MR评价酪氨酸酶基因在人胚胎肾293细胞表达的实验研究 被引量：5

1

作者 元建鹏 梁碧玲 +3 位作者 钟镜联 谢榜昆 张卫东 张琳 《中华放射学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期605-610,共6页

目的　以酪氨酸酶基因作为报告基因转染人胚胎肾 (HEK) 2 93细胞 ,利用其合成大量黑色素而能被MRI检测的特性来反映基因表达的情况 ,以探索MRI评价体外细胞基因表达的方法。方法　以脂质体将含酪氨酸酶基因完全cDNA的pcDNA3tyr质粒转染... 目的　以酪氨酸酶基因作为报告基因转染人胚胎肾 (HEK) 2 93细胞 ,利用其合成大量黑色素而能被MRI检测的特性来反映基因表达的情况 ,以探索MRI评价体外细胞基因表达的方法。方法　以脂质体将含酪氨酸酶基因完全cDNA的pcDNA3tyr质粒转染到HEK2 93细胞 ,以MRT1W、T1W/SPIR(selectivepartialinversionrecovery)、T2 W序列扫描转染细胞 ,观察表达的黑色素的MR信号。应用Fontana染色和电子显微镜检测黑色素的合成 ,逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)检测酪氨酸酶基因的cDNA片段 ,以进一步验证酪氨酸酶基因的转染与表达。结果　 (1)pcDNA3tyr质粒转染进入HEK2 93细胞并在其中表达生成黑色素 ,转染 5、10、2 0 μg质粒的 10 6个细胞内生成的黑色素能够被MRI检测到并在MRT1WI、T1WI/SPIR、T2 WI呈高信号 ,转染质粒量越大 ,MRI信号强度越高。 6 2 5× 10 4个转染有 2 0 μg质粒的HEK2 93细胞仍可检测到高信号。 (2 )Fontana染色法检测到HEK2 93细胞内的黑色素颗粒 ;(3)电子显微镜观察到在HEK2 93细胞胞质内有较多的黑色素颗粒及黑色素前体 ;(4 )采用RT PCR方法检测到转染的HEK2 93细胞含酪氨酸酶基因的cDNA片段。结论　MRI能够检测到HEK2 93细胞内由外源基因表达合成的黑色素 ,说明影像学与分子生物学技术结合可以? 展开更多

关键词 MR评价 酪氨酸酶基因 人胚胎肾 293细胞 表达 实验研究 基因治疗

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多质粒共转染建立Cav1.3 L-型钙通道的研究模型 被引量：2

2

作者 强华 魏峰 +3 位作者 张爱峰 史瑞明 孙超峰 马爱群 《陕西医学杂志》 CAS 2009年第6期643-644,647,共3页

目的:提高多质粒转染效率,建立钙离子通道的研究模型。方法:在传统的脂质体转染过程中,通过不断调整细胞密度、转染质粒DNA的量,将含Cav1.3L-型钙通道相关亚基的质粒DNA转染至HEK293T细胞,采用全细胞膜片钳技术检测Cav1.3L-型钙通道的... 目的:提高多质粒转染效率,建立钙离子通道的研究模型。方法:在传统的脂质体转染过程中,通过不断调整细胞密度、转染质粒DNA的量,将含Cav1.3L-型钙通道相关亚基的质粒DNA转染至HEK293T细胞,采用全细胞膜片钳技术检测Cav1.3L-型钙通道的电流表达。结果:转染后的HEK293T细胞在荧光显微镜下可见明显的绿色荧光;全细胞膜片钳技术检测出Cav1.3 L-型钙通道电流的表达。结论:通过调整细胞密度和转染质粒DNA的量,可以提高脂质体介导多质粒共转染HEK293T细胞的效率,建立钙离子通道的研究模型。 展开更多

关键词 钙通道 L型 基因 脂质体 @人胚胎肾 293T细胞

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重组腺病毒Ad-p16的扩增及病毒滴度检测 被引量：12

3

作者 周文泉 闵志廉 +1 位作者 李莉 张玲珍 《医学研究生学报》 CAS 2001年第1期44-46,共3页

目的 :探讨高效扩增腺病毒载体的方法。　方法 :用人胚胎肾 2 93细胞株扩增重组腺病毒 ,并测定病毒滴度。　结果 :扩增得到腺病毒的滴度约为 5× 10 8PFU/ ml。　结论 :用人胚胎肾 2 93细胞株扩增重组腺病毒 ,在不进行任何浓缩时可... 目的 :探讨高效扩增腺病毒载体的方法。　方法 :用人胚胎肾 2 93细胞株扩增重组腺病毒 ,并测定病毒滴度。　结果 :扩增得到腺病毒的滴度约为 5× 10 8PFU/ ml。　结论 :用人胚胎肾 2 93细胞株扩增重组腺病毒 ,在不进行任何浓缩时可达较高病毒滴度 ,为腺病毒介导的基因转移方法提供了理论基础。 展开更多

关键词 人胚胎肾293细胞 腺病毒 检测 扩增

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鹿茸提取物对顺铂诱导人胚肾细胞损伤的影响 被引量：13

4

作者 王婧瑜 王露露 +3 位作者 李冰 刘芳芳 孙长波 张晶 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期694-697,714,共5页

建立顺铂(CDDP)诱导人胚肾成纤维细胞(HEK293)细胞损伤模型,通过MTT和LDH测定,比较不同浓度的鹿茸提取物(水提物,醇提物,乙醚提取物,氯仿提取物,乙酸乙酯提取物)诱导HEK293细胞损伤的保护作用。体外培养HEK293细胞,观察鹿茸提取物对CDD... 建立顺铂(CDDP)诱导人胚肾成纤维细胞(HEK293)细胞损伤模型,通过MTT和LDH测定,比较不同浓度的鹿茸提取物(水提物,醇提物,乙醚提取物,氯仿提取物,乙酸乙酯提取物)诱导HEK293细胞损伤的保护作用。体外培养HEK293细胞,观察鹿茸提取物对CDDP诱导HEK293细胞生长的影响,并用MTT法和LDH法检测鹿茸对CDDP诱导HEK293细胞死亡率的变化。结果表明:鹿茸提取物能够拮抗CDDP诱发的细胞损伤,具有浓度依赖性,其半数致死浓度为(0.083±0.030)mmol/L。当HEK293细胞与不同浓度鹿茸提取物共同孵育24 h,分别加入CDDP后,检测表明鹿茸水提物较其他溶剂提取物对顺铂诱导损伤的HEK293有较好的保护作用,其质量浓度为1 mg/m L时对顺铂诱导损伤的HEK293细胞的保护作用最强,细胞存活率达到62.0%(P<0.01)。鹿茸水提物对CDDP诱导人胚肾细胞损伤的抑制作用最显著,可有效保护细胞活性。 展开更多

关键词 鹿茸 顺铂 人胚胎肾成纤维细胞 细胞增殖 乳酸脱氢酶 细胞损伤

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水稻中的磷转运蛋白基因在异源表达系统中的功能分析 被引量：8

5

作者 郭强 孙淑斌 +1 位作者 YU Ling 徐国华 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期227-233,共7页

为了更好地研究植物在磷素吸收过程中的分子机制以及生物化学过程的变化,将水稻中分离得到的一个磷转运蛋白基因(OsPT6)用于互补实验。互补实验结果表明,OsPT6能够与缺失磷转运功能的酵母突变体实现互补,并在低磷条件下促进酵母突变体... 为了更好地研究植物在磷素吸收过程中的分子机制以及生物化学过程的变化,将水稻中分离得到的一个磷转运蛋白基因(OsPT6)用于互补实验。互补实验结果表明,OsPT6能够与缺失磷转运功能的酵母突变体实现互补,并在低磷条件下促进酵母突变体对磷的吸收。进一步分析表明OsPT6属于水稻Pht1家族运输蛋白基因,所编码的蛋白对磷酸盐(Pi)的吸收Km值为96μmol/L,属于高亲和的磷转运蛋白。不同的酵母转化子对不同pH环境的响应实验显示,OsPT6是一个与质子相偶联的磷运输蛋白,其吸收磷素的最佳pH为6.0。对OsPT6在人的胚胎肾细胞(HEK293)中的表达分析表明,该基因能够编码蛋白并定位于细胞膜,证明OsPT6的功能与酵母磷转运子PHO84相似,是一个定位于细胞膜上的具有吸收转运磷素作用的运输蛋白。 展开更多

关键词 水稻 磷转运蛋白 酵母 人胚胎肾细胞 功能分析

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乳酸脱氢酶基因调控对HEK-293细胞代谢和腺病毒生产的影响

6

作者 缪俊青 易小萍 +1 位作者 李祥超 庄英萍 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期3863-3875,共13页

减少乳酸积累一直是哺乳动物细胞生物技术产业的一个目标。体外培养动物细胞时,乳酸积累主要是2种代谢途径作用的综合结果:一方面,葡萄糖在乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)的作用下生成乳酸;另一方面,乳酸可通过乳酸脱氢酶B(... 减少乳酸积累一直是哺乳动物细胞生物技术产业的一个目标。体外培养动物细胞时,乳酸积累主要是2种代谢途径作用的综合结果:一方面,葡萄糖在乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)的作用下生成乳酸;另一方面,乳酸可通过乳酸脱氢酶B(LDHB)或乳酸脱氢酶C(LDHC)氧化为丙酮酸重新进入三羧酸循环。本研究综合评估了乳酸代谢关键基因调控对人胚胎肾细胞(human embryonic kidney 293 cells,HEK-293)细胞生长、代谢和人腺病毒(human adenovirus,HAdV)生产的影响,有效提高了HEK-293细胞的HAdV生产能力,并为哺乳动物细胞的乳酸代谢工程调控提供了理论基础。通过改造乳酸代谢关键调控基因(敲除ldha基因以及过表达ldhb和ldhc基因),有效改善了HEK-293细胞的物质和能量代谢效率,显著提高了HAdV的生产。与对照细胞相比,3个基因改造均能促进细胞生长,降低乳酸和氨的积累,明显增强细胞的物质和能量代谢效率,显著提高了HEK-293细胞的HAdV生产能力。ldhc基因过表达对HEK-293细胞的生长、代谢和HAdV生产调控最显著,最大细胞密度提高了约38.7%,乳酸对葡萄糖得率和氨对谷氨酰胺得率分别下降了33.8%和63.3%,HAdV滴度提高了至少16倍。此外,相比于对照细胞株,改造细胞株的腺苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)生成速率、ATP/O_(2)比率、ATP与腺苷二磷酸(adenosine diphosphate,ADP)的比值以及还原型辅酶Ⅰ(nicotinamide adenine dinucleotide,NADH)含量均有不同程度的提高,能量代谢效率明显改善。 展开更多

关键词 乳酸脱氢酶 人胚胎肾细胞(HEK-293) 物质代谢 能量代谢 腺病毒

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线性化聚乙烯亚胺介导的高效瞬时转染条件的优化

7

作者 陈玥如 赵忆宁 +3 位作者 唐悦 王婉 傅生芳 李雄雄 《国际生物制品学杂志》 CAS 2023年第3期156-160,共5页

目的优化线性化聚乙烯亚胺(polyethylenimine linear,PEI)介导的高效瞬时转染条件,提高重组蛋白在人胚胎肾(human embryonic kidney,HEK)293F悬浮细胞中的瞬时表达效率.方法构建和鉴定重组质粒增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluore... 目的优化线性化聚乙烯亚胺(polyethylenimine linear,PEI)介导的高效瞬时转染条件,提高重组蛋白在人胚胎肾(human embryonic kidney,HEK)293F悬浮细胞中的瞬时表达效率.方法构建和鉴定重组质粒增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)/pcDNA3.1+,通过瞬时转染的方式将质粒转入HEK293F细胞中进行表达.对转染试剂PEI与重组质粒的比例以及收获时间进行优化,通过倒置显微镜观察、SDS-PAGE和流式细胞仪检测目标蛋白的表达量,确定目标蛋白在HEK293F细胞中的最佳表达条件.采用优化后的条件在T500摇瓶(工作体积120 ml)中进行扩大表达.结果构建的重组质粒EGFP/pcDNA3.1+序列正确,在重组质粒浓度为3.0μg/ml、DNA∶PEI为2∶1、转染后24 h添加终浓度为2 mmol/L的丙戊酸钠、转染后4 d收获条件下,目的蛋白的表达量最高.此条件也适用于放大培养体积至T500的瞬时转染.结论优化了一种快速有效的基于PEI的瞬时转染方法来高水平表达重组蛋白. 展开更多

关键词 线性化聚乙烯亚胺 瞬时转染 人胚胎肾293F细胞 增强型绿色荧光蛋白

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镰形棘豆总黄酮抗肾癌分子作用机制的网络药理学初探 被引量：2

8

作者 彭岩枫 郭阳 +3 位作者 刘海瑞 周怡 张晓凤 张得钧 《华西药学杂志》 CAS CSCD 2022年第6期623-630,共8页

目的利用网络药理学和分子对接方法研究镰形棘豆总黄酮(TFOF)抗肾癌的分子机制。方法通过SEAdatabase、SwissTarget Prediction和TargetNet数据库预测TFOF的相关靶点。从DisGeNET、NCBI、GeneCards、OMIM和GeneCLip3数据库收集与肾癌相... 目的利用网络药理学和分子对接方法研究镰形棘豆总黄酮(TFOF)抗肾癌的分子机制。方法通过SEAdatabase、SwissTarget Prediction和TargetNet数据库预测TFOF的相关靶点。从DisGeNET、NCBI、GeneCards、OMIM和GeneCLip3数据库收集与肾癌相关的靶点,通过靶点映射确定活性化合物作用于炎症的靶点。利用Cytoscape3.7.2软件,构建药物-化合物-疾病-靶点蛋白互作网络图。借助Omicshare和Metascape开放平台对交集靶点进行GO及KEGG富集分析。检测活性化合物对TNF-α诱导特殊转染的人胚胎肾293细胞(HEK-293细胞)中NF-κB抑制率的影响,以验证其抗肿瘤活性。通过Autodock软件对核心化合物和核心靶点进行分子对接验证。结果靶点映射确定了460个镰形棘豆黄酮类化合物与炎症的共同靶点,其中,关键靶点8个(包括AKT1、TNF、SRC、VEGFA、EGFR等)。KEGG富集结果显示:TFOF的抗炎机制主要为调控cAMP信号通路、癌症中的微小RNA、VEGF信号通路等。分子对接显示核心成分与核心靶点对接良好。体外实验表明:7-羟基黄酮、2′,4′-二羟基查尔酮这两种化合物可显著抑制TNF-α活化HEK-293细胞中NF-κB的释放,具有明显的抗肾癌作用。结论镰形棘黄酮类化合物通过“多成分-多靶点-多通路”发挥抗肾癌作用,该作用可能与其对cAMP信号通路、癌症中的微小RNA、VEGF信号通路等的调控有关。 展开更多

关键词 镰形棘豆总黄酮 肾癌 镰形棘豆 网络药理学 分子对接 7-羟基黄酮 NF-ΚB 2′ 4′-二羟基查尔酮 人胚胎肾293细胞

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马尾松树皮提取物对顺铂所致体外人胚肾细胞毒性的保护作用 被引量：1

9

作者 房新苗 《当代医学》 2014年第20期16-17,共2页

目的体外研究马尾松皮提取物(PMBE)对于顺铂(CDDP)所致人胚肾细胞毒性保护作用及其作用机制。方法体外进行人胚肾细胞293(HEK293)的培养,分别应用PMBE和CDDP进行处理,并以四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)检测细胞生长情况;同时检测细胞中丙二醛(M... 目的体外研究马尾松皮提取物(PMBE)对于顺铂(CDDP)所致人胚肾细胞毒性保护作用及其作用机制。方法体外进行人胚肾细胞293(HEK293)的培养,分别应用PMBE和CDDP进行处理,并以四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)检测细胞生长情况;同时检测细胞中丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)的含量。结果低浓度(≤80mg/L)PMBE可促进HEK 293细胞的生长,提高细胞GSH的含量,降低MDA和ROS的含量;在较高浓度下可产生轻微的细胞毒性。结论低浓度PMBE对于CDDP所致肾毒性具有一定的保护作用,作用机制与其抗氧化性有关。 展开更多

关键词 顺铂 肾毒性 人胚胎肾细胞 马尾松皮提取物 抗氧化性

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持续释放人血管抑素的基因修饰化工程细胞h E/293细胞株的建立 被引量：1

10

作者 赵卉 潘静坤 +2 位作者 罗芸 田磊 薛毅珑 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2007年第12期1370-1375,共6页

目的:在人胚肾HEK293细胞中转染真核表达载体pSNA2/hEndostatin(hEndostatin,人血管抑素),建立能稳定分泌hES的基因工程细胞株.方法:将含有IL-2分泌肽的人endostatin(ES)全长cDNA插入真核表达载体pSNA2,产生重组质粒pSNA2/hEndostatin;... 目的:在人胚肾HEK293细胞中转染真核表达载体pSNA2/hEndostatin(hEndostatin,人血管抑素),建立能稳定分泌hES的基因工程细胞株.方法:将含有IL-2分泌肽的人endostatin(ES)全长cDNA插入真核表达载体pSNA2,产生重组质粒pSNA2/hEndostatin;利用阳离子脂质体介导将其转染入HEK293细胞中;用G418筛选出阳性克隆细胞,将其命名为hE/293细胞.用Western blot法检测hE/293细胞培养上清中分泌的hES蛋白.血管内皮细胞(ECV304)增殖抑制试验及鸡胚尿囊膜试验观察其分泌的hES蛋白的抗增殖活性.结果:经过双酶切和DNA测序证实构建出了含hES基因的真核表达载体.通过G418抗性筛选筛选出稳定表达hES的细胞株3株,将其命名为hE/293细胞;Western blot检测该细胞株培养上清中存在分子量为20 kDa的ES蛋白;ECV304增殖抑制试验显示,与HEK293细胞组相比,hE/293细胞组分泌的ES蛋白对bFGF刺激的血管内皮细胞增殖有明显的抑制作用(48h:0.125±0.007 vs 0.159±0.020,P<0.01;72 h:0.088±0.016 vs 0.249±0.070,P<0.01);鸡胚尿囊膜试验证实hE/293细胞分泌的ES蛋白可以抑制鸡胚尿囊膜血管生长.结论:所构建的hE/293细胞株可以稳定的分泌hES蛋白,并能抑制ECV304细胞生长及鸡胚尿囊膜血管生长. 展开更多

关键词 人内皮抑素 真核表达载体 人胚胎肾细胞 hES细胞株 WESTERN BLOT

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构建hTNF-α/293基因细胞对人结肠癌细胞增殖影响的实验研究 被引量：1

11

作者 高宇红 薛毅珑 潘静坤 《局解手术学杂志》 2013年第6期591-593,共3页

目的通过体外实验研究观察稳定转染hTNF-α/293基因细胞对人结肠癌(LOVO)细胞生长增殖影响。方法采用RT-PCR和ELISA检测稳定转染hTNF-α/293基因细胞和Hek-293细胞mRNA和蛋白表达水平。观察体外培养中,hTNF-α/293基因细胞与LOVO细胞共... 目的通过体外实验研究观察稳定转染hTNF-α/293基因细胞对人结肠癌(LOVO)细胞生长增殖影响。方法采用RT-PCR和ELISA检测稳定转染hTNF-α/293基因细胞和Hek-293细胞mRNA和蛋白表达水平。观察体外培养中,hTNF-α/293基因细胞与LOVO细胞共同培养,于不同的时间点,采用噻唑蓝MTT法检测LOVO肿瘤细胞增殖的活性。结果重组质粒转染Hek-293细胞后,Western blot检测到了hTNFα蛋白体外表达,检测表明hTNFα/293细胞组和hTNFα阳性组对共培养的LOVO细胞的增殖具有明显的抑制作用,且具有良好的量效关系。结论提示稳定转染hTNF-α/293对LOVO细胞增殖有明显抑制效应,且呈现出良好的数量依赖关系。由于TNF-α/293基因细胞可有效分泌hTNFα蛋白,并能分泌到细胞外。 展开更多

关键词 人结肠癌细胞LOVO 人肿瘤坏死因子Α 人胚胎肾细胞Hek-293

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大鼠心脏kir2.2、kir2.3通道重组质粒构建及真核表达 被引量：1

12

作者 张莉 秦桂秀 +8 位作者 张新华 刘克战 吴博威 刘清华 焦咪 范辰辰 宋瑞瑞 鲍春丽 李瑜 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期367-370,共4页

目的构建大鼠心脏kir2.2、kir2.3通道真核表达质粒,并鉴定其在人胚胎肾细胞(HEK293)中的表达。方法提取大鼠心脏组织细胞RNA,逆转录扩增kir2.2、kir2.3通道编码基因,克隆至真核表达质粒pEGFP-N1中,构建重组质粒并转染HEK293细胞,应用全... 目的构建大鼠心脏kir2.2、kir2.3通道真核表达质粒,并鉴定其在人胚胎肾细胞(HEK293)中的表达。方法提取大鼠心脏组织细胞RNA,逆转录扩增kir2.2、kir2.3通道编码基因,克隆至真核表达质粒pEGFP-N1中,构建重组质粒并转染HEK293细胞,应用全细胞膜片钳法定kir2.2、kir2.3通道电流。结果重组质粒pEGFPN1-kir2.2及pEGFP-N1-kir2.3经双酶切和测序证实构建正确,并在HEK293细胞中成功表达,且记录到相应通道电流。结论成功构建了大鼠心脏kir2.2、kir2.3通道真核表达质粒,并在HEK293细胞中成功表达。 展开更多

关键词 Kir2 2通道 Kir2 3通道 人胚胎肾细胞(HEK293) 基因表达

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分泌人内皮抑素基因工程细胞系的建立 被引量：1

13

作者 赵卉 潘静坤 +1 位作者 罗芸 薛毅珑 《中国康复理论与实践》 CSCD 2007年第5期422-424,共3页

目的建立稳定的基因工程细胞系。方法将含有白细胞介素-2(IL-2)分泌肽的人endostatin全长cDNA插入真核表达载体pSNA2.0,产生重组质粒pSNA2.0/hEndostatin,利用阳离子脂质体介导将其转染到人HEK293细胞中,G418筛选后得到阳性克隆hED/293... 目的建立稳定的基因工程细胞系。方法将含有白细胞介素-2(IL-2)分泌肽的人endostatin全长cDNA插入真核表达载体pSNA2.0,产生重组质粒pSNA2.0/hEndostatin,利用阳离子脂质体介导将其转染到人HEK293细胞中,G418筛选后得到阳性克隆hED/293,采用Western-blot检测转染细胞上清中endostatin蛋白的表达。结果hED/293细胞株培养上清中有endosta-tin蛋白的表达,分子量为20000。结论重组pSNA2.0/hEndostatin真核表达载体构建正确,转染HEK293细胞后可有效的表达人endostatin蛋白,并能分泌到细胞外。 展开更多

关键词 内皮抑素 真核表达载体 人胚胎肾细胞HEK293 细胞系

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人Kv1.3通道基因转染人胚胎肾细胞的研究

14

作者 刘坤 高翔 +3 位作者 蔡华华 田苗 陈志坚 廖玉华 《中国康复》 2007年第6期389-390,共2页

目的:建立表达人Kv1.3通道的细胞模型,为临床研究提供帮助。方法:Lipofactamine2000脂质体将人Kv1.3通道基因转染人胚胎肾细胞(HEK293),通过荧光显微镜和全细胞膜片钳技术观测人Kv1.3通道基因的表达。结果:pcDNAHKv1.3真核表达载体转染H... 目的:建立表达人Kv1.3通道的细胞模型,为临床研究提供帮助。方法:Lipofactamine2000脂质体将人Kv1.3通道基因转染人胚胎肾细胞(HEK293),通过荧光显微镜和全细胞膜片钳技术观测人Kv1.3通道基因的表达。结果:pcDNAHKv1.3真核表达载体转染HEK293细胞2 d后,荧光显微镜可观察到人Kv1.3通道表达;3 d后全细胞膜片钳技术记录到人Kv1.3通道基因编码的通道电流。结论:pcDNAHKv1.3真核表达载体转染HEK293细胞为人Kv1.3通道的研究提供良好的真核细胞表达系统和细胞模型,有利于指导治疗自身免疫性疾病新药的开发。 展开更多

关键词 人Kv1.3通道 人胚胎肾细胞 转染

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人Kv1．5通道基因转染人胚胎肾细胞的研究

15

作者 刘坤 高翔 +5 位作者 田苗 刘金平 张昌伟 水志刚 陈志坚 廖玉华 《公共卫生与预防医学》 2007年第5期6-8,共3页

目的建立表达人Kv1.5通道的细胞模型。方法采用Lipofactamine 2000脂质体将人Kv1.5通道基因转染人胚胎肾细胞(HEK293),通过荧光显微镜和全细胞膜片钳技术观测人Kv1.5通道基因的表达。结果pcDNAHKv1.5真核表达载体转染HEK293细胞2d后,荧... 目的建立表达人Kv1.5通道的细胞模型。方法采用Lipofactamine 2000脂质体将人Kv1.5通道基因转染人胚胎肾细胞(HEK293),通过荧光显微镜和全细胞膜片钳技术观测人Kv1.5通道基因的表达。结果pcDNAHKv1.5真核表达载体转染HEK293细胞2d后,荧光显微镜可观察到人Kv1.5通道表达;3d后全细胞膜片钳技术记录到人Kv1.5通道基因编码的通道电流。结论pcDNAHKv1.5真核表达载体转染HEK293细胞为人Kv1.5通道的研究提供了良好的真核细胞表达系统和细胞模型。 展开更多

关键词 人Kv1.5通道 人胚胎肾细胞 转染

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分泌肿瘤坏死因子的基因工程细胞对HepG2细胞的抑制作用

16

作者 高宇红 薛毅珑 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期944-946,共3页

目的自行建立分泌人肿瘤坏死因子α的基因工程细胞,将其与肝癌细胞共培养,观察体外培养中分泌肿瘤坏死因子hTNF/293基因细胞表达的情况及对人肝癌细胞的抑制作用。方法 (1)建立可稳定分泌人肿瘤坏死因子α/293细胞;采用RT-PCR、Western ... 目的自行建立分泌人肿瘤坏死因子α的基因工程细胞,将其与肝癌细胞共培养,观察体外培养中分泌肿瘤坏死因子hTNF/293基因细胞表达的情况及对人肝癌细胞的抑制作用。方法 (1)建立可稳定分泌人肿瘤坏死因子α/293细胞;采用RT-PCR、Western blot、ELISA和流式细胞仪等技术检测人肿瘤坏死因子表达和分泌;(2)观察体外培养中分泌肿瘤坏死因子hTNF/293基因细胞对人肝癌细胞的抑制作用,于不同的时间点,用MTT法检测490 nm下的吸光度值。结果 RT-PCR、Western blot和ELISA等技术检测表明hTNFα/293细胞组和TNFα阳性组对共培养的HepG2细胞的增殖具有明显的抑制作用,且具有良好的量效关系。结论提示TNF-α/293基因细胞可有效分泌hTNFα蛋白,并能分泌到细胞外;体外培养的人肿瘤坏死因子基因的工程细胞,所分泌肿瘤坏死因子α对人肝癌细胞增殖有明显抑制效应,且呈现出良好的数量依赖关系。 展开更多

关键词 人肝癌细胞HEPG2 人肿瘤坏死因子Α 人胚胎肾细胞-293

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TDP-43在人胚胎肾细胞中的代谢及其产物对细胞活力的影响

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作者 南一楠 孙梦茹 +1 位作者 李澎涛 华茜 《临床误诊误治》 2014年第6期105-108,共4页

目的研究TAR DNA结合蛋白43 kD(TDP-43)在人胚胎肾细胞HEK293中的代谢过程及其产物对细胞活力的影响。方法应用不同浓度十字孢碱(STS)作用于HEK293细胞,检测TDP-43含量的变化,并联合使用不同的蛋白降解通路阻滞剂研究其代谢机制,再通过... 目的研究TAR DNA结合蛋白43 kD(TDP-43)在人胚胎肾细胞HEK293中的代谢过程及其产物对细胞活力的影响。方法应用不同浓度十字孢碱(STS)作用于HEK293细胞,检测TDP-43含量的变化,并联合使用不同的蛋白降解通路阻滞剂研究其代谢机制,再通过转染外源性TDP-43研究其对细胞活力的影响。结果 STS对HEK293细胞中TDP-43蛋白含量影响不大,在较高浓度时(5、10μM)会诱导HEK293细胞产生35 kD片段。进一步研究发现这一35 kD片段是通过泛素-蛋白酶体通路降解的,且其过表达时会明显降低HEK293细胞的活力。结论过表达外源性TDP-43及其35 kD片段可对HEK293细胞活力产生抑制作用,可能是导致TDP-43相关疾病的原因。 展开更多

关键词 DNA结合蛋白质类 人胚胎肾细胞 代谢 蛋白降解 细胞活性

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甘蓝型油菜基因BnRCH转染人HEK 293A和Hela细胞的研究

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作者 万谦 刘志斌 +3 位作者 彭文珍 王健美 李旭峰 杨毅 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期710-714,共5页

本研究从植物基因在动物细胞异源表达的角度入手,采用外源基因稳定转染的方法,向人胚胎肾细胞HEK 293A和人宫颈癌细胞Hela导入了BnRCH基因,获得了HEK 293A和Hela细胞的稳定转染子.使用RT-PCR、qPCR和Western blot等方法鉴定了获得的稳... 本研究从植物基因在动物细胞异源表达的角度入手,采用外源基因稳定转染的方法,向人胚胎肾细胞HEK 293A和人宫颈癌细胞Hela导入了BnRCH基因,获得了HEK 293A和Hela细胞的稳定转染子.使用RT-PCR、qPCR和Western blot等方法鉴定了获得的稳定转染子,确认了稳定转染子的成功建立.本研究一方面说明BnRCH虽然为植物基因,却仍然能够在动物细胞中正常表达;另一方面也为开展对BnRCH基因在动物细胞中的功能研究和应用开发建立了平台.同时,使用免疫细胞化学法和绿色荧光蛋白质(GFP)示踪法分析了BnRCH蛋白质在Hela细胞中的定位,结果表明:BnRCH蛋白质在Hela细胞中均匀分布,实现了对BnRCH基因在Hela细胞中作用的初步探索. 展开更多

关键词 BnRCH 人胚胎肾细胞HEK 293A 人宫颈癌细胞Hela 瞬时转染 稳定转染

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分泌人肿瘤坏死因子α的基因工程细胞系的建立

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作者 高宇红 薛毅珑 +2 位作者 刘建伟 崔忻 罗芸 《现代肿瘤医学》 CAS 2008年第3期345-348,共4页

目的:建立稳定的基因工程细胞系。方法:将含有人肿瘤坏死因子α(hTNFα)全长cDNA插入表达载体pSNAV2.0,产生重组质粒pSNAV2.0-TNFα,利用阳离子脂质体介导将其转染到人HEK-293细胞中,G418筛选阳性克隆hTNF/293,采用Western blot检测转... 目的:建立稳定的基因工程细胞系。方法:将含有人肿瘤坏死因子α(hTNFα)全长cDNA插入表达载体pSNAV2.0,产生重组质粒pSNAV2.0-TNFα,利用阳离子脂质体介导将其转染到人HEK-293细胞中,G418筛选阳性克隆hTNF/293,采用Western blot检测转染细胞上清中hTNF蛋白的表达。结果:通过SalⅠ和EcoRⅠ双酶切、PCR及测序鉴定证明:在质粒pSNAV2.0中插入片段正确。采用RT-PCR和Western blot法检测表明HEK-293细胞培养上清中有hTNFα蛋白表达,分子量为17KDa。结论:成功构建重组质粒pSNAV2.0-TNFα,真核表达载体构建正确,转染HEK-293细胞后可有效分泌hTNFα蛋白,并能分泌到细胞外。 展开更多

关键词 人肿瘤坏死因子Α 真核表达载体 人胚胎肾细胞HEK-293 细胞系

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PSNAV2.0-TNFα重组质粒的构建及其在体外的表达

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作者 高宇红 薛毅珑 +1 位作者 刘建伟 崔忻 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第42期8528-8531,共4页

目的:在前期微囊化基因工程细胞制备平台的基础上,构建分泌型人肿瘤坏死因子α的真核表达载体PSNAV2.0-TNFα重组质粒,并鉴定其蛋白的体外瞬时表达,为进一步利用该基因进行微囊化细胞移植治疗和改善疾病奠定基础。方法:实验于2006-06/20... 目的:在前期微囊化基因工程细胞制备平台的基础上,构建分泌型人肿瘤坏死因子α的真核表达载体PSNAV2.0-TNFα重组质粒,并鉴定其蛋白的体外瞬时表达,为进一步利用该基因进行微囊化细胞移植治疗和改善疾病奠定基础。方法:实验于2006-06/2007-05在解放军总医院老年医学研究所细胞生物学实验室完成。①以含有人肿瘤坏死因子αcDNA序列的质粒为模板,通过PCR扩增获得人肿瘤坏死因子α基因片段;将其定向插入真核表达载体PSNAV2.0中,获得重组质粒PSNAV2.0-TNFα。采用SalⅠ和EcoRⅠ双酶切法、PCR法及插入片段序列测定法鉴定该质粒。②利用阳离子脂质体介导法,将其转染到人胚胎肾细胞HEK-293细胞中,构建可持续分泌人肿瘤坏死因子α的基因工程细胞,采用RT-PCR法和Western blot法检测转染细胞培养上清液中人肿瘤坏死因子蛋白的体外瞬时表达。结果:①通过SalⅠ和EcoRⅠ双酶切、PCR及测序鉴定证明:在HEK-293中插入片段正确。②采用RT-PCR和Western blot法检测表明HEK-293细胞培养上清中有人肿瘤坏死因子α蛋白,Mr17000。结论:成功构建了重组质粒PSNAV2.0-TNFα真核表达载体,转染HEK-293细胞后可有效分泌人肿瘤坏死因子α蛋白,并能分泌到细胞外。 展开更多

关键词 人肿瘤坏死因子Α 真核表达载体 人胚胎肾细胞HEK-293

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