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Bt基因表达载体的构建及对茶树遗传转化的研究 被引量:29
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作者 骆颖颖 梁月荣 《茶叶科学》 CAS CSCD 2000年第2期141-147,共7页
用限制性内切酶HindⅢ和BglⅡ从pGA4 71质粒中切取Bt基因并转入载体pCAMBIA2 30 1中 ,构建后的质粒含Bt基因、intron -GUS基因和NPTⅡ基因。将构建后的质粒转化大肠杆菌 ,通过三亲交配法分别导入农杆菌菌株LBA4 4 0 4、EHA10 5、pRi1583... 用限制性内切酶HindⅢ和BglⅡ从pGA4 71质粒中切取Bt基因并转入载体pCAMBIA2 30 1中 ,构建后的质粒含Bt基因、intron -GUS基因和NPTⅡ基因。将构建后的质粒转化大肠杆菌 ,通过三亲交配法分别导入农杆菌菌株LBA4 4 0 4、EHA10 5、pRi15834中。以茶树叶片、愈伤组织为转化的受体材料 ,用农杆菌介导法将其转入茶树中 ,获得了GUS瞬间表达。以潮霉素作为愈伤组织筛选的选择性试剂 ,效果明显优于卡那霉素 ,适宜浓度为 2 0 μ/ml;以卡那霉素作为茶树叶片材料的筛选试剂 ,50 μ/ml为宜。 展开更多
关键词 茶树 遗传转化 质粒构建 BT抗虫基因
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油菜叶绿体定点转化载体的构建及其杀虫性 被引量:14
2
作者 侯丙凯 张中林 +3 位作者 周奕华 章银梅 沈桂芳 陈正华 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2000年第7期5-11,共7页
首先从油菜叶绿体基因组克隆得到包含rps7基因在内的 1.0kbDNA片段和包含ndhB基因在内的 2 .4kbDNA片段 ,同时从苏云金芽孢杆菌质粒上克隆得到一个全长 3.5kb的Bt杀虫蛋白基因cry1Aa。然后以rps7和ndhB基因作为同源重组片段 ,成功构建... 首先从油菜叶绿体基因组克隆得到包含rps7基因在内的 1.0kbDNA片段和包含ndhB基因在内的 2 .4kbDNA片段 ,同时从苏云金芽孢杆菌质粒上克隆得到一个全长 3.5kb的Bt杀虫蛋白基因cry1Aa。然后以rps7和ndhB基因作为同源重组片段 ,成功构建了包含Bt杀虫蛋白基因和aadA抗壮观霉素基因的油菜叶绿体定点转化载体 ,并对克隆菌体总蛋白进行了生物杀虫试验。结果表明 ,Bt杀虫蛋白基因能够得到表达 ,并且对棉铃虫幼虫有很强的毒杀作用。含抗虫基因的油菜叶绿体转化载体的构建在国内外为首次报告 。 展开更多
关键词 油菜 叶绿体转化 载体构建 杀虫试验
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SVG网络图像标准支持下的地图显示 被引量:6
3
作者 孙少红 边馥苓 《测绘信息与工程》 2002年第5期15-16,共2页
介绍了一种全新的网络图像标准 SVG(Scalable Vector Graphics) ,分析了目前网上地图显示的方法 ,探讨了运用 SVG在网上进行地图显示的可能性 。
关键词 SVG 网络图像标准 网络标识语言 地图显示 矢量图形 结构
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鸡痘病毒282E4株表达载体的构建及新城疫病毒F蛋白的表达 被引量:12
4
作者 郭志儒 金宁一 +6 位作者 王兴龙 金扩世 丁壮 罗坤 方厚华 李萍 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期423-428,共6页
将鸡痘病毒 2 82 E4株 TK基因和 1 .5kb B片段 2个非必需区克隆后 ,分别在 TK基因 Nco 位点和 B片段 Eco R 位点插入复合启动子 (由牛痘病毒 A型包涵体启动子和 2 0个串联的痘苗病毒 ( VV)突变型 p7.5早期启动子串联组成 ) ,然后在复合... 将鸡痘病毒 2 82 E4株 TK基因和 1 .5kb B片段 2个非必需区克隆后 ,分别在 TK基因 Nco 位点和 B片段 Eco R 位点插入复合启动子 (由牛痘病毒 A型包涵体启动子和 2 0个串联的痘苗病毒 ( VV)突变型 p7.5早期启动子串联组成 ) ,然后在复合启动子上游插入单一启动子 (人工合成的由 1 6个串联的 VV突变型p7.5早期启动子组成 )调控的 Lac Z基因或 GFP基因作为报告基因 ,构建成分别以 TK基因或 B片段为侧翼、以复合启动子调控目的基因的 2个以 Lac Z为报告基因的表达载体 p UTA-2 -1 6Lac Z和 p UBA-7-1 6Lac Z,2个以 GFP为报告基因的表达载体 p UTA-2 -F71 6和 p UBA-7-F71 6。在 TK基因 Nco 位点和 B片段 Eco R 位点插入单一启动子和单一启动子调控的 Lac Z基因 ,得到 2个分别以 TK基因或 B片段为侧翼、以单一启动子调控目的基因、以 Lac Z为报告基因的表达载体 p UT1 61 6Lac Z和 p UB1 61 6Lac Z。将构建的 6个表达载体分别转染 FPV HIPRA株感染的鸡胚成纤维 ( CEF)细胞 ,仅在转染以 TK基因为侧翼、以 Lac Z为报告基因的 2个表达载体 p UTA-2 -1 6Lac Z和 p UT1 61 6Lac Z收获的病毒中 ,在 X-gal存在下 ,筛选出了表达 Lac Z的蓝色重组病毒蚀斑 ,而转染以 B片段为侧翼的表达载体在同样条件下未筛选到蓝色病? 展开更多
关键词 鸡痘病毒疫苗 载体构建 新城疫病毒 F蛋白 表达
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以thyA基因为选择压力非抗性质粒载体的构建 被引量:13
5
作者 王春凤 秦泽荣 +4 位作者 孙哲 黄瑜 何召庆 张莉 刘尚高 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期42-46,共5页
以干酷乳杆菌L.casei34103染色体DNA为模板,利用PCR技术扩增胸苷酸合成酶(Thymidy-latesynthase,thyA)基因,回收纯化。选择以红霉素抗性为选择压力的可以在大肠杆菌和乳酸菌中穿梭表达... 以干酷乳杆菌L.casei34103染色体DNA为模板,利用PCR技术扩增胸苷酸合成酶(Thymidy-latesynthase,thyA)基因,回收纯化。选择以红霉素抗性为选择压力的可以在大肠杆菌和乳酸菌中穿梭表达的质粒pW425e为基本质粒,以thyA基因取代红霉素基因,获得重组载体并鉴定。此重组载体可以对thyA基因缺陷的大肠杆菌E.coli X51和嗜酸乳杆菌DOMLaS 107进行功能弥补。进而构建了以thyA基因为选择压力的非抗生素抗性穿梭表达载体,其大小为3716bp,并命名为pW425t。 展开更多
关键词 thyA基因 选择压力 穿梭载体 构建 质粒
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番茄GRAS转录因子家族基因SIGLD1的克隆及VIGS载体构建 被引量:19
6
作者 牛义岭 姜秀明 许向阳 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期2155-2160,共6页
本研究以醋栗番茄(LA2184)为材料,运用生物信息学方法和PCR技术,预测SIGLDl基因与番茄抗冷的相关性,设计SIGLDI基因的特异性引物,克隆出片段长度为413bp的序列。以番茄八氢番茄红素脱氢酶(phytoenedesaturase,PDS)基因作为阳... 本研究以醋栗番茄(LA2184)为材料,运用生物信息学方法和PCR技术,预测SIGLDl基因与番茄抗冷的相关性,设计SIGLDI基因的特异性引物,克隆出片段长度为413bp的序列。以番茄八氢番茄红素脱氢酶(phytoenedesaturase,PDS)基因作为阳性对照,该基因克隆片段长度为427bp。系统进化树显示,SIGLDI基因与拟南芥中已发表过的抗冷基因聚类在一起,利用RT.PCR技术,检测SIGLDI基因在不同冷处理时间点上的表达量,发现SIGLDI基因在3~6h的表达量最高,说明该基因在番茄的抗冷过程中发挥重要作用。本研究成功构建出SIGLDI、PDS基因的病毒诱导基因沉默的重组载体。构建的pTRV2-SIGLDI、pTRV2-PDS重组载体将为下一步研究番茄中SIGLDI基因的功能验证奠定实验基础。 展开更多
关键词 番茄 SIGLD1 基因克隆 载体构建
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百合查尔酮合成酶基因克隆及其转化烟草的花色表达分析 被引量:18
7
作者 陈洁 安利清 +3 位作者 王涛 姚娜 李潞滨 杨凯 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1511-1517,共7页
以‘西伯利亚’百合为试材,利用PCR技术克隆了查尔酮合成酶基因(CHS),构建了CHS基因的正义和反义植物表达载体,采用农杆菌介导法转化烟草叶盘,获得了转正义CHS基因的本明烟草18株,转反义CHS基因的普通烟草21株,总转化率为26.0%。高效液... 以‘西伯利亚’百合为试材,利用PCR技术克隆了查尔酮合成酶基因(CHS),构建了CHS基因的正义和反义植物表达载体,采用农杆菌介导法转化烟草叶盘,获得了转正义CHS基因的本明烟草18株,转反义CHS基因的普通烟草21株,总转化率为26.0%。高效液相色谱法(HPLC)检测结果显示,正义CHS转基因的本明烟草类黄酮含量升高14.0%~59.7%,反义CHS转基因的普通烟草类黄酮含量降低44.5%~76.4%。花色观察结果显示,正义转基因烟草的花瓣颜色未见变化,反义转基因烟草部分植株的花瓣颜色变浅。研究表明,CHS基因遗传转化是进行花色调控的有效手段之一。 展开更多
关键词 查尔酮合成酶基因(CHS) 载体构建 烟草转化 类黄酮 花色改变
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细粒棘球绦虫转基因植物载体重组pBI-Eg95-EgA31质粒构建及鉴定 被引量:16
8
作者 周辉 李文桂 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期308-311,共4页
目的构建并鉴定细粒棘球绦虫转基因植物载体重组pBI-Eg95-EgA31质粒。方法从细粒棘球蚴包囊中分离原头节,超声粉碎后抽提总RNA为模板,采用RT-PCR方法分别扩增Eg95和EgA31编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)扩增Eg95-EgA31融合基... 目的构建并鉴定细粒棘球绦虫转基因植物载体重组pBI-Eg95-EgA31质粒。方法从细粒棘球蚴包囊中分离原头节,超声粉碎后抽提总RNA为模板,采用RT-PCR方法分别扩增Eg95和EgA31编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)扩增Eg95-EgA31融合基因;将该融合基因定向克隆到植物表达载体pBI121中构建pBI-Eg95-EgA31重组质粒;电穿孔转化根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,At)LBA4404株,抽提质粒进行酶切及PCR鉴定。结果电泳及测序证实1 016bpEg95-EgA31融合基因克隆成功。经酶切及PCR证实重组质粒pBI-Eg95-EgA31成功转入根癌农杆菌。结论成功构建了细粒棘球绦虫转基因植物载体重组pBI-Eg95-EgA31质粒,为进一步构建细粒棘球绦虫转基因植物疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 转基因植物 载体 重组pBI-Eg95-EgA31质粒 构建 鉴定
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杂色云芝漆酶基因(Lcc1)的克隆及在甲醇毕赤酵母中的表达 被引量:12
9
作者 郭梅 蒲军 +2 位作者 杜连祥 路福平 白东清 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期221-226,共6页
以白腐菌杂色云芝Coriolus versicolor RNA为模板,通过RT-PCR获得漆酶Leel基因的cDNA片段。构建了甲醇酵母表达质粒pMETA-Lccl载体,并将其线性化后用电穿孔法导入Pichia methabolica PMAD16,部分阳性克隆的PCR结果表明Lccl基因已经整合... 以白腐菌杂色云芝Coriolus versicolor RNA为模板,通过RT-PCR获得漆酶Leel基因的cDNA片段。构建了甲醇酵母表达质粒pMETA-Lccl载体,并将其线性化后用电穿孔法导入Pichia methabolica PMAD16,部分阳性克隆的PCR结果表明Lccl基因已经整合到甲醇毕赤酵母染色体上,经摇瓶培养筛选出表达水平较高的酵母工程菌株。 展开更多
关键词 甲醇毕赤酵母 杂色云芝 酶基因 cDNA片段 RT-PCR PICHIA E1基因 表达质粒 甲醇酵母 电穿孔法 阳性克隆 工程菌株 摇瓶培养 白腐菌 RNA 线性化 染色体 酶活力 漆酶 载体
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干扰烟草GA 20-氧化酶siRNA植物表达载体的构建及矮化烟草的产生 被引量:16
10
作者 谈心 杨宏 +1 位作者 乔定君 马欣荣 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期48-52,共5页
根据烟草(Nicotiana tabacum)GA 20-氧化酶基因序列,设计2对分别含有特定酶切位点的特异引物,以烟草基因组DNA为模板,扩增目的基因(约250bp)片段.将正、反向目的片段分别插入中间载体的内含子两侧,再经BamHI和SacI双酶切回收约700bp的... 根据烟草(Nicotiana tabacum)GA 20-氧化酶基因序列,设计2对分别含有特定酶切位点的特异引物,以烟草基因组DNA为模板,扩增目的基因(约250bp)片段.将正、反向目的片段分别插入中间载体的内含子两侧,再经BamHI和SacI双酶切回收约700bp的目的片段,插入到双元载体质粒p2355中,成功构建了含GA20-氧化酶基因片段的反向重复序列植物表达载体p23700,其转录产物能形成发夹RNA(hpRNA),产生小分子干扰RNA,干扰目的基因的表达.将p23700质粒导入根癌农杆菌EHA105中并转化烟草叶片细胞,经选择分化培养,获得表型矮化的转基因烟草. 展开更多
关键词 烟草 赤霉素 GA 20-氧化酶 RNA干扰 重组载体构建 矮化突变体
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抗冻基因CBF_2表达载体构建及转化紫花苜蓿的研究 被引量:15
11
作者 刘晓静 郝凤 +2 位作者 张德罡 毛娟 于铁峰 《草业学报》 CSCD 北大核心 2011年第2期193-200,共8页
本研究以拟南芥基因组DNA为模板,用PCR方法扩增目的基因,连接到PGEM-T Easy Vector载体上构建成克隆载体T-CBF2。用BamHⅠ和SacⅠ分别对克隆载体T-CBF2和植物表达载体PBI121进行双酶切,获得目的片段和线性质粒。在T4DNA连接酶的作用下... 本研究以拟南芥基因组DNA为模板,用PCR方法扩增目的基因,连接到PGEM-T Easy Vector载体上构建成克隆载体T-CBF2。用BamHⅠ和SacⅠ分别对克隆载体T-CBF2和植物表达载体PBI121进行双酶切,获得目的片段和线性质粒。在T4DNA连接酶的作用下进行定向连接,构建成植物表达载体P-T-CBF2。采用直接转化法将重组子导入根癌农杆菌EHA105。经PCR鉴定,重组质粒已成功导入根癌农杆菌中。通过农杆菌介导法转化和田苜蓿,现在已经得到转基因的苜蓿愈伤组织。 展开更多
关键词 抗冻基因CBF2 载体构建 农杆菌 紫花苜蓿 转化
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107杨次生木质部PAL基因的RT-PCR扩增及其鉴定 被引量:14
12
作者 薛永常 李金花 +1 位作者 卢孟柱 张绮纹 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第4期193-197,共5页
A fragment of PAL (phenylalanine ammonia_lyase) gene was amplified by RT_PCR from poplar (Populus×euramericana cv. “74/76”) developing second xylem mRNA. It was cloned into pGEM-T Easy vector and identified by ... A fragment of PAL (phenylalanine ammonia_lyase) gene was amplified by RT_PCR from poplar (Populus×euramericana cv. “74/76”) developing second xylem mRNA. It was cloned into pGEM-T Easy vector and identified by restriction enzyme, PCR amplification and sequencing. The sequence of the amplified DNA fragment was 565 base pairs. Alignment with the P. kitakamiensis PAL cDNA sequence retrieved from EMBL nucleotide acid database (accession number D30656) showed that the first 400 base pairs in both sequences were almost identical. Therefore the fragment was part of PAL gene. And both of sense and anti-sense expressional vectors were constructed. 展开更多
关键词 次生木质部 PAL基因 RT-PCR 鉴定 苯丙氨酸解氨酶 欧美杨107
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人白介素-12植物表达载体的构建 被引量:14
13
作者 邵敏 周鹤峰 葛正龙 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2007年第10期868-870,共3页
目的构建人白介素-12(hIL-12)基因的植物表达载体.方法采用PCR技术从质粒pCA13-hIL-12中扩增hIL-12基因,SmaI,SacI分别酶切hIL-12基因和植物表达载体pBI121,回收,T4DNA连接酶连接得到重组质粒pBI121-hIL-12,双酶切和DNA测序鉴定后,通过... 目的构建人白介素-12(hIL-12)基因的植物表达载体.方法采用PCR技术从质粒pCA13-hIL-12中扩增hIL-12基因,SmaI,SacI分别酶切hIL-12基因和植物表达载体pBI121,回收,T4DNA连接酶连接得到重组质粒pBI121-hIL-12,双酶切和DNA测序鉴定后,通过三亲杂交法将表达载体pBI121-hIL-12分别导入根癌农杆菌EHA105和GV3101,用PCR法进行鉴定.结果双酶切及DNA序列测定证实hIL-12已插入到表达载体pBI121中,PCR扩增表明构建的重组表达载体pBI121-hIL-12成功转入根癌农杆菌EHA105和GV3101中.结论成功构建了植物表达载体pBI121-hIL-12,为进一步利用转基因植物生产hIL-12奠定了实验基础. 展开更多
关键词 人白细胞介素-12 植物表达载体 载体构建 根瘤菌属
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胰岛素样生长因子1对骨髓间充质干细胞软骨分化及基质金属蛋白酶表达的影响 被引量:14
14
作者 邬波 马旭 +5 位作者 朱大木 刘素媛 王景续 张毅 付爱民 潘梁 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第19期3421-3429,共9页
背景:以往促进骨髓间充质干细胞软骨分化的研究,多将胰岛素样生长因子1作为辅助因子与其他细胞因子联合应用,而胰岛素样生长因子1单独应用能否促进骨髓间充质干细胞分泌软骨特异性胶原仍存在争议,其对骨髓间充质干细胞软骨分化及软骨胶... 背景:以往促进骨髓间充质干细胞软骨分化的研究,多将胰岛素样生长因子1作为辅助因子与其他细胞因子联合应用,而胰岛素样生长因子1单独应用能否促进骨髓间充质干细胞分泌软骨特异性胶原仍存在争议,其对骨髓间充质干细胞软骨分化及软骨胶原纤维稳定性的影响尚不清楚。目的:观察胰岛素样生长因子1对骨髓间充质干细胞软骨分化以及基质金属蛋白酶表达的影响。方法:构建含有胰岛素样生长因子1基因完整编码区的表达载体,稳定转染至大鼠骨髓间充质干细胞,设为胰岛素样生长因子1稳定转染组,同时设未转染组作对照。结果与结论:MTT检测结果显示,实验成功筛选得到胰岛素样生长因子1稳定过表达的骨髓间充质干细胞,转染后4d,细胞增殖能力显著增强(P<0.05)。RT-PCR,Westernblot法及免疫细胞化学检测结果显示,与未转染组相比,胰岛素样生长因子1稳定转染组细胞胰岛素样生长因子1,Ⅱ型胶原mRNA和蛋白的表达水平均显著升高(P<0.01),基质金属蛋白酶1,2,3mRNA表达显著降低(P<0.01)。结果证实,单独应用胰岛素样生长因子1能够有效促进骨髓间充质干细胞的增殖以及软骨分化,并维持软骨胶原纤维的稳定性。 展开更多
关键词 干细胞 骨髓干细胞 胰岛素样生长因子1 骨髓间充质干细胞 载体构建 细胞增殖 软骨分化 型胶原 基质金属蛋白酶 组织工程软骨 其他基金 干细胞图片文章
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陆地棉GhDGAT1基因干涉载体构建与遗传转化 被引量:12
15
作者 刘正杰 张园 +2 位作者 王玉美 梁伟 华金平 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期1-8,共8页
二酰基甘油酰基转移酶(DGAT)是生物体内三酰甘油(TAG)合成过程中的关键酶。本研究克隆陆地棉GhDGAT1基因308bp片段,构建了该基因含内含子结构的hpRNA干涉载体;应用花粉管通道法转化棉花,研究内源基因GhDGAT1沉默对棉花油分含量的影响。... 二酰基甘油酰基转移酶(DGAT)是生物体内三酰甘油(TAG)合成过程中的关键酶。本研究克隆陆地棉GhDGAT1基因308bp片段,构建了该基因含内含子结构的hpRNA干涉载体;应用花粉管通道法转化棉花,研究内源基因GhDGAT1沉默对棉花油分含量的影响。结果表明:1)经PCR及Southern杂交鉴定,转基因种子中GhDGAT1基因表达量受到显著抑制,种仁含油量下降,最多下降3.13%。2)种子油脂量显著减少的株系中,总蛋白含量及可溶性糖分含量,分别相对提高4.31%~9.77%和11.67%~23.01%。3)与野生型相比,转基因株系幼胚在发育后期鲜重降低,而可溶性蛋白含量升高。4)与对照相比,转基因植株的株高、第一果枝高度、果枝数均显著降低,但其他农艺性状与主要的经济性状均未受到显著影响。研究表明,通过调控GhDGAT1基因的表达可影响陆地棉的油脂合成,调节棉籽油分含量。 展开更多
关键词 陆地棉 GhDGAT1 RNAI 载体构建 遗传转化
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抗砷载体的构建及在氧化亚铁硫杆菌中的表达 被引量:10
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作者 徐海岩 颜望明 +2 位作者 刘振盈 罗小平 王祖农 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 1995年第3期238-243,共6页
利用DNA体外重组技术,将抗砷质粒pUM3经HindⅢ酶切后得到的4.3kb抗砷片段克隆到有广泛寄主的IncQ质粒pJRD215的HindⅢ位点上,构建了一个新的抗砷质粒pSDX3。砷抗性研究表明,在大肠杆菌中,pS... 利用DNA体外重组技术,将抗砷质粒pUM3经HindⅢ酶切后得到的4.3kb抗砷片段克隆到有广泛寄主的IncQ质粒pJRD215的HindⅢ位点上,构建了一个新的抗砷质粒pSDX3。砷抗性研究表明,在大肠杆菌中,pSDX3的抗砷水平与pUM3相近。将pSDX3通过接合的方式引入氧化亚铁硫杆菌Tf-59中并得到了表达,与对照相比,含质粒pSDX3的Tf-59抗砷水平有了很大的提高。 展开更多
关键词 氧化亚铁硫杆菌 抗砷载体 载体构建 环境微生物
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转APX基因烟草抗旱能力研究 被引量:7
17
作者 韩瑞丽 陆海 《成都大学学报(自然科学版)》 2007年第2期93-96,121,共5页
用毛白杨中克隆得到的抗坏血酸过氧化物酶(APX)基因,构建植物表达载体pBI121-APX,将pBI121-APX载体用农杆菌介导法转化烟草,成功得到转基因烟.PCR、PCR-Southern的结果表明,APX基因已经成功的整合到转基因烟草基因组中.干旱实验结果表明... 用毛白杨中克隆得到的抗坏血酸过氧化物酶(APX)基因,构建植物表达载体pBI121-APX,将pBI121-APX载体用农杆菌介导法转化烟草,成功得到转基因烟.PCR、PCR-Southern的结果表明,APX基因已经成功的整合到转基因烟草基因组中.干旱实验结果表明,与对照相比较,转基因烟草表现出较强的抗旱性. 展开更多
关键词 抗坏血酸过氧化物酶 载体构建 抗旱性 转基因烟草
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RNA干扰载体构建方法的研究进展 被引量:11
18
作者 粟挺 刘爱玲 陈信波 《湖南农业科学》 2011年第10期1-4,共4页
RNA干扰是通过外源或内源的双链RNA在细胞内诱导同源序列的基因表达沉默的现象。目前RNA干扰技术不但被广泛地应用于各种基因的功能研究,而且在农作物抗逆品种的选育方面起重要的作用。RNA干扰技术的关键是构建能在受体中稳定表达的干... RNA干扰是通过外源或内源的双链RNA在细胞内诱导同源序列的基因表达沉默的现象。目前RNA干扰技术不但被广泛地应用于各种基因的功能研究,而且在农作物抗逆品种的选育方面起重要的作用。RNA干扰技术的关键是构建能在受体中稳定表达的干扰载体。阐述了近几年发展起来的3种简单、快捷、稳定的构建RNA干扰载体的方法。 展开更多
关键词 RNA干扰 载体构建 基因 综述
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人肝细胞生长因子基因表达质粒的构建及其活性研究 被引量:11
19
作者 哈小琴 王新国 吴祖泽 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期278-282,共5页
目的 :构建一种携带人肝细胞生长因子 (HGF)基因的表达质粒 (pUDKH) ,并对其体外活性进行研究 ,为其体内应用提供依据。方法 :从人胎盘cDNA文库用PCR方法克隆人HGF基因 ,并将其克隆至自行构建的真核表达载体 pUDK上 ,获得表达质粒 pUDK... 目的 :构建一种携带人肝细胞生长因子 (HGF)基因的表达质粒 (pUDKH) ,并对其体外活性进行研究 ,为其体内应用提供依据。方法 :从人胎盘cDNA文库用PCR方法克隆人HGF基因 ,并将其克隆至自行构建的真核表达载体 pUDK上 ,获得表达质粒 pUDKH。将pUDKH体外转染原代培养的骨骼肌细胞 ,分析其转染效率及表达上清中HGF、血管内皮生长因子 (VEGF)的表达水平 ,并采用MTT法分析不同剂量HGF表达产物对人脐静脉内皮细胞的作用。结果 :所克隆构建的携带人HGF基因的质粒 pUDKH可有效转染原代培养的骨骼肌细胞 (0 .0 5 7% ) ,并表达HGF(16~ 18ng/ 4× 10 5cells)和VEGF ,其表达产物对人脐静脉内皮细胞具有明显的增殖刺激活性 (P <0 .0 5 ) ,而且有剂量效应关系。结论 :初步证实本研究构建的质粒 展开更多
关键词 人肝细胞生长因子 基因表达质粒 构建 活性 质粒载体 表达产物
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马铃薯Y病毒CP基因RNAi载体构建与干涉效果测定 被引量:11
20
作者 李奇科 陶刚 +4 位作者 邱又彬 邱礽 迟胜起 朱英 刘作易 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期460-464,共5页
RNA沉默(RNAi)介导的植物抗病毒研究是近年来引起广泛关注的一项植物抗病毒基因工程策略。马铃薯Y病毒(PVY)在世界范围内引起马铃薯、烟草等重要经济作物的病害,并且造成严重的经济损失。本文以PVY的外壳蛋白(CP)基因为模板扩增300bp和3... RNA沉默(RNAi)介导的植物抗病毒研究是近年来引起广泛关注的一项植物抗病毒基因工程策略。马铃薯Y病毒(PVY)在世界范围内引起马铃薯、烟草等重要经济作物的病害,并且造成严重的经济损失。本文以PVY的外壳蛋白(CP)基因为模板扩增300bp和354bp两个片段,正向和反向分别插入植物表达载体pROKⅡ的35S启动子下游,从而构建了以PVY的CP基因为靶标的RNAi植物表达载体pROKY300,转入农杆菌EHA105中,以农杆菌渗入法在本氏烟中瞬时表达与PVYCP同源的hairpin RNA。结果表明,瞬时表达的hairpinRNA有效干涉了PVY侵染。 展开更多
关键词 马铃薯Y病毒 CP基因 RNAI 载体构建 农杆菌渗入法
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