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高通量端粒酶抑制剂筛选模型融合表达载体的构建及转化
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作者 王卫国 曹莹 +5 位作者 张群 张慧敏 刘晓萍 孔焕育 庞建新 吴曙光 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第13期1930-1933,共4页
目的构建含不同结构域的人端粒酶逆转录酶(hTERT)酵母三杂交系统融合蛋白表达载体并转化酵母。方法采用PCR法从pCLXSN-hTERT质粒中提取不同的hTERTcDNA片段,纯化分离定向克隆到pYESTrp3质粒,构建包含不同hTERT蛋白结构域的编码序列的重... 目的构建含不同结构域的人端粒酶逆转录酶(hTERT)酵母三杂交系统融合蛋白表达载体并转化酵母。方法采用PCR法从pCLXSN-hTERT质粒中提取不同的hTERTcDNA片段,纯化分离定向克隆到pYESTrp3质粒,构建包含不同hTERT蛋白结构域的编码序列的重组质粒,转化大肠杆菌,经PCR、酶切、测序鉴定,将阳性重组质粒转化酵母菌,进行毒性和自激活检验。结果经过测序验证,重组融合蛋白表达载体pYESTrp3-hTERT构建成功,转化酵母无毒性和自激活性。结论成功构建能用于酵母三杂交系统的融合蛋白表达载体,可于酵母三杂交系统筛选端粒酶抑制剂及hTERT和hTR间的相互作用。 展开更多
关键词 HTERT 酵母三杂交 端粒酶抑制剂
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