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肾综合征出血热病毒结构蛋白致病作用的研究 被引量:6
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作者 章莉莉 孙志坚 +4 位作者 黄湘虎 王明秀 李锡官 倪大石 张云 《江苏医药》 CAS CSCD 1996年第12期815-817,共3页
用细胞免疫化学技术及免疫印迹法分别动态检查了肾综合征出血热病毒(HFRSV)膜蛋白(MP)和核蛋白(NP)在外周血单个核细胞(PBM)、尿融台细胞中的表达及尿液中的排出情况,分析其与病情和肾功能的相互关系。发现HFRS患者从入院起至... 用细胞免疫化学技术及免疫印迹法分别动态检查了肾综合征出血热病毒(HFRSV)膜蛋白(MP)和核蛋白(NP)在外周血单个核细胞(PBM)、尿融台细胞中的表达及尿液中的排出情况,分析其与病情和肾功能的相互关系。发现HFRS患者从入院起至病程两周末PBMC中均有MP和NP表达,尿液中亦有MP和NP排出,随着病情的好转,其表达逐渐减少,而MP之表达强度与病情及肾损较重呈平行关系。75%患者尿液中发现融合细胞,而融合细胞越多,肾损越重。83.3%融合细胞中可检出MP,但NP均为阴性。这些结果表明MP与HFRSV的致病作用相关,这也是HFRSV直接致病的佐证。 展开更多
关键词 肾综合征出血热 病毒结构蛋白 尿融合细胞
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登革2型病毒ZS01/01株E蛋白在真核细胞中的分泌表达研究 被引量:1
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作者 张硕 顾雯 +9 位作者 李川 苗芳 陆鹏 曲靖 韦艳 张全福 刘琴芝 李建东 梁米芳 李德新 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期85-88,共4页
目的对登革2型病毒(DENV-2)ZSO1/01株E蛋白在哺乳动物细胞及昆虫细胞中的分泌表达进行研究。方法RT.PCR扩增DENV-2prM/E基因,通过融合PCR在prM基因前添加来自乙型脑炎病毒的信号肽序列,并将E基因羧基末端20%区域缺失或替换为乙... 目的对登革2型病毒(DENV-2)ZSO1/01株E蛋白在哺乳动物细胞及昆虫细胞中的分泌表达进行研究。方法RT.PCR扩增DENV-2prM/E基因,通过融合PCR在prM基因前添加来自乙型脑炎病毒的信号肽序列,并将E基因羧基末端20%区域缺失或替换为乙型脑炎病毒SA14-2株E基因相应序列,将上述基因元件分别克隆人哺乳动物细胞表达载体pcDNA5/FRT及昆虫细胞表达载体pAcUW51-M中,将重组质粒转染293T细胞或Sf9细胞,利用间接免疫荧光(Immunofluoreseence assay,IFA)及Western Blot检测E蛋白的表达与分泌。结果各重组质粒分别转染293T细胞或Sit)细胞后,E蛋白在细胞内均有效表达,而仅有携带乙脑信号肽且缺失或替换E基因羧基末端20%区域的重组质粒转染293T细胞后,上清中可检测到明显的E蛋白分泌。结论信号肽及E基因羧基末端20%区域对登革病毒E蛋白的分泌至关重要,宿主细胞对其亦有一定影响。 展开更多
关键词 登革热病毒 病毒结构蛋白质类 表达的序列标记/分泌
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人巨细胞病毒结构蛋白p150、p38的原核表达纯化及免疫性鉴定
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作者 范行良 邢宇坤 +1 位作者 李长贵 王剑锋 《微生物学免疫学进展》 2006年第3期9-12,共4页
应用聚合酶链式反应(PCR)扩增HCMV结构蛋白p150aa595-aa614/aa1006-aa1048和p38aa117-aa373,基因片段,将其分别克隆于表达载体pGEX-4T-1和pET30a-SetB中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,重组质粒经酶切鉴定及DNA测序证实p... 应用聚合酶链式反应(PCR)扩增HCMV结构蛋白p150aa595-aa614/aa1006-aa1048和p38aa117-aa373,基因片段,将其分别克隆于表达载体pGEX-4T-1和pET30a-SetB中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,重组质粒经酶切鉴定及DNA测序证实pGEX-4T-1/p150aa595-a614/aa1006-aa1048和pET30a—SetB/p38aa117-aa373构建正确;通过优化表达和纯化,分别获得分子量约为35kD和43kD纯化的表达产物。经亲和层析纯化以免疫印迹实验对纯化的重组蛋白进行免疫反应性检测,证实重组蛋白p150aa595-aa614/aa1006-aa1048、p38aa117-aa373能够与抗HCMV IgM阳性血清反应,说明表达的重组蛋白p150aa595-aa614/aa1006-aa1048、p38aa117-aa373具有良好的免疫性,对HCMV的原发感染具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 巨细胞病毒 结构蛋白 免疫性
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不同传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP_2表达差异性分析 被引量:2
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作者 王永山 周宗安 +4 位作者 张建昌 刁振宇 高健 邓小昭 罗函禄 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期252-254,共3页
将在不同时间、地域从传染性法氏囊病 (IBD)发病鸡群中获得的 15个IBDV株分别用SPF鸡、鸡胚和鸡胚成纤维细胞增殖 ,经氯仿处理后 ,采用聚乙二醇沉淀、超速离心和不连续蔗糖密度梯度离心的方法纯化病毒 ,检测表明 ,病毒主要分布于 40 %... 将在不同时间、地域从传染性法氏囊病 (IBD)发病鸡群中获得的 15个IBDV株分别用SPF鸡、鸡胚和鸡胚成纤维细胞增殖 ,经氯仿处理后 ,采用聚乙二醇沉淀、超速离心和不连续蔗糖密度梯度离心的方法纯化病毒 ,检测表明 ,病毒主要分布于 40 %蔗糖层。对纯化病毒进行SDS_PAGE分析 ,结果显示 ,病毒结构蛋白VP2 在不同毒株表达量有较大差异。本实验为IB DV主要保护性抗原VP2 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 结构蛋白VP2 差异性 表达
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传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP2比较及高表达毒株的分离 被引量:1
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作者 王永山 周宗安 +5 位作者 张建昌 邓小昭 罗函禄 刁振宇 高健 孙茂华 《药物生物技术》 CAS CSCD 2001年第4期189-191,共3页
对 2 9个传染性法氏囊病病毒 (IBDV)的病理组织和毒株分别增殖后 ,采用不连续蔗糖密度梯度离心的方法纯化病毒 ,经SDS PAGE分析 ,病毒结构蛋白VP2在不同毒株表达量有较大差异。对其中 0 0ZB和99TA32个VP2相对高表达的IBD病理组织样品进... 对 2 9个传染性法氏囊病病毒 (IBDV)的病理组织和毒株分别增殖后 ,采用不连续蔗糖密度梯度离心的方法纯化病毒 ,经SDS PAGE分析 ,病毒结构蛋白VP2在不同毒株表达量有较大差异。对其中 0 0ZB和99TA32个VP2相对高表达的IBD病理组织样品进行病毒分离 ,获得了 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 结构蛋白 VP2 高表达毒株 病毒分离 家禽
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不同传染性腔上囊病病毒株结构蛋白表达差异性研究
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作者 周宗安 王永山 +4 位作者 邓小昭 刁振宇 高健 张建昌 罗函禄 《医学研究生学报》 CAS 2001年第4期285-288,共4页
目的 :了解不同传染性腔上囊病病毒株 (ICBDV)结构蛋白表达的差异。 方法 :将在不同时间、地域 ,从鸭、麻雀及传染性腔上囊病发病鸡群中获得的 18株 ICBDV,分别用 SPF鸡、鸡胚和鸡胚成纤维细胞增生 ,经氯仿处理后 ,采用聚乙二醇沉淀、... 目的 :了解不同传染性腔上囊病病毒株 (ICBDV)结构蛋白表达的差异。 方法 :将在不同时间、地域 ,从鸭、麻雀及传染性腔上囊病发病鸡群中获得的 18株 ICBDV,分别用 SPF鸡、鸡胚和鸡胚成纤维细胞增生 ,经氯仿处理后 ,采用聚乙二醇沉淀、超速离心和不连续蔗糖密度梯度离心的方法纯化病毒 ,并对纯化病毒进行 SDS- PAGE分析。 结果 :病毒主要分布于 40 %蔗糖层 ;鸡源、鸭源、麻雀源 ICBDV在 SDS- PAGE中均出现 5条特异的蛋白带 ,各蛋白带的电泳迁移率毒株间差异不明显 ;15株鸡源 ICBDV结构蛋白 VP2 在不同毒株表达量有较大差异。 结论 :不同传染性腔上囊病病毒株结构蛋白 VP2 展开更多
关键词 传染性腔上囊病病毒 结构蛋白VP2 差异
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猪生殖-呼吸道综合征国内分离毒株的病毒纯化及其结构蛋白分析 被引量:4
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作者 蔡雪晖 刘文兴 +4 位作者 郭宝清 李成 谷守林 柴文君 徐哮 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第4期272-274,共3页
本研究主要对猪生殖呼吸道综合征( P R R S) 国内分离毒株( C H Ia) 进行了病毒纯化及其结构蛋白的分析。选用聚乙二醇( P E G6000) 沉淀和差速离心法粗提了经 Marc145 细胞系增殖的猪生殖呼吸... 本研究主要对猪生殖呼吸道综合征( P R R S) 国内分离毒株( C H Ia) 进行了病毒纯化及其结构蛋白的分析。选用聚乙二醇( P E G6000) 沉淀和差速离心法粗提了经 Marc145 细胞系增殖的猪生殖呼吸道综合征病毒( P R R S V) 。并采用非线性蔗糖密度梯度离心法纯化了 P R R S V, 经免疫电镜观察纯化病毒, 发现有较多的胶体金颗粒吸附在直径为42 ~78nm 的病毒粒子周围。经 Dot E L I S A 测定纯化病毒的滴度可达1 1600 以上, 并利用 S D S P A G E 和 Westernblot 两种方法对国内分离毒株( C H Ia) 与欧洲型( Lelystad) 、美洲型( V R2332) 等参考毒株的病毒结构蛋白组成和部分抗原特性进行了初步的研究。测得国内分离毒株主要结构蛋白的分子量为145 K D,192 K D 和263 K D, 并均能被 P R R S V 的高免血清识别, 这与国外的同类报道很相似。 展开更多
关键词 PRRS 生殖呼吸综合征 病毒 纯化
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