犬瘟热病是由犬瘟热病毒 (CDV)感染犬和其他食肉动物的多发性、致死性传染病。CDV属于副黏病毒科麻疹病毒属有囊膜的负链线性RNA病毒 ,基因组长约 16kb。基因组中包括 6个非重叠基因区。它们的编码基因按 3′～ 5′端顺序依次为N P M F ...犬瘟热病是由犬瘟热病毒 (CDV)感染犬和其他食肉动物的多发性、致死性传染病。CDV属于副黏病毒科麻疹病毒属有囊膜的负链线性RNA病毒 ,基因组长约 16kb。基因组中包括 6个非重叠基因区。它们的编码基因按 3′～ 5′端顺序依次为N P M F H L系列。最新研究表明CDV两个糖蛋白 (H ,F)是宿主免疫系统的主要目的抗原 ,产生中和抗体的重要抗原之一。N蛋白是保守性较强的免疫原性蛋白 ,此外N蛋白上含有T细胞表位。H 。展开更多
目的探讨慢性乙型肝炎e抗原(HBeAg)阴性患者血清中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)病毒核酸载量与乙型肝炎病毒大蛋白(hepatitis B virus large surface protein,LHBs)之间的相关性,从而探讨LHBs是否可以用作HBeAg阴性乙型肝炎患...目的探讨慢性乙型肝炎e抗原(HBeAg)阴性患者血清中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)病毒核酸载量与乙型肝炎病毒大蛋白(hepatitis B virus large surface protein,LHBs)之间的相关性,从而探讨LHBs是否可以用作HBeAg阴性乙型肝炎患者病毒复制程度的判定指标。方法采集83例HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清,采用ELISA进行LHBs检测,全自动免疫分析仪进行HBeAg检测,实时荧光定量PCR方法进行HBV DNA检测。分析HBV DNA无拷贝数组、低拷贝数组及高拷贝数组3组中LHBs的检出率以及HBV DNA不同拷贝数组与LHBs的相关性。结果在HBV DNA无拷贝数组,LHBs的阳性率为6.4%;低拷贝数组,LHBs的阳性率为56.3%,吸光度值与拷贝数对数值呈正相关,但无统计学意义(r=0.25,P=0.362);高拷贝数组,阳性率为95.0%,吸光度值与拷贝数对数值有良好相关性(r=0.90,P<0.001)。结论检测HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清LHBs,有助于判断患者体内HBV的复制程度,但是否能够作为HBeAg阴性乙型肝炎抗病毒治疗终点的有效判定指标,尚有待进一步探讨。展开更多
目的通过改变原噬菌体ms2包膜蛋白RNA包装位点（19碱基的茎环结构）的数量及亲和力，构建新的原核表达系统，探讨表达内含长片段（达到理论上的1900bp）RNA的耐RNase病毒样颗粒的可能性。方法首先设计含HindⅢ和NotⅠ酶切位点的引物，扩...目的通过改变原噬菌体ms2包膜蛋白RNA包装位点（19碱基的茎环结构）的数量及亲和力，构建新的原核表达系统，探讨表达内含长片段（达到理论上的1900bp）RNA的耐RNase病毒样颗粒的可能性。方法首先设计含HindⅢ和NotⅠ酶切位点的引物，扩增ms2包膜蛋白的编码成熟酶蛋白和衣壳蛋白的1700bp序列，并将原来的19mer的包装位点序列改变为C-5变异体（19 bp stem-loop结构中-5位的尿嘧啶改变为胞嘧啶），HindⅢ和NotⅠ酶切后，与用同样酶切的表达载体pET-28（b）相连接，得到重组载体pET-ms2-pac。应用重叠PCR扩增3种病毒的5段嵌合体序列（包括3段SARS-CoV基因、一段HCV基因和一段H5N1基因），并在SARS-CoV3和HCV序列之间插入一个19mer的变异体包装位点序列，在设计引物时，使嵌合体两端含有NotⅠ酶切位点，与NotⅠ酶切的重组载体pET-ms2-pac相连接，构建得到具有2个变异包装位点的表达载体pET-ms2-3V。同时构建3种对照重组表达载体，分别测定N-P3V-pET-P、N-P3V-pET-C、P-3V-pET-P和pET-ms2-3 V 4种重组表达质粒表达产物的260nm吸光度（A260）值，根据公式A260=0．125mg／ml计算4种表达产物的表达效率。结果成功构建了4种原核表达载体：pET-ms2-3V、P-3V-pET-P、N-P3V-pET-P和N-P3V-pET-C。pET-ms2-3V和P-3V-pET-P经原核表达后得到含全长为1891的5段嵌合体RNA的病毒样颗粒；N-P3V-pET-P、N-P3V-pET-C其原核表达产物病毒样颗粒中仅包装了1200bp的目的嵌合体RNA。N-P3V-pET-P、N-P3V-pET-C、P-3V-pET-P和pET-ms2-3V的表达效率分别为0．23、0．35、0．35和0．51mg／ml。N-P3V-pET-C比N-P3V-pET-P表达效率高52％，而pET-ms2-3V比P-3V-pET-P表达效率高38％。所包装的RNA具有耐RNase和DNase消化的特性以及良好的不同温度条件下的稳定性。结论通过改变噬菌体ms2 RNA包装位点（19碱基的茎环结构）的数量，可构建能表达内含达到理论上的约1900bp外源RNA�展开更多
文摘犬瘟热病是由犬瘟热病毒 (CDV)感染犬和其他食肉动物的多发性、致死性传染病。CDV属于副黏病毒科麻疹病毒属有囊膜的负链线性RNA病毒 ,基因组长约 16kb。基因组中包括 6个非重叠基因区。它们的编码基因按 3′～ 5′端顺序依次为N P M F H L系列。最新研究表明CDV两个糖蛋白 (H ,F)是宿主免疫系统的主要目的抗原 ,产生中和抗体的重要抗原之一。N蛋白是保守性较强的免疫原性蛋白 ,此外N蛋白上含有T细胞表位。H 。
文摘目的探讨慢性乙型肝炎e抗原(HBeAg)阴性患者血清中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)病毒核酸载量与乙型肝炎病毒大蛋白(hepatitis B virus large surface protein,LHBs)之间的相关性,从而探讨LHBs是否可以用作HBeAg阴性乙型肝炎患者病毒复制程度的判定指标。方法采集83例HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清,采用ELISA进行LHBs检测,全自动免疫分析仪进行HBeAg检测,实时荧光定量PCR方法进行HBV DNA检测。分析HBV DNA无拷贝数组、低拷贝数组及高拷贝数组3组中LHBs的检出率以及HBV DNA不同拷贝数组与LHBs的相关性。结果在HBV DNA无拷贝数组,LHBs的阳性率为6.4%;低拷贝数组,LHBs的阳性率为56.3%,吸光度值与拷贝数对数值呈正相关,但无统计学意义(r=0.25,P=0.362);高拷贝数组,阳性率为95.0%,吸光度值与拷贝数对数值有良好相关性(r=0.90,P<0.001)。结论检测HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清LHBs,有助于判断患者体内HBV的复制程度,但是否能够作为HBeAg阴性乙型肝炎抗病毒治疗终点的有效判定指标,尚有待进一步探讨。
文摘目的通过改变原噬菌体ms2包膜蛋白RNA包装位点（19碱基的茎环结构）的数量及亲和力，构建新的原核表达系统，探讨表达内含长片段（达到理论上的1900bp）RNA的耐RNase病毒样颗粒的可能性。方法首先设计含HindⅢ和NotⅠ酶切位点的引物，扩增ms2包膜蛋白的编码成熟酶蛋白和衣壳蛋白的1700bp序列，并将原来的19mer的包装位点序列改变为C-5变异体（19 bp stem-loop结构中-5位的尿嘧啶改变为胞嘧啶），HindⅢ和NotⅠ酶切后，与用同样酶切的表达载体pET-28（b）相连接，得到重组载体pET-ms2-pac。应用重叠PCR扩增3种病毒的5段嵌合体序列（包括3段SARS-CoV基因、一段HCV基因和一段H5N1基因），并在SARS-CoV3和HCV序列之间插入一个19mer的变异体包装位点序列，在设计引物时，使嵌合体两端含有NotⅠ酶切位点，与NotⅠ酶切的重组载体pET-ms2-pac相连接，构建得到具有2个变异包装位点的表达载体pET-ms2-3V。同时构建3种对照重组表达载体，分别测定N-P3V-pET-P、N-P3V-pET-C、P-3V-pET-P和pET-ms2-3 V 4种重组表达质粒表达产物的260nm吸光度（A260）值，根据公式A260=0．125mg／ml计算4种表达产物的表达效率。结果成功构建了4种原核表达载体：pET-ms2-3V、P-3V-pET-P、N-P3V-pET-P和N-P3V-pET-C。pET-ms2-3V和P-3V-pET-P经原核表达后得到含全长为1891的5段嵌合体RNA的病毒样颗粒；N-P3V-pET-P、N-P3V-pET-C其原核表达产物病毒样颗粒中仅包装了1200bp的目的嵌合体RNA。N-P3V-pET-P、N-P3V-pET-C、P-3V-pET-P和pET-ms2-3V的表达效率分别为0．23、0．35、0．35和0．51mg／ml。N-P3V-pET-C比N-P3V-pET-P表达效率高52％，而pET-ms2-3V比P-3V-pET-P表达效率高38％。所包装的RNA具有耐RNase和DNase消化的特性以及良好的不同温度条件下的稳定性。结论通过改变噬菌体ms2 RNA包装位点（19碱基的茎环结构）的数量，可构建能表达内含达到理论上的约1900bp外源RNA�
