应激损伤有关。因此,如何保护氧化损伤后血管内皮细胞功能对于防治动脉粥样硬化等心血管疾病具有重要意义。神经生长因子β-NGF是一种多功能性神经营养因子,可... 血管内皮细胞损伤被认为是导致动脉粥样硬化的重要病理原因之一,且多与氧化应激损伤有关。因此,如何保护氧化损伤后血管内皮细胞功能对于防治动脉粥样硬化等心血管疾病具有重要意义。神经生长因子β-NGF是一种多功能性神经营养因子,可以促进血管新生且与血管内皮功能密切相关,但其对氧化损伤后血管内皮细胞的作用及其机制尚未知[1]。 展开更多

关键词 血管内皮细胞损伤 β-ngf HUVECS H2O2 致动脉粥样硬化 血管内皮细胞功能 减轻 氧化应激损伤

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β-NGF和p75NTR在鼠胚触须隆突区的表达

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作者 林森 连小华 +3 位作者 向明明 李婷婷 金旻 杨恬 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2008年第6期539-542,共4页

目的研究胚胎大鼠触须毛囊隆突区β-神经生长因子(β-NGF)、p75神经营养因子受体(p75NTR)与毛囊干细胞特异标志物的表达规律。方法冰冻超薄切片,免疫组织化学方法。结果胚胎大鼠的触须隆突区表达的β-NGF和p75NTR呈规律性变化。3种毛囊... 目的研究胚胎大鼠触须毛囊隆突区β-神经生长因子(β-NGF)、p75神经营养因子受体(p75NTR)与毛囊干细胞特异标志物的表达规律。方法冰冻超薄切片,免疫组织化学方法。结果胚胎大鼠的触须隆突区表达的β-NGF和p75NTR呈规律性变化。3种毛囊干细胞(HFSC)标志物的表达有差异,毛囊发生初期毛囊干细胞(HFSC)不仅仅定位于触须毛囊上段,整个毛囊下部3/4都有表达。结论β-NGF和p75NTR的表达变化可能与毛囊干细胞以及毛囊的生物学特性有关。 展开更多

关键词 大鼠胚胎 触须隆突区 β-神经生长因子 P75神经营养因子受体

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神经生长因子mRNA水平与睾丸生精细胞成熟和功能的关系 被引量：9

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作者 曹铮 陆璐 +6 位作者 丁斐 胡迎青 顾晓松 汤乐民 汪家政 余云开 范明 《男性学杂志》 CSCD 1996年第3期136-140,共5页

以地高辛素标记人β－神经生长因子ＤＮＡ为探针，采用原位杂交的方法观察了小鼠睾丸曲精小管中ＮＧＦｍＲＮＡ的分布情况，发现阳性细胞分布于大部分曲精小管基底至管腔的各级生精细胞中，随着生精细胞成熟度的增加，ＮＧＦｍＲＮＡ表... 以地高辛素标记人β－神经生长因子ＤＮＡ为探针，采用原位杂交的方法观察了小鼠睾丸曲精小管中ＮＧＦｍＲＮＡ的分布情况，发现阳性细胞分布于大部分曲精小管基底至管腔的各级生精细胞中，随着生精细胞成熟度的增加，ＮＧＦｍＲＮＡ表达水平逐步增加，细胞核与间质呈阴性。结果提示：ＮＧＦ在睾丸中具有自分泌与旁分泌作用的可能，不断促进精子自身的成熟与活力。 展开更多

关键词 探针 地高辛素标记 原位杂交 生精细胞 ngf

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