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黄粉虫纤溶活性基因的克隆及在毕赤酵母中的表达及活性检测
1
作者 韩雅莉 林非凡 +2 位作者 林泽飞 段雪娟 朱晓琳 《广东工业大学学报》 CAS 2017年第1期19-23,共5页
采用PCR技术,以含有TFP(Tenebrio Fibrinolyric Proteins,TFP)c DNA质粒作为模板,扩增出TFP基因片段.将克隆获得的目的基因插入到毕赤酵母表达载体p PIC9K中,经测序无误后,获得重组表达质粒p PIC9K-TFP.将重组表达质粒线性化后电击转化... 采用PCR技术,以含有TFP(Tenebrio Fibrinolyric Proteins,TFP)c DNA质粒作为模板,扩增出TFP基因片段.将克隆获得的目的基因插入到毕赤酵母表达载体p PIC9K中,经测序无误后,获得重组表达质粒p PIC9K-TFP.将重组表达质粒线性化后电击转化到毕赤酵母GS115中,经筛选并PCR验证获得多拷贝整合型酵母工程菌,对工程菌进行发酵和甲醇诱导表达.阳性样品经纤溶平板实验验证,表明该表达蛋白具有生物活性. 展开更多
关键词 黄粉虫 纤溶酶 基因 载体ppic9k 毕赤酵母 表达及活性检测
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利用透明颤菌血红蛋白基因vgb改造毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K的研究 被引量：4
2
作者 孟志刚 张锐 +1 位作者 陈毓荃 郭三堆 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期166-170,共5页
为了解决酵母发酵时贫氧限制目的蛋白表达量,利用透明颤菌血红蛋白基因vgb设计毕赤酵母分泌 型表达载体pPIC9K-vgb,并以人乳铁蛋白基因为目的基因转入毕赤酵母GS115。研究结果表明,该表达载体具 有转化操作简单、后期工程菌筛选简便、... 为了解决酵母发酵时贫氧限制目的蛋白表达量,利用透明颤菌血红蛋白基因vgb设计毕赤酵母分泌 型表达载体pPIC9K-vgb,并以人乳铁蛋白基因为目的基因转入毕赤酵母GS115。研究结果表明,该表达载体具 有转化操作简单、后期工程菌筛选简便、菌体耐低氧能力强、目的蛋白摇瓶表达量高等优点。该表达载体也可 以通过直接替换目的基因而用于其他蛋白表达系统的开发研究。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白基因vgb 毕赤酵母 表达载体ppic9k 人乳铁蛋白
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人甲状旁腺激素-血清白蛋白融合蛋白的构建及在毕赤酵母中的表达 被引量：3
3
作者 王俊 沈微 +1 位作者 饶志明 诸葛健 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期14-18,共5页
利用重叠PCR技术拼接PTH和HSA基因,并将构建好的融合基因插入到载体pUC19测序后插入表达载体pPIC9K中,在启动子AOXⅠ和α交配因子信号肽的作用下,分泌表达融合蛋白PTH-HSA。重组质粒pPIC9K/PTH-HSA经SalI线性化后,电击转化毕赤酵母KM71,... 利用重叠PCR技术拼接PTH和HSA基因,并将构建好的融合基因插入到载体pUC19测序后插入表达载体pPIC9K中,在启动子AOXⅠ和α交配因子信号肽的作用下,分泌表达融合蛋白PTH-HSA。重组质粒pPIC9K/PTH-HSA经SalI线性化后,电击转化毕赤酵母KM71,经G418筛选得到的转化子。PCR鉴定后,用甲醇诱导表达,蛋白电泳分析表明融合基因得到表达;Westernblot分析表明发酵液上清中表达的融合蛋白PTH-HSA具有HSA的抗原性:用酶标法测定发酵上清中融合蛋白的甲状旁腺激素活性为318IU/ml。 展开更多
关键词 人甲状旁腺激素 融合蛋白 表达载体ppic9k 毕赤酵母
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黑曲霉A9葡萄糖氧化酶基因克隆及其酵母表达载体构建 被引量：3
4
作者 黄亮 郭润芳 +1 位作者 于宏伟 贾英民 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期60-64,共5页
以黑曲霉A9基因组为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)直接对葡萄糖氧化酶(GOD)基因进行PCR扩增,再将PCR产物克隆入pMD18-T载体,经DNA测序,该基因为1 743 bp,编码581个氨基酸。该基因序列已在GeneBank注册,登录号为DQ836361。用限制性内切... 以黑曲霉A9基因组为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)直接对葡萄糖氧化酶(GOD)基因进行PCR扩增,再将PCR产物克隆入pMD18-T载体,经DNA测序,该基因为1 743 bp,编码581个氨基酸。该基因序列已在GeneBank注册,登录号为DQ836361。用限制性内切酶切下目的基因,插入到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建成表达载体pPIC9K-GOD。重组毕赤酵母表达载体pPIC9K-GOD的构建,可望获得超量表达的高活性葡萄糖氧化酶,为研制高品质的酶制剂奠定基础。 展开更多
关键词 黑曲霉 葡萄糖氧化酶 克隆 表达载体ppic9k
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家蚕抗菌肽基因Cecropin-D的克隆及其真核表达载体的构建 被引量：1
5
作者 章玉萍 范涛 +6 位作者 马忠友 代君君 王储言 李瑞雪 吴传华 田善富 肖林珍 《北方蚕业》 2010年第4期18-21,共4页
从家蚕中提取总RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,获得了家蚕Cecropin-D基因编码区的cDNA,扩增出家蚕抗茵肽Cecropin-D成熟肽基因片段,重组克隆入pMD18-Tvector载体,经DNA测序,该基因为186bp,编码62个氨基酸。用限制性内切酶... 从家蚕中提取总RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,获得了家蚕Cecropin-D基因编码区的cDNA,扩增出家蚕抗茵肽Cecropin-D成熟肽基因片段,重组克隆入pMD18-Tvector载体,经DNA测序,该基因为186bp,编码62个氨基酸。用限制性内切酶切下目的基因,插入毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建真核表达栽体pPlC9K-CD。本实验的研究为获得超量表达的高活性表达抗菌肽Cecropin-D以及为研制具有抗菌活性的新型基因药物奠定了基础。 展开更多
关键词 家蚕 抗菌肽 Cecropin-D 克隆 表达栽体ppic9k
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