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番茄2个ERF-B1亚族转录因子基因的克隆及其对生物和非生物胁迫响应 被引量:12
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作者 王雅慧 李彤 +3 位作者 黄莹 刘洁霞 王枫 熊爱生 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1893-1904,共12页
为进一步研究番茄ERF转录因子调控植物抗逆的分子机理,本研究以番茄浙杂-301为试验材料,分别克隆获得2个乙烯反应元件结合蛋白基因SlERF83和SlERF109,并对其进行序列及表达分析。结果表明,番茄SlERF83和SlERF109基因分别含有678 bp和669... 为进一步研究番茄ERF转录因子调控植物抗逆的分子机理,本研究以番茄浙杂-301为试验材料,分别克隆获得2个乙烯反应元件结合蛋白基因SlERF83和SlERF109,并对其进行序列及表达分析。结果表明,番茄SlERF83和SlERF109基因分别含有678 bp和669 bp的开放阅读框,编码225和222个氨基酸,各含有1个保守的AP2结构域,属于亲水性蛋白。进化分析表明,这2个ERF转录因子均属于AP2/ERF家族中ERF亚族的B1组。SlERF83和SlERF109三级结构都含有1个α-螺旋和3个β-折叠。酵母单杂交及β-半乳糖苷酶活性测定结果证明SlERF83转录因子可以与GCC-box结合。番茄2个ERF蛋白启动子含有多种逆境相关的顺式作用元件。采用荧光定量PCR检测SlERF83和SlERF109在非生物和生物胁迫下的表达,结果表明,高盐和干旱胁迫下,SlERF83和SlERF109基因的表达均被抑制;水杨酸处理能够诱导SlERF83和SlERF109基因的表达;茉莉酸甲酯处理下SlERF83表达水平提高,SlERF109表达量降低;番茄黄化曲叶病毒侵染下,SlERF83和SlERF109基因的表达均被抑制。SlERF83和SlERF109转录因子可能参与了番茄对生物及非生物胁迫的响应过程。本研究结果为进一步深入开展ERF转录因子调控番茄抗逆分子机制研究提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 番茄 转录因子 乙烯反应元件结合蛋白 生物和非生物胁迫 酵母单杂交 响应
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Functional Characterization of the Promoter and Second Intron of CUM1 During Flower Development in Cucumber(Cucumis sativus L.) 被引量:9
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作者 GU Ran LIU Xiaofeng +4 位作者 ZHAO Wensheng YAN Shuangshuang SUN Linhan WU Binning ZHANG Xiaolan 《Horticultural Plant Journal》 SCIE 2018年第3期103-110,共8页
The characterization of flower specific promoter is critical during flower development by cucumber transformation technology.AGAMOUS(AG)is an organ identity gene that is required for carpel and stamen development in A... The characterization of flower specific promoter is critical during flower development by cucumber transformation technology.AGAMOUS(AG)is an organ identity gene that is required for carpel and stamen development in Arabidopsis.The promoter and second intron of AG contain multiple regulatory elements that confer proper spatial and temporal expression.Cucumber is an important vegetable with unisexual flowers.Cucumber MADS-box 1(CUM1)is the AG homolog in cucumber,belonging to the eu AG lineage along with AG.In situ hybridization showed that CUM1 was specifically expressed in the stamens and carpels of cucumber.GUS staining indicated that the second intron of CUM1 confers stamen-specific expression,while the promoter of CUM1 drives both stamen-and carpel-specific expression during the early stages of flower development,but is restricted to carpel-and connectivum-specific expression during the late stages of flower development.Furthermore,a yeast one-hybrid assay demonstrated that two auxin response factors(Cs ARF13 and Cs ARF17)had bound directly to the second intron of CUM1.Our data suggest that different regulatory circuits operate in AG homologs in plant species with distinct sex types. 展开更多
关键词 CUCUMBER CUM1 PROMOTER INTRON in situ hybridization GUS staining yeast one-hybrid
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酵母单杂交系统在植物基因工程研究中的应用 被引量:9
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作者 王琪 朱延明 王冬冬 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期141-147,共7页
酵母单杂交系统是由酵母双杂交系统衍生来的研究DNA与蛋白质之间相互作用的新型系统。该文系统阐述了单杂交系统的基本原理和技术路线,详细综述了其在植物基因工程各个领域的应用研究进展,即克隆抗渗透胁迫类转录因子基因,确定已知DNA... 酵母单杂交系统是由酵母双杂交系统衍生来的研究DNA与蛋白质之间相互作用的新型系统。该文系统阐述了单杂交系统的基本原理和技术路线,详细综述了其在植物基因工程各个领域的应用研究进展,即克隆抗渗透胁迫类转录因子基因,确定已知DNA与蛋白质之间的相互作用,定位已证实的具有相互作用的DNA结合结构域以及验证转录激活作用;并分析了当前该系统在植物基因工程研究中存在的问题,进而结合自己的研究对解决问题的途径进行了探讨。 展开更多
关键词 酵母单杂交 植物基因工程 转录因子 转录激活结构域 DNA结合结构域
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调控黄瓜苦味基因Bi的AP2/ERF家族转录因子 被引量:9
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作者 张慧敏 张雷 +4 位作者 马永硕 尚轶 王深浩 杨清 黄三文 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期672-680,共9页
从华北型黄瓜‘9930’中克隆了黄瓜苦味形成的关键基因Bi的启动子序列,通过酵母单杂交技术对黄瓜叶片cDNA文库进行筛选,寻找可以调控Bi表达的转录因子。通过对筛选结果的测序及比对,发现有7种转录因子重复出现,包括2个AP2/ERF家族、3个b... 从华北型黄瓜‘9930’中克隆了黄瓜苦味形成的关键基因Bi的启动子序列,通过酵母单杂交技术对黄瓜叶片cDNA文库进行筛选,寻找可以调控Bi表达的转录因子。通过对筛选结果的测序及比对,发现有7种转录因子重复出现,包括2个AP2/ERF家族、3个bZIP家族、1个WRKY家族转录因子和1个E3泛素类COP1蛋白。其中AP2/ERF家族转录因子CsERF(登录号:Csa7M448110)重复出现6次,出现概率高于其他转录因子。利用烟草瞬时表达系统,CsERF对Bi启动子的结合及激活作用得到了进一步验证。初步证明CsERF可以结合到Bi的启动子并激活其转录,推测其很可能就是黄瓜叶片中调控苦味形成的关键转录因子。 展开更多
关键词 黄瓜 苦味 酵母单杂交 烟草瞬时表达 AP2/ERF转录因子
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纤毛鹅观草DREB类基因RcDREB1的克隆及其蛋白结合干旱应答元件DRE的功能验证 被引量:8
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作者 赵艳红 郎明林 +2 位作者 王小龙 温淑敏 刘桂茹 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期857-863,共7页
以纤毛鹅观草为材料,通过RT-PCR和RACE技术,首次克隆了一个纤毛鹅观草DREB类基因的全长cDNA序列,命名为RcDREB1。该基因编码蛋白含有一个保守的AP2结构域,表明该基因是AP2大家族的一个新成员。种系发生树分析表明,RcDREB1与小麦AP2家族D... 以纤毛鹅观草为材料,通过RT-PCR和RACE技术,首次克隆了一个纤毛鹅观草DREB类基因的全长cDNA序列,命名为RcDREB1。该基因编码蛋白含有一个保守的AP2结构域,表明该基因是AP2大家族的一个新成员。种系发生树分析表明,RcDREB1与小麦AP2家族DREB类基因高度同源。酵母单杂交试验表明,RcDREB1表达的蛋白具有特异结合干旱应答DRE元件的功能;通过实时定量PCR分析发现,高盐、干旱、重金属镉和低温胁迫均可诱导RcDREB1表达,但其对高盐反应较为显著。本研究表明,RcDREB1是DREB类转录因子基因,在介导植物响应逆境信号方面可能发挥着重要生物学功能,为进一步分析小麦族的进化和转基因应用奠定了基础。 展开更多
关键词 纤毛鹅观草 DREB RACE 种系发生树 酵母单杂交 实时定量
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MeCWINV6酵母单杂交文库构建及其调控基因筛选 被引量:8
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作者 郭育强 刘姣 +5 位作者 符少萍 段瑞军 李瑞梅 姚远 胡新文 郭建春 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期2777-2784,共8页
MeCWINV6是木薯6个细胞壁转化酶基因之一。本研究中应用酵母单杂交技术筛选MeCWINV6启动子的上游转录调节因子,为进一步研究该基因的表达调控提供基础。由MeCWINV6的启动子构建诱饵融合载体,转化酵母细胞构建诱饵菌株。运用SMART技术构... MeCWINV6是木薯6个细胞壁转化酶基因之一。本研究中应用酵母单杂交技术筛选MeCWINV6启动子的上游转录调节因子,为进一步研究该基因的表达调控提供基础。由MeCWINV6的启动子构建诱饵融合载体,转化酵母细胞构建诱饵菌株。运用SMART技术构建木薯酵母单杂交c DNA文库,再共转化诱饵菌株,经同源重组筛选MeCWINV6启动子的上游转录调节因子。构建的c DNA文库库容为7.08×106,插入片段大小在250~2 000 bp间。筛选大于1 000 bp的35个阳性克隆,经测序和Blast同源性分析筛选出锌指蛋白、组氨酸蛋白H1.2和AT-hook核定位蛋白三个转录因子以及一个线粒体受体TOM5。为进一步研究MeCWINV6基因的表达调控机制提供了候选转录因子。 展开更多
关键词 MeCWINV6 SMART技术 c DNA文库 酵母单杂
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苹果MdNAC9的克隆及其调控黄酮醇合成功能的鉴定 被引量:7
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作者 孙庆国 姜生辉 +3 位作者 房鸿成 张天亮 王楠 陈学森 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期2073-2081,共9页
为了探究红肉苹果黄酮醇合成机理,分析通路相关基因,从成熟期红肉苹果中克隆了1个NAC转录因子基因Md NAC9。通过Real-TimePCR、酵母单杂交和荧光素酶报告试验,探究Md NAC9与苹果黄酮醇积累的相关性。结果表明,在苹果果实和过表达Md NAC... 为了探究红肉苹果黄酮醇合成机理,分析通路相关基因,从成熟期红肉苹果中克隆了1个NAC转录因子基因Md NAC9。通过Real-TimePCR、酵母单杂交和荧光素酶报告试验,探究Md NAC9与苹果黄酮醇积累的相关性。结果表明,在苹果果实和过表达Md NAC9的愈伤组织(OENAC9)中Md NAC9表达量变化与黄酮醇合成相关基因Md FLS表达量变化趋势一致。酵母单杂交试验证明,Md NAC9具有转录激活功能,能够特异结合Md FLS基因启动子。荧光素酶报告试验显示,Md NAC9对Md FLS的启动子有激活作用,促进Md FLS的表达。Md NAC9可能通过激活Md FLS促进苹果黄酮醇积累。 展开更多
关键词 苹果 NAC转录因子 酵母单杂交 荧光素酶报告 亚细胞定位 黄酮醇
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桃ABA信号关键基因PpABI5酵母单杂交文库构建及其上游转录因子的筛选 被引量:7
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作者 郇蕾 王旭旭 +6 位作者 陈修淼 文滨滨 谭秋平 陈修德 高东升 李玲 付喜玲 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1259-1266,共8页
脱落酸(ABA)在植物的生长发育中起着重要的作用,ABI5是响应ABA信号的关键基因,研究调控ABI5基因表达的转录因子对进一步阐述ABA信号转导及调控具有重要意义。本研究中,将3-AF1、Box I和Sp1三次重复串联后连接到pAbAi诱饵质粒上,转化酵... 脱落酸(ABA)在植物的生长发育中起着重要的作用,ABI5是响应ABA信号的关键基因,研究调控ABI5基因表达的转录因子对进一步阐述ABA信号转导及调控具有重要意义。本研究中,将3-AF1、Box I和Sp1三次重复串联后连接到pAbAi诱饵质粒上,转化酵母细胞构建诱饵载体,构建桃(Prunus persica)酵母单杂交cDNA文库,再共转化诱饵菌株,经同源重组筛选PpABI5启动子的上游转录调节因子。构建的cDNA文库库容为1×10~7 CFU,插入片段长度平均在1 500 bp左右。酵母单杂交筛选结果经测序和Blast同源性分析,获得PpDAM3和PpDAM5两个转录因子。酵母单杂交进一步证实PpDAM3和PpDAM5能与PpABI5启动子结合。这些研究结果表明,PpDAM3和PpDAM5可能参与调控PpABI5的转录,并为深入研究ABA信号转导通路奠定基础。 展开更多
关键词 ABI5 启动子 酵母单杂交 转录因子
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陆地棉GhMYB9基因克隆及结合特性分析 被引量:7
9
作者 邱迎风 倪志勇 +2 位作者 刘娜 陈全家 曲延英 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期440-446,共7页
MYB转录因子蛋白普遍存在于植物中,广泛参与植物的生长发育和代谢调控。为研究GhMYB9基因对棉纤维的调控机制,使用PCR方法,从棉花中克隆1个R2R3-MYB基因GhMYB9(Gen Bank登录号:AF336286.1);利用生物信息学方法分析其氨基酸序列;构建酵... MYB转录因子蛋白普遍存在于植物中,广泛参与植物的生长发育和代谢调控。为研究GhMYB9基因对棉纤维的调控机制,使用PCR方法,从棉花中克隆1个R2R3-MYB基因GhMYB9(Gen Bank登录号:AF336286.1);利用生物信息学方法分析其氨基酸序列;构建酵母表达载体。结果表明,该基因c DNA全长1 145 bp,开放阅读框长795 bp,编码264个氨基酸,预测其蛋白分子量约为29.624 k D,等电点为9.13。推测的氨基酸序列中含有2个高度保守的SANT结构域。GhMYB9基因组包含2个外显子和1个内含子。进化树分析表明,GhMYB9和Gh MYB聚在同一分支(HQ234875.1)。酵母单杂交试验结果表明,GhMYB9转录因子能够特异结合AC顺式作用元件。本研究结果为进一步阐明GhMYB9的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 棉花 GhMYB9 克隆 酵母单杂交
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酵母双杂交技术的应用及进展 被引量:2
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作者 刘骥 张秀娟 +1 位作者 范建平 张子义 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第19期8021-8022,共2页
酵母双杂交技术能有效检测蛋白与蛋白之间的作用,已成为检测蛋白重要手段之一。笔者在酵母双杂交技术的建立、工作原理、优点和局限性4个方面作了叙述,并介绍其进一步的发展及展望。
关键词 酵母双杂交技术 蛋白之间的作用 酵母单杂交 酵母三杂交 逆向双杂交系统
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人参根系酵母文库构建及PgD14与Pgpht2-1的互作蛋白筛选
11
作者 梁浩 孙海 +4 位作者 邵财 吕柏辰 曹炜玉 龙泓桔 张亚玉 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第22期6107-6118,共12页
为构建高质量的人参cDNA文库,并通过酵母单杂交文库筛选结合人参PgD14基因启动子的转录因子,通过酵母双杂交文库筛选与人参Pgpht2-1基因编码蛋白发生互作的蛋白。该研究以人参的根部组织为材料,利用Gateway技术构建人参酵母单杂交文库,... 为构建高质量的人参cDNA文库,并通过酵母单杂交文库筛选结合人参PgD14基因启动子的转录因子,通过酵母双杂交文库筛选与人参Pgpht2-1基因编码蛋白发生互作的蛋白。该研究以人参的根部组织为材料,利用Gateway技术构建人参酵母单杂交文库,利用特异性核酸酶(duplex-specific nuclease,DSN)均一化技术构建人参酵母双杂交文库,并以pAbAi-PgD14-Pro961为诱饵载体从酵母单杂交文库中筛选了可能结合PgD14基因启动子的候选转录因子,以pGBKT7-Pgpht2-1为诱饵载体从酵母双杂交文库中筛选了可能与Pgpht2-1基因编码蛋白发生互作的候选蛋白。通过文库鉴定,检测到酵母单杂交文库的库容为1.20×10^(7)CFU,重组率为100%,插入片段平均长度大于1000 bp;酵母双杂交文库的库容为1.832×10^(5)CFU,重组率为100%,插入片段平均长度在1000 bp左右。分别将pAbAi-PgD14-Pro961和pGBKT7-Pgpht2-1重组载体转化Y1HGold和AH109菌种,通过酵母单杂交和双杂交进行互作蛋白的筛选,最终筛选到54个可能结合到人参PgD14基因启动子的转录因子,以及42个可能与人参Pgpht2-1基因编码蛋白发生互作的蛋白。该研究同时构建了人参酵母单杂交与酵母双杂交的cDNA文库,为后续人参PgD14、Pgpht2-1等基因功能的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人参 酵母单杂交 酵母双杂交 互作蛋白
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拟南芥花组织高表达TCP家族转录因子At1g30210的克隆与转录激活活性鉴定 被引量:5
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作者 苏力坦·阿巴白克力 魏刚 +1 位作者 雷娟 朱玉贤 《分子植物育种》 CAS CSCD 2005年第1期26-30,共5页
本文从拟南芥中克隆到基因At1g30210的全长读码框。多序列比对结果表明,在推导的氨基酸水平上,该基因编码的蛋白含有特征性的TCP保守结构域,与已知的玉米、金鱼草和水稻的TCP家族基因中都存在显著性的保守性。另外通过酵母单杂交实验证... 本文从拟南芥中克隆到基因At1g30210的全长读码框。多序列比对结果表明,在推导的氨基酸水平上,该基因编码的蛋白含有特征性的TCP保守结构域,与已知的玉米、金鱼草和水稻的TCP家族基因中都存在显著性的保守性。另外通过酵母单杂交实验证明该基因编码的蛋白在酵母体内具有转录激活功能。同时RT-PCR实验结果表明,该基因在拟南芥花组织中表达量相对较高,具有明显的组织表达特异性。花器官高表达转录因子的克隆将为研究TCP基因调控植物花发育和花形态建成提供新的物质基础。 展开更多
关键词 高表达 转录因子 基因编码 克隆 蛋白 家族 体内 拟南芥 转录激活活性 结构域
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拟南芥TCP家族转录因子At2g31070的转录激活活性鉴定与表达谱分析 被引量:5
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作者 雷娟 魏刚 朱玉贤 《分子植物育种》 CAS CSCD 2005年第1期31-35,共5页
TCP家族转录因子是植物所特有的转录因子家族,它主要在分生组织中起作用,与细胞分化和生长有很大联系。我们以哥伦比亚野生型拟南芥为模板得到基因At2g31070的全长ORF,生物信息学分析结果表明它具有TCP家族保守结构域,属于TCP家族的转... TCP家族转录因子是植物所特有的转录因子家族,它主要在分生组织中起作用,与细胞分化和生长有很大联系。我们以哥伦比亚野生型拟南芥为模板得到基因At2g31070的全长ORF,生物信息学分析结果表明它具有TCP家族保守结构域,属于TCP家族的转录因子。以拟南芥成株不同组织的RNA为模板进行RT-PCR实验,结果发现较之其它组织,该基因在花中有比较高的表达量;通过酵母单杂交实验鉴定该基因具有转录激活活性。综合以上结果,我们认为At2g31070基因在拟南芥花形成发育的过程中发挥转录因子的作用,在一定程度上调控和影响了这个过程。 展开更多
关键词 转录因子 基因 家族 表达谱 细胞分化 生物信息学分析 上调 拟南芥 转录激活活性 结构域
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柱花草SgPAL3基因启动子的克隆及上游转录因子的筛选 被引量:1
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作者 戴镕徽 高梦泽 +2 位作者 王芳 蒋凌雁 罗丽娟 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期66-74,共9页
柱花草(Stylosanthes spp.)是热带地区广泛种植的重要草种,炭疽病是危害柱花草的严重病害,柱花草SgPAL3基因具有抗炭疽菌的功能。本研究对启动子区域-2 000~0 bp,-1 500~0 bp序列分别构建诱饵载体并检测自激活,结果表明500 ng·mL^(... 柱花草(Stylosanthes spp.)是热带地区广泛种植的重要草种,炭疽病是危害柱花草的严重病害,柱花草SgPAL3基因具有抗炭疽菌的功能。本研究对启动子区域-2 000~0 bp,-1 500~0 bp序列分别构建诱饵载体并检测自激活,结果表明500 ng·mL^(-1)金担子素(Aureobasidin A,AbA)可以抑制两种诱饵载体的自激活。利用Gateway技术构建了柱花草响应炭疽菌的酵母cDNA文库,其容量为1.20×107,插入片段主要分布在750~2 000 bp,重组率为100%;利用酵母单杂交技术,筛选与SgPAL3基因启动子互作的转录因子,并验证了3个转录因子(SgASIL2,SgHAT5和SgZHD8)与SgPAL3启动子的互作关系;qRT-PCR分析表明,SgASIL2,SgHAT5和SgZHD8均响应炭疽菌的侵染,说明它们可能调控柱花草对炭疽病的抗性。本研究为进一步解析SgPAL3响应炭疽菌侵染的转录调控机制奠定了基础。 展开更多
关键词 柱花草 启动子 酵母单杂 转录因子 SgPAL3基因
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赤芝LS基因酵母单杂交文库构建及其上游调控因子的筛选 被引量:5
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作者 徐晓兰 朱风丽 +2 位作者 赖荣才 石林春 陈士林 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第18期3967-3973,共7页
赤芝羊毛甾醇合酶(lanosterol synthase,LS)是灵芝三萜生物合成甲羟戊酸途径(mevalonate pathway,MVA途径)中生成前体化合物--羊毛甾醇的关键酶,LS基因的转录调控可直接影响灵芝三萜含量的高低。为了进一步研究赤芝MVA途径关键酶基因的... 赤芝羊毛甾醇合酶(lanosterol synthase,LS)是灵芝三萜生物合成甲羟戊酸途径(mevalonate pathway,MVA途径)中生成前体化合物--羊毛甾醇的关键酶,LS基因的转录调控可直接影响灵芝三萜含量的高低。为了进一步研究赤芝MVA途径关键酶基因的转录调控机制,该研究利用酵母单杂交技术,筛选出赤芝LS基因上游的转录调控因子。提取赤芝全基因组DNA,PCR扩增LS启动子序列。由LS启动子构建诱饵载体,转化Y1H酵母感受态细胞构建诱饵菌株。运用SMART技术构建灵芝酵母单杂交c DNA文库,再共转化诱饵菌株,经同源重组筛选LS基因上游的转录调控因子。该实验共筛选出23个阳性克隆,经测序后与全基因组序数据库行blast比对,筛选出LS基因上游的候选调控因子8个,包括转录起始因子TFIIB,α/β折叠水解酶超家族、醛脱氢酶超家族、60S核糖体蛋白L21,ATP合成酶β亚基、微管结合蛋白Cript、蛋白酶体亚基β-1和转醛醇酶。这8个调控因子在灵芝三萜生物合成路径中的调控作用尚未见报道,该研究为深入研究LS基因的表达调控机制提供了候选蛋白。 展开更多
关键词 LS 灵芝三萜 酵母单杂交 调控因子
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甘薯块根cDNA酵母文库的构建及IbNCED3启动子互作蛋白的筛选鉴定 被引量:4
16
作者 赵彩良 张洁 +1 位作者 唐锐敏 贾小云 《山西农业大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2022年第4期19-27,共9页
[目的]橘心甘薯和黄心甘薯富含大量合成维生素A的前体物质⁃β⁃胡萝卜素。9⁃顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶(9⁃Cis Epoxycarote⁃noid Dioxygenase,NCED)可降解植物中的类胡萝卜素,与脱落酸(Abscisic Acid,ABA)的合成和抗逆性相关。本研究通... [目的]橘心甘薯和黄心甘薯富含大量合成维生素A的前体物质⁃β⁃胡萝卜素。9⁃顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶(9⁃Cis Epoxycarote⁃noid Dioxygenase,NCED)可降解植物中的类胡萝卜素,与脱落酸(Abscisic Acid,ABA)的合成和抗逆性相关。本研究通过构建甘薯块根cDNA酵母文库并利用酵母单杂交(Yeast One⁃Hybrid,Y1H)技术筛选与IbNCED3基因启动子互作的调控因子,为深入研究IbNCED3的功能和表达调控机制奠定基础。[方法]利用Gateway技术构建甘薯块根cDNA酵母文库,根据‘徐薯18’基因组数据克隆IbNCED3的启动子序列,并利用双酶切方法构建诱饵载体pAbAi⁃NCED3。利用同源重组的方法,将诱饵载体整合到Y1HGold菌株中。利用所构建的甘薯块根cD⁃NA酵母文库和诱饵载体pAbAi⁃NCED3筛选与IbNCED3启动子互作的蛋白,并通过酵母单杂交技术进行验证。[结果]成功构建了甘薯块根cDNA酵母文库,文库的容量达到1.1×10^(7)以上,重组率为100%,插入片段的大小为600~2500 bp。克隆得到的IbNCED3启动子区存在4个核心启动区域,选取其中的3和4(-311~-86)区域序列作为诱饵序列成功构建诱饵载体pAbAi⁃NCED3,利用该载体筛选并验证获得与IbNCED3启动子互作的3个蛋白,分别为胁迫相关的DnaJ蛋白、开花相关的FRIGIDA⁃Like蛋白和功能未知蛋白。[结论]构建的甘薯块根cDNA酵母文库质量较高,可用于通过酵母单杂交和酵母双杂交(Yeast Two⁃Hybrid,Y2H)筛选互作蛋白。以IbNCED3启动子为诱饵,在所构建的甘薯块根cDNA酵母文库中筛选到3个与其互作的蛋白。 展开更多
关键词 甘薯 酵母cDNA文库 酵母单杂交 互作蛋白 IbNCED3
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ThERF1 regulates its target genes via binding to a novel cis-acting element in response to salt stress 被引量:3
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作者 Liuqiang Wang Chao Wang +2 位作者 Liping Qin Wenjin Liu Yucheng Wang 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2015年第10期838-847,共10页
Ethylene responsive factors (ERFs) are plant-specific transcription factors that are involved in a variety of biological processes. We previously demonstrated that an ERF gene from Tamarix hispida, ThERF1, encodes a p... Ethylene responsive factors (ERFs) are plant-specific transcription factors that are involved in a variety of biological processes. We previously demonstrated that an ERF gene from Tamarix hispida, ThERF1, encodes a protein binding to GCC-box and DRE motifs and negatively modulates abiotic stress tolerance. In the present study, microarray analysis was performed to study the genes regulated by ThERF1 on a genomic scale. There were 154 and 307 genes (respectively representing 134 and 260 unique genes) significantly up- and downregulated by ThERF1 under salt stress conditions, respectively. A novel motif, named TTG, was identified to be recognized by ThERF1, which commonly presents in the promoters of ThERF1-targeted genes. The TTG motif is also bound by other ERFs of a different subfamily from T. hispida and Arabidopsis, indicating that it is commonly recognized by ERF proteins. The binding affinities of ERFs to the TTG motif are significantly induced by salt stress. The TTG motif is more enriched than the GCC-box and DRE motifs in the promoters of ThERF1-targeted genes. Taken together, these studies suggested that the TTG motif plays an important role in the gene expression regulated by ERFs in response to salt stress. 展开更多
关键词 Abiotic stress CHIP ethylene response factor Tamarix hispida yeast one-hybrid
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钩藤UrLAMT基因及其启动子的克隆与分析
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作者 李永权 刘淼 +4 位作者 上官黎阳 王晓红 胡涛 唐柳 张明生 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2024年第2期145-154,共10页
【目的】克隆钩藤(Uncaria rhynchophylla)中马钱苷酸甲基转移酶(loganic acid methyltransferase,LAMT)基因及其启动子,对UrLAMT基因的组织表达及其对生物和非生物胁迫的响应进行分析,并对UrLAMT及其启动子的生物信息学进行分析,为进... 【目的】克隆钩藤(Uncaria rhynchophylla)中马钱苷酸甲基转移酶(loganic acid methyltransferase,LAMT)基因及其启动子,对UrLAMT基因的组织表达及其对生物和非生物胁迫的响应进行分析,并对UrLAMT及其启动子的生物信息学进行分析,为进一步研究UrLAMT转录调控奠定基础。【方法】基于钩藤的转录组数据设计引物,采用PCR从钩藤cDNA中克隆UrLAMT序列,并对其进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR,分析UrLAMT在钩藤不同组织(根、茎、叶、花、果实、钩)中的表达,以及对外源茉莉酸甲酯(MeJA)、遮光/复光胁迫的响应;利用FPNI-PCR技术克隆UrLAMT上游启动子序列,并验证其活性,结合酵母单杂交试验,分析相应转录因子与UrLAMT启动子的调控关系。【结果】克隆得到钩藤UrLAMT序列,其长度为1137 bp,共编码378个氨基酸。UrLAMT蛋白质相对分子质量为42.64 ku,理论等电点为5.76,为亲水性蛋白,无信号肽,不含跨膜结构,定位在细胞质中;UrLAMT基因在钩藤叶中表达量最高,其次为根;UrLAMT均能响应MeJA和光;其与短小蛇根草和长春花的进化关系较近。UrLAMT启动子序列长度为1141 bp,除核心响应元件外还含有多个光响应元件,UrLAMT启动子在酵母中与光调控转录因子HY5存在相互作用。【结论】获得了UrLAMT基因及其启动子序列,其在钩藤叶中表达量最高,可能受光诱导。 展开更多
关键词 钩藤 马钱苷酸甲基转移酶 基因克隆 启动子克隆 酵母单杂交
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大豆GmbZIP27基因的克隆及表达分析
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作者 胡浩 鹿瑞昭 +2 位作者 王怡 倪志勇 于月华 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2024年第11期3481-3486,共6页
bZIP蛋白是一类调控植物生长发育和抗性的转录因子。为探究大豆bZIP的生物学功能,利用PCR方法从大豆中克隆到1个bZIP基因GmbZIP27,对该基因进行生物信息学、表达模式和结合特异性分析。结果表明,GmbZIP27基因的开放阅读框长为825 bp,编... bZIP蛋白是一类调控植物生长发育和抗性的转录因子。为探究大豆bZIP的生物学功能,利用PCR方法从大豆中克隆到1个bZIP基因GmbZIP27,对该基因进行生物信息学、表达模式和结合特异性分析。结果表明,GmbZIP27基因的开放阅读框长为825 bp,编码274个氨基酸,蛋白质分子质量为30.426 kD,等电点为8.54,含组氨酸和丝氨酸活性位点,为不稳定疏水蛋白,二级结构以α-螺旋和β-折叠为主。亚细胞定位分析发现GmbZIP27定位于细胞核。酵母单杂交实验表明GmbZIP27不能结合GmFBX176启动子中的ABRE元件。组织特异性表达模式表明,GmbZIP27在大豆组织中的相对表达量由高到低依次为子叶、根、叶和茎,推测GmbZIP27基因参与调控大豆的生长发育过程。本研究为深入解析bZIP转录因子在大豆发育及非生物胁迫应答中的功能提供一定理论依据。 展开更多
关键词 大豆 GmbZIP27 酵母单杂交 表达模式分析
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乙烯诱导的油茶酵母cDNA文库构建及CoFAD7上游调控因子筛选
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作者 马晓玲 陈佳昕 +1 位作者 柏芮 欧阳翔 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1301-1309,共9页
外施乙烯可促进油茶种仁α-亚麻酸(α-linolenic acid,ALA)积累,FAD7是影响ALA合成的关键基因。为了研究油茶CoFAD7表达的分子调控机制,本研究克隆CoFAD7的启动子,构建乙烯诱导的油茶种仁酵母单杂交cDNA文库,并通过酵母单杂交技术筛选与... 外施乙烯可促进油茶种仁α-亚麻酸(α-linolenic acid,ALA)积累,FAD7是影响ALA合成的关键基因。为了研究油茶CoFAD7表达的分子调控机制,本研究克隆CoFAD7的启动子,构建乙烯诱导的油茶种仁酵母单杂交cDNA文库,并通过酵母单杂交技术筛选与CoFAD7启动子结合的上游调控因子。结果表明,1395 bp的CoFAD7启动子序列含有多种激素调节与环境胁迫相关的顺式元件及转录因子结合元件。构建的cDNA文库库容为9.5×10^(6) CFU·mL^(-1),平均插入片段长度约1000 bp。通过酵母单杂交筛选获得4个转录因子AP2-3、NFYC-1、F-box和ZFP1,可以与CoFAD7启动子结合。以上结果为进一步探究CoFAD7基因响应乙烯调控ALA含量的分子机理提供参考。 展开更多
关键词 油茶 CoFAD7启动子 酵母单杂交 CDNA文库 转录因子
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