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人UroplakinⅡ启动子用于靶向性基因治疗膀胱癌的实验研究 被引量:2
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作者 朱宏建 王发强 +2 位作者 曾祥福 魏守顺 郭应禄 《中华泌尿外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第S1期18-21,共4页
目的探讨利用人UroplakinⅡ(hUPⅡ)启动子进行靶向性基因治疗膀胱癌的可能性。方法将hUPⅡ启动子和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)克隆到腺病毒载体Ad5中,构建重组体pAd-hUPⅡ-TNF。转染细胞293后产生复制缺陷型的重组腺病毒,感染膀胱癌细胞系... 目的探讨利用人UroplakinⅡ(hUPⅡ)启动子进行靶向性基因治疗膀胱癌的可能性。方法将hUPⅡ启动子和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)克隆到腺病毒载体Ad5中,构建重组体pAd-hUPⅡ-TNF。转染细胞293后产生复制缺陷型的重组腺病毒,感染膀胱癌细胞系BIU-87,检测TNF-α对BIU-87细胞体外生物学行为及体内成瘤性的影响。结果成功构建pAd-hUPⅡ-TNF重组腺病毒载体,转染细胞293获得复制缺陷型重组腺病毒。BIU-87细胞经重组腺病毒感染后可产生高浓度的TNF-α,并降低BIU-87的生长速度。感染腺病毒的BIU-87培养液可抑制L929细胞的生长。裸鼠原位膀胱肿瘤动物模型实验结果表明膀胱灌注重组腺病毒48h后,裸鼠尿液含高浓度的TNF-α,4周后腺病毒组膀胱重量和体积明显低于对照组(P<0.01)。结论hUPⅡ启动子TNF-α为治疗基因的重组腺病毒可特异性使膀胱癌细胞系BIU-87产生高浓度的TNF-α,并降低BIU-87和L929细胞的生长速度。重组腺病毒可使裸鼠尿内含高浓度的TNF-α,并可抑制裸鼠原位膀胱肿瘤动物模型膀胱癌细胞的成瘤性。 展开更多
关键词 uroplakin 启动子 膀胱肿瘤 基因
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膀胱尿路上皮癌淋巴结微转移的检测及其对患者预后的影响 被引量:2
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作者 曹琦 张志强 于德新 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2013年第5期516-519,共4页
目的研究膀胱尿路上皮癌发生淋巴结微转移(LNM)的概率和影响因素,并分析LNM和5年生存率的关系。方法纳入PT1-4N0M0膀胱尿路上皮癌患者128例,均行根治性全膀胱切除术,术后随访7~112个月。应用免疫组化SP法观察尿溶蛋白Ⅱ(UPⅡ)和细胞角... 目的研究膀胱尿路上皮癌发生淋巴结微转移(LNM)的概率和影响因素,并分析LNM和5年生存率的关系。方法纳入PT1-4N0M0膀胱尿路上皮癌患者128例,均行根治性全膀胱切除术,术后随访7~112个月。应用免疫组化SP法观察尿溶蛋白Ⅱ(UPⅡ)和细胞角蛋白20(CK20)在手术清扫淋巴结中的表达情况,分析相关临床和病理因素与UPⅡ、CK20表达的关系,并对发生LNM(UPⅡ和CK20表达阳性)患者与未发生LNM患者5年生存率的差异进行统计分析。结果 128例患者中,39例(30.47%)患者的淋巴结中找到阳性表达的肿瘤细胞,证实发生LNM。25例患者经UPⅡ抗体检测出现LNM,发生率为19.53%(25/128),CK20抗体检测24例患者出现LNM,发生率为18.75%(24/128),两者联合检测可提高LNM检出率(P<0.05)。LNM与肿瘤的病理分期、分级相关(P<0.05),但与患者的年龄、性别及肿瘤大小和数目无关。出现LNM的患者与未出现LNM患者的术后5年生存率分别为41.03%、68.54%,两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论使用UPⅡ和CK20联合免疫组化检测膀胱癌淋巴结可提高LNM的检出率。高分期与高分级的膀胱癌容易发生LNM,发生LNM的患者预后相对较差。 展开更多
关键词 膀胱尿路上皮癌 淋巴结微转移 尿溶蛋白 细胞角蛋白20 免疫组化 预后
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小鼠尿路斑块2启动子对人细胞特异性及表达调控研究 被引量:2
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作者 朱宏建 张智清 +4 位作者 曾祥福 魏守顺 徐春晓 黄国锦 郭应禄 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期1016-1018,共3页
目的 研究小鼠尿路斑块 2 (UPⅡ )启动子的缺失体在人细胞中启动活性。方法 应用脂质体转染技术 ,将含不同长度的小鼠UPⅡ启动子片段的重组质粒转染入人不同组织细胞系 ,利用共聚焦激光扫描显微镜、流式细胞仪和微板检测仪观察报告基... 目的 研究小鼠尿路斑块 2 (UPⅡ )启动子的缺失体在人细胞中启动活性。方法 应用脂质体转染技术 ,将含不同长度的小鼠UPⅡ启动子片段的重组质粒转染入人不同组织细胞系 ,利用共聚焦激光扫描显微镜、流式细胞仪和微板检测仪观察报告基因绿色荧光蛋白 (GFP)和荧光素酶 (Luc)的表达情况。结果 UPⅡ在膀胱癌细胞BIU 87表达GFP较非膀胱癌细胞多 ( 4 .3 4%对 0 )。UPⅡ 1、UPⅡ 2、UPⅡ 3在各组织细胞中表达GFP的数目较UPⅡ小 ,UPⅡ 4在各细胞中均无表达。UPⅡ在BIU 87表达Luc的量是其他组织细胞的 1.8~ 8.2倍。UPⅡ 1、UPⅡ 2、UPⅡ 3在各组织细胞中表达Luc的量均减少 ,UPⅡ 4在各组织细胞中几乎无表达。结论 小鼠UPⅡ启动子在人膀胱移行细胞中具有特异性启动活性 ,启动子上游 1.5× 10 3 区域是增强子序列 ,下游 14 3bp区域是核心启动子序列。 展开更多
关键词 小鼠 尿路斑块2 启动子 人细胞特异性 基因表达 膀胱肿瘤
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膀胱移行细胞癌患者外周血Uroplakin Ⅱ mRNA检测的临床意义 被引量:1
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作者 冯强 李毅 《泰山卫生》 2003年第1期1-3,共3页
目的:对膀胱移行细胞癌(TCC)患者外周血中UP Ⅱ mRNA进行检测并评价其临床意义。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测外周血和组织中的UP Ⅱ mRNA。结果:前列腺癌、肾癌、结肠癌、乳腺癌组织及15例健康志愿者外周血中未见... 目的:对膀胱移行细胞癌(TCC)患者外周血中UP Ⅱ mRNA进行检测并评价其临床意义。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测外周血和组织中的UP Ⅱ mRNA。结果:前列腺癌、肾癌、结肠癌、乳腺癌组织及15例健康志愿者外周血中未见UP Ⅱ mRNA的表达;正常膀胱移行上皮及癌组织中UP Ⅱ mRNA表达率100%;41例TCC肿瘤患者外周血中14例表达阳性,阳性率为34.1%。UP Ⅱ mRNA的表达与临床分期关系为:Tis-1期10%(1/10)、T2期16.7%(2/12)、T3期50%(4/8)、T4期63.6%(7/11);其中T3、T4期与Tis-1、T2期相比有显著性差异(p<0.01)。结论:UP Ⅱ mRNA具有高度的组织特异性,可以作为诊断TCC血行转移的良好标志物,并能为临床治疗提供有利的实验依据。 展开更多
关键词 膀胱移行细胞癌 外周血 uroplakin mRNA 检测 临床意义 逆转录聚合酶链反应
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小鼠uroplakinⅡ启动子在人细胞中的作用 被引量:2
5
作者 朱宏建 张智清 +4 位作者 曾祥福 魏守顺 徐春晓 黄国锦 郭应禄 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期22-25,共4页
目的 研究小鼠UroplakinⅡ (UPⅡ )启动子在人细胞中的作用。方法 采用半定量RT PCR方法 ,检测人类膀胱移行细胞癌细胞系 (BIU 87)、肾癌细胞系 (GRC 1)、脐静脉血管内皮细胞系(EC)、肺癌细胞系 (A549)和皮肤成纤维细胞系 (Hs2 7)中U... 目的 研究小鼠UroplakinⅡ (UPⅡ )启动子在人细胞中的作用。方法 采用半定量RT PCR方法 ,检测人类膀胱移行细胞癌细胞系 (BIU 87)、肾癌细胞系 (GRC 1)、脐静脉血管内皮细胞系(EC)、肺癌细胞系 (A549)和皮肤成纤维细胞系 (Hs2 7)中UPⅡ基因mRNA的表达情况 ;同时构建pEGFP UPⅡ、pGL UPⅡ重组质粒 ,应用脂质体转染技术 ,将重组质粒转染入BIU 87、GRC 1、EC、A549和Hs2 7;利用共聚焦显微镜、流式细胞仪和微板检测仪观察细胞表达绿色荧光蛋白 (GFP)和荧光素酶(Luc)的情况。结果 UPⅡ基因mRNA在BIU 87中有较高的表达 ,而在其他组织细胞中表达极低。BIU 87表达GFP较多 (5~ 10 /HP) ,亮度较强 ,流式细胞仪测定表达量为 10 .1% ;而GRC 1、EC细胞表达GFP极少 (0~ 2 /HP) ,亮度暗 ,流式细胞仪测定表达量分别为 0 %和 1.8%。Luc在BIU 87中的表达量是其他组织细胞的 1.8~ 8.2倍 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论 UPⅡ特异性的表达在膀胱癌细胞中。 展开更多
关键词 uroplakin 启动子 人细胞 RT-PCR 肾癌细胞系 皮肤成纤维细胞系 膀胱肿瘤
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尿路上皮肿瘤患者外周血Uroplakin Ⅱ基因检测的意义
6
作者 吕家驹 程继义 +1 位作者 谭善峰 夏庆华 《中华泌尿外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期220-222,共3页
目的 探讨尿路上皮特异性跨膜蛋白UroplakinⅡ (UP Ⅱ )表达在尿路上皮肿瘤血行播散及判断化疗效果中的意义。 方法 采用RT PCR法检测 5 4例尿路移行上皮癌 (TCC)患者外周血标本UP Ⅱ表达 ,并对 4例接受化疗的患者进行追踪检测。 ... 目的 探讨尿路上皮特异性跨膜蛋白UroplakinⅡ (UP Ⅱ )表达在尿路上皮肿瘤血行播散及判断化疗效果中的意义。 方法 采用RT PCR法检测 5 4例尿路移行上皮癌 (TCC)患者外周血标本UP Ⅱ表达 ,并对 4例接受化疗的患者进行追踪检测。 结果 表浅肿瘤患者外周血UP ⅡmRNA无阳性表达 ,浸润性肿瘤患者阳性表达率 2 0 .8% (5 / 2 4 ) ,局部淋巴结转移者 2例中阳性表达 1例 ,有远处转移者 2例均阳性表达。 7例接受化疗者治疗前UP Ⅱ均呈阳性表达 ,2~ 3个疗程后 3例转阴。 结论 UP Ⅱ检测对于判断尿路上皮肿瘤的血行播散、转移及治疗反应有重要意义。 展开更多
关键词 尿路上皮肿瘤 外周血 uroplakin 基因检测 药物疗法 治疗
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中国人Uroplakin Ⅱ基因的克隆及其真核表达载体构建 被引量:3
7
作者 童强松 陈方敏 +4 位作者 曾甫清 汪良 郑丽端 董继华 鲁功成 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期995-997,共3页
目的 克隆中国人UroplakinⅡ基因并构建其真核表达载体。方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法从1例GⅢ/T_3N_0M_0膀胱移行上皮癌(TCC)标本中扩增UroplakinⅡ全长cDNA后进行核酸序列分析,并构建其真核表达载体;重组子瞬时转染Uropla... 目的 克隆中国人UroplakinⅡ基因并构建其真核表达载体。方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法从1例GⅢ/T_3N_0M_0膀胱移行上皮癌(TCC)标本中扩增UroplakinⅡ全长cDNA后进行核酸序列分析,并构建其真核表达载体;重组子瞬时转染UroplakinⅡ基因缺陷型TCC EJ细胞株72h后,RT-PCR法检测癌细胞UroplakinⅡ表达水平。结果 成功克隆了中国人UroplakinⅡ全长cDNA(555 bp),与国外报道的序列同源性高达100%。真核表达载体pcDNA-UPⅡ转染EJ细胞后,癌细胞UroplakinⅡmRNA水平显著增高(P<0.01)。结论 从中国人TCC组织中克隆出UroplakinⅡ基因,为深入研究UroplakinⅡ基因在TCC生物学行为中的作用及其靶向生物治疗策略奠定了基础。 展开更多
关键词 真核表达载体 基因 TCC 中国人 EJ细胞 克隆 转染 全长cDNA 重组子 mRNA水平
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膀胱移行细胞癌患者外周血UroplakinⅡmRNA检测的临床意义
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作者 冯强 李毅 +2 位作者 刘树延 宋明山 杜君兰 《中国实验诊断学》 2003年第4期337-339,共3页
目的 对膀胱移行细胞癌 (TCC)患者外周血中UPⅡmRNA进行检测并评价其临床意义。方法 应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测外周血和组织中的UPⅡmRNA。结果 前列腺癌、肾癌、结肠癌、乳腺癌组织及 15例健康志愿者外周血中未见UPⅡmRN... 目的 对膀胱移行细胞癌 (TCC)患者外周血中UPⅡmRNA进行检测并评价其临床意义。方法 应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测外周血和组织中的UPⅡmRNA。结果 前列腺癌、肾癌、结肠癌、乳腺癌组织及 15例健康志愿者外周血中未见UPⅡmRNA的表达 ;正常膀胱移行上皮及癌组织中UPⅡmRNA表达率 10 0 % ;4 1例TCC肿瘤患者外周血中 14例表达阳性 ,阳性率为 34.1%。UPⅡmRNA的表达与临床分期关系为 :Tis 1期 10 % (1/ 10 )、T2 期 16 .7%(2 / 12 )、T3 期 5 0 % (4/ 8)、T4期 6 3.6 % (7/ 11) ;其中T3 、T4期与Tis 1、T2 期相比有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 UPⅡmRNA具有高度的组织特异性 ,可以作为诊断TCC血行转移的良好标志物 ,并能为临床治疗提供有利的实验依据。 展开更多
关键词 膀胱移行细胞癌 外周血 uroplakinmRNA 检测
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Selection of Optimal Antisense Accessible Sites of Uroplakin Ⅱ mRNA for Bladder Urothelium
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作者 郑丽端 童强松 +3 位作者 陈方敏 曾甫清 汪良 董继华 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2009年第3期344-349,共6页
The optimal antisense accessible sites (AAS) of uroplakin Ⅱ (UP Ⅱ ) mRNA, a specific gene expressed in bladder urothelium, were selected in order to provide a novel method for targeted therapy of transitional ce... The optimal antisense accessible sites (AAS) of uroplakin Ⅱ (UP Ⅱ ) mRNA, a specific gene expressed in bladder urothelium, were selected in order to provide a novel method for targeted therapy of transitional cell carcinoma (TCC) of bladder. The 20 mer random oligonucleotide library was synthesized, hybridized with in vitro transcripted total UPⅡ cRNA, then digested by RNase H. After primer extension and autoradiography, the AAS of UPⅡ were selected. The RNADraw soft- ware was used to analyze and choose the AAS with obvious stem-loop structures, according to which the complementary antisense oligonucleotides (AS-ODN) were synthesized. With the AS-ODN0 designed only by RNADraw as a control, the AS-ODNs were transferred into UP Ⅱ highly-expressing cell line RT4. The cellular expression of UPⅡ mRNA was detected by RT-PCR and Western blot. Twelve AAS of UPⅡ mRNA were selected in vitro. Four AAS with stem-loop structures were chosen, locating at 558-577, 552-571, 217-236 and 97-116 bp of UP Ⅱ mRNA respectively. After transfection with the corresponding AS-ODN (AS-ODN1, AS-ODN2, AS-ODN3 and AS-ODN4) for 18 h, the UPⅡ mRNA levels in RT4cells were reduced by 29,3%, 82.7%, 71.3% and 70.9%, while UP Ⅱ protein levels were decreased by 20.2%, 78.5%, 65.2% and 64.4% respectively, which were significantly higher than those of AS-ODN0 (14.3%, 12.1% respectively) (P〈0.01). The AAS of UPⅡ mRNA was effectively selected in vitro by random oligonucletide library/RNase H cleavage method in combination with computer software analysis, which had important reference values for further studying biological functions of UP Ⅱ gene and targeted therapeutic strategy for TCC of bladder. 展开更多
关键词 bladder urothelium uroplakin gene antisense accessible sites random oligonucletide library
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膀胱上皮特异性重组腺病毒的构建及其对膀胱癌细胞的抑制作用
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作者 金伟伟 何向东 +7 位作者 王志平 王德贵 魏海燕 周钦 田俊强 付生军 王含章 张红娟 《现代泌尿生殖肿瘤杂志》 2010年第3期173-177,共5页
目的构建特异作用于尿路上皮细胞的重组腺病毒并研究其对膀胱癌细胞株的抑制作用。方法 RT-PCR测定人类uroplakinⅡ(hUPⅡ)基因的表达模式以及柯萨奇病毒腺病毒联合受体(CAR)对多重细胞系的影响。瞬时转染和荧光素酶检测分析技术测定hU... 目的构建特异作用于尿路上皮细胞的重组腺病毒并研究其对膀胱癌细胞株的抑制作用。方法 RT-PCR测定人类uroplakinⅡ(hUPⅡ)基因的表达模式以及柯萨奇病毒腺病毒联合受体(CAR)对多重细胞系的影响。瞬时转染和荧光素酶检测分析技术测定hUPⅡ启动子的组织特异性。构建重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A和Ad-UPⅡ-Null,限制性内切酶酶切分析和PCR技术检测其构建的正确性。Western blot分析细胞感染重组腺病毒后腺病毒E1A蛋白在膀胱癌细胞株BIU-87中的表达。测定重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A对于膀胱癌细胞系BIU-87细胞的抑制作用。结果膀胱癌细胞系BIU-87细胞表达hUPⅡ和CAR,其中hUPⅡ启动子具有高活性。在细菌技术上使用同源重组,将hUPⅡ启动子和E1A基因插入到5型的重组腺病毒的基因组中。在BIU-87细胞感染重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A后,E1A蛋白的表达呈强阳性。MTT分析证实重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A抑制了膀胱癌BIU-87细胞的生长。结论 hUPⅡ启动子有高组织特异性。重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A对膀胱癌细胞系BIU-87细胞有抑制作用。 展开更多
关键词 重组腺病毒 人类uroplakin 膀胱癌细胞株
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Cloning of Human Uroplakin Ⅱ Gene from Chinese Transitional Cell Carcinoma of Bladder and Construction of Its Eukaryotic Expression Vector
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作者 陈方敏 曾甫清 +4 位作者 童强松 郑丽端 汪良 董继华 鲁功成 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2005年第2期188-190,211,共4页
Summary: To clone Uroplakin Ⅱ gene from Chinese transitional cell carcinoma (TCC) of bladder and construct its eukaryotic expression vector, the molecular cloning method was used to extract total RNA from a GⅢ/ T 3... Summary: To clone Uroplakin Ⅱ gene from Chinese transitional cell carcinoma (TCC) of bladder and construct its eukaryotic expression vector, the molecular cloning method was used to extract total RNA from a GⅢ/ T 3N 0M 0 tissue sample of the bladder TCC patients. The primers were designed by Primer 5.0 software. Full length cDNA of Uroplakin Ⅱ gene was amplified by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR), assayed by nucleic acid sequencing and then inserted between XbaⅠ and HindⅢ restrictive sites of eukaryotic expression vector pcDNA3.0. The recombinant was assayed by restricted enzyme digestion. Under the induction of Lipofectamine 2000, the recombinant was transfected into Uroplakin Ⅱ negative bladder cancer cell line EJ. Cellular expression levels of Uroplakin Ⅱ were detected by RT-PCR. The nucleic acid sequencing results indicated that Chinese Uroplakin Ⅱ cDNA (555 bp) was successfully cloned. The BLAST analysis demonstrated that the cloned sequence is 100 % homologous with sequences reported overseas. The GenBank accession number AY455312 was also registered. The results of restricted enzyme digestion indicated that eukaryotic vector pcDNA-UPⅡ for Uroplakin Ⅱ was successfully constructed. After being transferred with pcDNA-UPⅡ for 72 h, cellular Uroplakin Ⅱ mRNA levels were significantly improved (P<0.01). It is concluded that human Uroplakin Ⅱ gene was successfully cloned from Chinese TCC tissues, which provided a basis for further exploration of the roles of Uroplakin Ⅱ gene in TCC biological behaviors and potential strategies for targeted biological therapy of TCC. 展开更多
关键词 transitional cell carcinoma uroplakin gene molecular cloning gene expression
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Uroplakin Ⅱ基因在膀胱移行细胞癌中的表达及相关性研究
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作者 陈方敏 童强松 +4 位作者 曾甫清 汪良 郑丽端 董继华 鲁功成 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期270-272,共3页
目的 探讨UroplakinⅡ基因 (UPⅡ )在原发和转移性膀胱移行细胞癌 (TCC)中表达与意义。方法 收集 45例膀胱癌 (其中TCC 3 9例 ,非TCC 6例 )患者的癌组织 ,外周静脉血标本 ,提取总RNA ,行逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR ) ,检测UPⅡ基因... 目的 探讨UroplakinⅡ基因 (UPⅡ )在原发和转移性膀胱移行细胞癌 (TCC)中表达与意义。方法 收集 45例膀胱癌 (其中TCC 3 9例 ,非TCC 6例 )患者的癌组织 ,外周静脉血标本 ,提取总RNA ,行逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR ) ,检测UPⅡ基因mRNA的表达。 2 5例其他部位肿瘤及 8例非肿瘤患者组织标本和静脉血作为对照。结果  45例膀胱肿瘤组织标本中 ,UPⅡ基因在TCC组织中平均阳性率 82 .1% (3 2 /3 9) ,6例非TCC类型膀胱癌 0表达。在T1、T2、T3、T4期膀胱TCC患者组织中UPⅡ基因阳性率分别为 76.5 %、71.4%、90 .9%、10 0 .0 % ;在患者外周血中UPⅡ基因阳性率分别为 5 .9%、14 .2 %、72 .7%、10 0 .0 %。在组织和外周血中低分期 (T1、T2 )与高分期 (T3、T4)TCC表达UPⅡ基因阳性率差异有显著性 (P <0 .0 5 )。其中 4例转移者均阳性 ,接受全身化疗后 3例未再表达。 2 5例其他部位肿瘤组织标本 ,7例肺癌在组织中有 1例阳性表达 ,外周静脉血中 0表达 ;5例肾移行细胞癌在组织中 2例阳性 ,外周静脉血 0表达 ;8例非肿瘤患者组织标本及外周静脉中 0表达。结论 组织及外周血中UPⅡ表达阳性率与肿瘤分期 ,是否转移呈相关性 ;检测TCC患者血中UPⅡ基因可作为监测TCC患者是否转移的指标 ,并可在一定程度上反映化疗疗效 ; 展开更多
关键词 uroplakin基因 膀胱移行细胞癌 表达 癌组织 RT-PCR
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膀胱移行细胞癌Uroplakin Ⅱ mRNA反义结合位点的筛选
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作者 童强松 陈方敏 +2 位作者 曾甫清 郑丽端 汪良 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期15-17,共3页
目的 筛选膀胱移行细胞癌 (TCC)高表达基因UroplakinⅡ (UPⅡ )的反义结合位点(AAS)。方法 合成 2 0聚随机寡核苷酸文库 ,与全长UPⅡcRNA杂交 ,RNaseH酶切割后 ,经引物延伸、放射自显影、RNADraw软件分析 ,筛选UPⅡmRNA的AAS ,合成反... 目的 筛选膀胱移行细胞癌 (TCC)高表达基因UroplakinⅡ (UPⅡ )的反义结合位点(AAS)。方法 合成 2 0聚随机寡核苷酸文库 ,与全长UPⅡcRNA杂交 ,RNaseH酶切割后 ,经引物延伸、放射自显影、RNADraw软件分析 ,筛选UPⅡmRNA的AAS ,合成反义寡核苷酸 (AS ODN) ,转染RT4细胞株 18h后 ,RT PCR检测UPⅡmRNA水平。结果 筛选出 4个具有茎环结构的AAS (5 5 8~ 5 77bp、5 5 2~ 5 71bp、2 17~ 2 3 6bp、97~ 116bp) ,AS ODN对UPⅡmRNA的封闭效率分别为 2 9.3 % (P <0 .0 1)、82 .7% (P <0 .0 1)、71.3 % (P <0 .0 1)、70 .9% (P <0 .0 1)。结论 随机寡核苷酸文库 /RNaseH酶切割法能在体外筛选出UPⅡmRNA的AAS ,为研究UPⅡ生物学功能、TCC靶向生物治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 MRNA水平 膀胱移行细胞癌 反义 ODN 体外筛选 寡核苷酸 结合位点 酶切 文库 生物学功能
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与Cytokeratin 20相比,uroplakinⅡ是膀胱癌淋巴结转移分子诊断更有前途的标记物
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作者 宋毅 《中华泌尿外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期864-864,共1页
目前,根治忡膀胱全切术后淋巴结病理检查方法费时费力。作者对膀胱癌患者盆腔淋巴结表达Uroplakin Ⅱ(UP Ⅱ)和Cytokeratin 20(CK20)的情况进行了系统研究。21例膀胱癌患者接受了根治性膀胱全切和盆腔淋巴结清扫术,共取到82个盆... 目前,根治忡膀胱全切术后淋巴结病理检查方法费时费力。作者对膀胱癌患者盆腔淋巴结表达Uroplakin Ⅱ(UP Ⅱ)和Cytokeratin 20(CK20)的情况进行了系统研究。21例膀胱癌患者接受了根治性膀胱全切和盆腔淋巴结清扫术,共取到82个盆腔淋巴结和19个膀胱肿瘤标本以备逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)实验。19例膀胱肿瘤标本中,UPⅡ和CK20 mRNA表达分别为19例(100.0%)和13例(68.4%);16例病理证实盆腔淋巴结转移的淋巴结标本中, 展开更多
关键词 CYTOKERATIN 20 uroplakin 膀胱癌 淋巴结转移分子诊断 标记物
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