7号淀粉酶链霉菌M1033木糖异构酶基因序列分析 被引量：11

1

作者 王玉珍 黄震 +5 位作者 戴新华 刘兢 崔涛 牛立文 王淳 徐洵 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第2期118-123,共6页

测定了来自海南的7号淀粉酶M1033木糖异构酶(Ⅺ)基因的DNA序列。该酶的结构基因由1161bp组成,相当于387个氨基酸残基。其GC含量为72.1克分子％,密码子第三位的GC利用率达98克分子％。在氨基酸序列上,M1033的木糖异构酶与其它放线菌菌株... 测定了来自海南的7号淀粉酶M1033木糖异构酶(Ⅺ)基因的DNA序列。该酶的结构基因由1161bp组成,相当于387个氨基酸残基。其GC含量为72.1克分子％,密码子第三位的GC利用率达98克分子％。在氨基酸序列上,M1033的木糖异构酶与其它放线菌菌株的相比具有较高的同源性;特别是与3种链霉菌菌株的同源性高达90％左右。 展开更多

关键词 木糖异构酶 基因序列 淀粉酶链霉菌

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以木糖异构酶基因为筛选标记的玉米遗传转化 被引量：11

2

作者 郭新梅 张晓东 +2 位作者 梁荣奇 张立全 陈耀锋 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期547-552,共6页

利用木糖异构酶基因作为筛选标记可以在含有不同浓度木糖的培养基上筛选出玉米再生植株,其中50%～100%木糖浓度的总体筛选效果较好,但不同玉米基因型之间筛选的最佳浓度差异很大。通过DNA点杂交、PCR及PCR-Southern印记法检测表明,木糖... 利用木糖异构酶基因作为筛选标记可以在含有不同浓度木糖的培养基上筛选出玉米再生植株,其中50%～100%木糖浓度的总体筛选效果较好,但不同玉米基因型之间筛选的最佳浓度差异很大。通过DNA点杂交、PCR及PCR-Southern印记法检测表明,木糖异构酶基因已经整合到转基因植株中。以木糖作为筛选剂,可以减小潜在的生物安全隐患。 展开更多

关键词 木糖 木糖异构酶 筛选标记基因 玉米

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启动子对木糖异构酶基因在谷氨酸棒杆菌中表达的影响 被引量：3

3

作者 杨柳 许敬亮 +1 位作者 陈小燕 袁振宏 《新能源进展》 2014年第5期353-357,共5页

以大肠杆菌的强启动子Ptrc和谷氨酸棒杆菌ATCC 13032的内源强启动子Pgro作为大肠杆菌的木糖异构酶基因xylA在谷氨酸棒杆菌中表达的转录起始元件,通过实验表明谷氨酸棒杆菌自身的强启动子Pgro能有效促使外源基因xylA在谷氨酸棒杆菌ATCC 1... 以大肠杆菌的强启动子Ptrc和谷氨酸棒杆菌ATCC 13032的内源强启动子Pgro作为大肠杆菌的木糖异构酶基因xylA在谷氨酸棒杆菌中表达的转录起始元件,通过实验表明谷氨酸棒杆菌自身的强启动子Pgro能有效促使外源基因xylA在谷氨酸棒杆菌ATCC 13032中的表达,同时,核糖体结合位点RBS序列的优化对目的基因的表达水平有一定的影响。 展开更多

关键词 谷氨酸棒杆菌 木糖异构酶基因 穿梭表达载体 启动子 核糖体结合位点

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枸杞木糖异构酶基因LbxylA的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备 被引量：2

4

作者 赵建华 李浩霞 +5 位作者 尹跃 王亚军 李彦龙 樊云芳 安巍 曹有龙 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第10期77-83,共7页

以‘宁杞1号’枸杞果实为材料,利用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术,克隆出枸杞木糖异构酶基因(Lycium barbarum Linn. xylose isomerase,LbxylA)的全长,开放阅读框为1 446 bp,编码48... 以‘宁杞1号’枸杞果实为材料,利用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术,克隆出枸杞木糖异构酶基因(Lycium barbarum Linn. xylose isomerase,LbxylA)的全长,开放阅读框为1 446 bp,编码481个氨基酸,蛋白质分子质量为53.54 kDa,理论等电点5.37;对其进行生物信息学分析,发现LbxylA与烟草和马铃薯的木糖异构酶基因序列相似性较高,达到95%;构建重组质粒pGEX4T-1-LbxylA,转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行原核表达,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-Dthiogalactoside,IPTG)诱导培养,筛选出重组蛋白的适宜表达条件为:在18℃条件下100 μmol/L IPTG诱导10 h蛋白量最大,该蛋白为融合表达的且部分可溶;进一步纯化该蛋白并将获到的LbxylA融合蛋白为抗原,以日本大耳兔免疫制备Lbxyl A多克隆抗体,采用间接酶联免疫吸附测定法,测定抗体血清的效价高于1∶81 000;随着果实的发育,果实中LbxylA的相对表达量呈现逐渐下降的趋势,且在开花后9 d果实中LbxylA表达丰度最高;利用Western blot检测到LbxylA蛋白的变化与LbxylA相对表达量基本一致,但在开花后9 d果实中蛋白表达量低于开花后15 d,随后逐渐降低,果实成熟时两者的表达量到达最低。这表明枸杞果实发育前期LbxylA蛋白由于翻译后加工可能导致蛋白质表达滞后于基因,其结果有助于进一步研究LbxylA功能及其对果实糖积累的作用。 展开更多

关键词 枸杞 木糖异构酶 原核表达 多克隆抗体 Western BLOT检测

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木糖选择系统下xylA&BADH双价基因对二色胡枝子的遗传转化

5

作者 杨晓红 陈晓阳 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第6期74-84,共11页

【目的】建立安全、无抗生素的二色胡枝子遗传转化体系,通过基因工程技术进一步提高二色胡枝子的抗逆性。【方法】采用PCR法从大肠杆菌DH5α菌株中克隆木糖异构酶基因(xylA);构建含有xylA和甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH)的植物表达载体pBI12... 【目的】建立安全、无抗生素的二色胡枝子遗传转化体系,通过基因工程技术进一步提高二色胡枝子的抗逆性。【方法】采用PCR法从大肠杆菌DH5α菌株中克隆木糖异构酶基因(xylA);构建含有xylA和甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH)的植物表达载体pBI121-xylA-BADH;培养基中用木糖取代一定量的蔗糖建立二色胡枝子的木糖选择系统;以农杆菌介导法对二色胡枝子的子叶节进行遗传转化,通过PCR和Southern检测确定转基因植株;对转化植株及非转化植株进行0.5~2 g·L^(-1)NaCl胁迫,观测植株生长表现,测定1 g·L^(-1)NaCl胁迫下转化植株和非转化植株的甜菜碱醛脱氢酶活性、叶绿素、电导率。提取转化植株及非转化植株组培苗叶片中的可溶性总糖,用高效液相色谱仪分析糖成分。【结果】测序结果表明,克隆的木糖异构酶基因与GenBank公布的大肠杆菌xylA核苷酸序列的同源性达到100%,PCR及酶切检测表明正确构建了pBI121-xylA-BADH植物表达载体。在二色胡枝子遗传转化过程中,应在纯木糖培养基上筛选抗性芽,在抗性芽增殖和生根过程中,可以采用蔗糖5 g·L^(-1)、木糖25 g·L^(-1)的糖类混合剂进行进一步筛选。在农杆菌介导的遗传转化中,外植体预培养1天后,采用LBA4404菌株侵染20~30 min,共培养3天,可以获得相对较多的木糖抗性芽。对获得的部分抗性芽进行PCR及Southern检测,得到2个转基因株系,二色胡枝子遗传转化率低于4.7%。耐盐性观测表明,转基因植株能够在含有2 g·L^(-1)NaCl的培养基上生长并生根,而非转基因植株在相同培养基上则叶子变黄、脱落,且不能生根。无盐胁迫时,转基因和非转基因植株在甜菜碱醛脱氢酶活性、叶绿素含量和电导率方面无显著性差异;盐胁迫后,非转基因植株的甜菜碱醛脱氢酶活性无明显变化,而转基因植株的甜菜碱醛脱氢酶活性大幅度提升,且达到非转基因植株的8~10倍;盐 展开更多

关键词 二色胡枝子 遗传转化 甜菜碱醛脱氢酶基因 木糖异构酶基因 木糖选择

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大肠杆菌D-木糖异构酶基因的序列分析 被引量：1

6

作者 侯永敏 张其玖 王书锦 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第4期300-306,共7页

大肠杆菌D-木糖异构酶基因由含D-木糖操纵子的质粒pXO100被克隆到pWR13质粒上。以Bal31核酸酶逐步缩短DNA片段的方法,获得了若干个含有不同大小DNA片段的亚克隆,并在质粒上直接测定序列,从中获得了1.6kbDNA片段的核苷酸全序列。其中包... 大肠杆菌D-木糖异构酶基因由含D-木糖操纵子的质粒pXO100被克隆到pWR13质粒上。以Bal31核酸酶逐步缩短DNA片段的方法,获得了若干个含有不同大小DNA片段的亚克隆,并在质粒上直接测定序列,从中获得了1.6kbDNA片段的核苷酸全序列。其中包括长度为1320bp编码440个氨基酸的蛋白质。此外,在其5'端尚有209个核苷酸和3'端82个核苷酸,它们分别含有核糖体结合位点SD序列和D-木糖异构酶基因转录终止区。 展开更多

关键词 D-木糖异构酶 酶基因 序列分析

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木糖异构酶基因xylA表达载体构建 被引量：1

7

作者 杨柳 叶菁 +2 位作者 陈小燕 许敬亮 袁振宏 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2014年第3期9-13,共5页

以大肠埃希菌MG1655的基因组为模板,通过PCR扩增获得木糖异构酶基因xylA。利用敲除编码对基因转录起负调控作用的lacIq基因的大肠埃希菌/谷氨酸棒杆菌穿梭质粒pEC-XK99E,酶连后转化大肠埃希菌BL21和谷氨酸棒杆菌ATCC 13032。成功构建出... 以大肠埃希菌MG1655的基因组为模板,通过PCR扩增获得木糖异构酶基因xylA。利用敲除编码对基因转录起负调控作用的lacIq基因的大肠埃希菌/谷氨酸棒杆菌穿梭质粒pEC-XK99E,酶连后转化大肠埃希菌BL21和谷氨酸棒杆菌ATCC 13032。成功构建出了具有大肠埃希菌BL21表达活性的木糖异构酶表达载体pEC(lacI-)-xylA。 展开更多

关键词 谷氨酸棒杆菌 木糖异构酶基因 穿梭表达载体

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用于钝齿棒杆菌木糖代谢途径研究的基因工程菌构建

8

作者 张凤琴 刘俊 +1 位作者 陈小举 晏娟 《井冈山大学学报（自然科学版）》 2014年第4期44-47,共4页

通过PCR方法从大肠杆菌基因组DNA中克隆得到木糖异构酶基因(xylA),将其连接到表达载体pXMJ19上,得到重组表达载体pXMJ19-xylA,通过电转化方法将pXMJ19-xylA转入宿主菌钝齿棒杆菌中,菌液PCR和重组质粒酶切结果证明,已成功构建了含大肠杆... 通过PCR方法从大肠杆菌基因组DNA中克隆得到木糖异构酶基因(xylA),将其连接到表达载体pXMJ19上,得到重组表达载体pXMJ19-xylA,通过电转化方法将pXMJ19-xylA转入宿主菌钝齿棒杆菌中,菌液PCR和重组质粒酶切结果证明,已成功构建了含大肠杆菌木糖异构酶基因的钝齿棒杆菌基因工程菌。该研究为钝齿棒杆菌利用木糖代谢途径生产琥珀酸及其代谢途径优化打下了基础。 展开更多

关键词 钝齿棒杆菌 木糖异构酶基因 基因工程菌 转化

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以木糖异构酶基因作为选择标记的花生遗传转化 被引量：11

9

作者 丁霄 隋炯明 +1 位作者 王晶珊 乔利仙 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期444-448,483,共6页

用木糖异构酶基因xylA替换掉pCAMBIA1301中的潮霉素磷酸转移酶基因(hygromycin-B-phosphotransferase,Hpt),构建了植物表达载体pCAMBIA1301-xylA。再利用农杆菌介导法将pCAMBIA1301-xylA导入花生,转移到添加蔗糖(5g/L)和不同浓度木糖(5,... 用木糖异构酶基因xylA替换掉pCAMBIA1301中的潮霉素磷酸转移酶基因(hygromycin-B-phosphotransferase,Hpt),构建了植物表达载体pCAMBIA1301-xylA。再利用农杆菌介导法将pCAMBIA1301-xylA导入花生,转移到添加蔗糖(5g/L)和不同浓度木糖(5,10,20,30g/L)的体胚诱导及体胚萌发培养基上培养。对外植体成苗率及转基因阳性率进行统计,结果表明,当木糖浓度为10g/L时,诱导成苗率为15.25%,再生植株生长健壮,且转基因阳性率高达77.27%,最终确定10g/L为最适木糖筛选浓度。该筛选方法利用木糖作为筛选剂,可以避免利用抗生素筛选可能造成的安全隐患,转化效率高,是一种安全、高效的筛选方法。 展开更多

关键词 花生 木糖异构酶基因 农杆菌介导法 遗传转化

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7号淀粉酶链霉菌M1033菌株葡萄糖异构酶在大肠杆菌中的高效表达 被引量：7

10

作者 崔虹 刘咸安 +5 位作者 李澄清 王玉珍 王淳 牛立文 徐洵 崔涛 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1993年第7期9-12,共4页

关键词 淀粉酶 链霉菌 葡萄糖异构酶 基因

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以木糖异构酶基因xylA为选择标记的Gateway系统植物表达载体的构建 被引量：4

11

作者 阎淑滑 周波 +1 位作者 赵霞 李玉花 《生物技术通讯》 CAS 2010年第1期35-38,共4页

目的:构建以木糖异构酶基因xylA为筛选标记的无抗生素标记Gateway系统植物表达载体。方法:克隆大肠杆菌木糖异构酶基因xylA并用其替换植物表达载体pCAMBIA1301中的hpt基因,利用载体中的多克隆位点将Gateway Binary Vector(pH7WG2D)中酶... 目的:构建以木糖异构酶基因xylA为筛选标记的无抗生素标记Gateway系统植物表达载体。方法:克隆大肠杆菌木糖异构酶基因xylA并用其替换植物表达载体pCAMBIA1301中的hpt基因,利用载体中的多克隆位点将Gateway Binary Vector(pH7WG2D)中酶切位点XbaⅠ和HindⅢ之间包括P35S、T35S、attR1、attR2和CmR-ccdB的片段重组入表达载体pCAMBIA1301中,构建表达载体pCAMBIA1301-xylA-GW,利用含有津田芜菁HY5基因片段的BP反应产物与载体进行LR反应,获得含有目的基因的植物表达载体pCAMBIA1301-xylA-HY5,并导入根癌农杆菌LBA4404中。结果:抗生素筛选及酶切和PCR鉴定表明成功构建了以xylA为筛选标记的无抗生素标记植物表达载体pCAMBIA1301-xylA-HY5。结论:利用木糖异构酶基因xylA结合Gateway克隆技术构建无抗生素标记植物表达载体,可简化、方便植物转基因表达载体构建。 展开更多

关键词 GATEWAY技术 木糖异构酶基因 LR反应 植物表达载体

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7号淀粉酶链霉菌M1033菌株葡萄糖异构酶在大肠杆菌中的高效表达

12

作者 崔虹 刘咸安 +6 位作者 李澄清 伍传金 王玉珍 王淳 牛立文 徐洵 崔涛 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第S1期102-105,共4页

从已克隆的含７号淀粉酶链霉菌Ｍ１０３３菌株产葡萄糖异构酶基因的质粒ｐＵＢ中，用ＤｄｅＩ和Ｋｐｎｌ酶解，分离出酶结构基因，以平端方式与大肠杆菌质粒ｐＴ７７连接，构建了重组表达质粒ｐＴＫＤＧＩ。将ｐＴＫＤＧＩ转化到... 从已克隆的含７号淀粉酶链霉菌Ｍ１０３３菌株产葡萄糖异构酶基因的质粒ｐＵＢ中，用ＤｄｅＩ和Ｋｐｎｌ酶解，分离出酶结构基因，以平端方式与大肠杆菌质粒ｐＴ７７连接，构建了重组表达质粒ｐＴＫＤＧＩ。将ｐＴＫＤＧＩ转化到特异大肠杆菌寄主Ｋ３８，经４２℃热诱导，所产葡萄糖异构酶占菌体可溶性蛋白３５％。通过ＤＥＡＥ－Ａ５０柱和Ｇ－１５０柱层析，发酵液可获电泳纯蛋白３４ｍｇ／Ｌ。 展开更多

关键词 7号淀粉酶链霉菌M1033菌株 葡萄糖异构酶(木糖异构酶) 高效表达

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木糖异构酶基因xylA的克隆及其表达载体的构建 被引量：1

13

作者 孙磊 张国军 +1 位作者 闫爱玲 徐海英 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期167-170,共4页

木糖异构酶基因xylA是一种正向选择标记基因,在植物基因工程中使用该标记可以获得安全的转基因植物。构建了以xylA基因为选择标记的植物表达载体。从大肠杆菌Top10中扩增出xylA基因,插入到质粒pCAMBIA2301的XhoI位点,通过酶切和PCR检测... 木糖异构酶基因xylA是一种正向选择标记基因,在植物基因工程中使用该标记可以获得安全的转基因植物。构建了以xylA基因为选择标记的植物表达载体。从大肠杆菌Top10中扩增出xylA基因,插入到质粒pCAMBIA2301的XhoI位点,通过酶切和PCR检测插入片段的正确性,得到载体pCAMBIA2301-xylA,将pBI121载体上的‘35S-GUS-Nos’表达框插入到pCAMBIA2301-xylA的EcoR I和Hind III位点。得到中间载体pCAMBIA2301-xylA-GUS,用SacI和SmaI切下克隆载体上的CBF1基因替代pCAMBIA2301-xylA-GUS中的GUS片段,用电转化法将获得的表达载体转化到农杆菌中,为将来获得安全的转基因抗寒植株奠定基础。 展开更多

关键词 木糖异构酶基因 标记基因 植物表达载体 克隆

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