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过表达及沉默细胞黏附分子1基因膀胱癌细胞株的构建
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作者 刘莉 杨永姣 +4 位作者 陈业刚 王尚任 刘晓强 陈少峰 孙光 《山东医药》 CAS 北大核心 2016年第7期20-23,共4页
目的构建过表达及沉默细胞黏附分子1(CADM1)基因的膀胱癌细胞株。方法培养并收集膀胱癌细胞株T24。1过表达CADM1基因T24细胞构建:将T24细胞分为1、2、3组,real-time PCR扩增CADM1基因全长,与慢病毒载体p HBLV-IRES-Zs Green-PGK-puro进... 目的构建过表达及沉默细胞黏附分子1(CADM1)基因的膀胱癌细胞株。方法培养并收集膀胱癌细胞株T24。1过表达CADM1基因T24细胞构建:将T24细胞分为1、2、3组,real-time PCR扩增CADM1基因全长,与慢病毒载体p HBLV-IRES-Zs Green-PGK-puro进行连接(1组),并设载体对照组(2组)和空白对照(3组);经酶切及测序鉴定正确后在293T细胞中包装病毒,病毒浓缩后感染T24细胞。2沉默CADM1基因T24细胞构建:将T24细胞分为A、B、C、D、E组,设计3条针对CADM1基因的干扰序列(siRNA1/2/3)分别与载体p HBLV-U6-shRNA-ZsGreen-Puro进行连接(A、B、C组),D组与p HBLV-U6-Zs Green-Puro进行连接,E组为空白对照;经双酶切、PCR及测序鉴定连接载体,在293T细胞中包装病毒,病毒浓缩后感染T24细胞。采用real-time PCR检测T24细胞中的CADM1 mRNA,Western blotting法检测CADM1蛋白。结果过表达和沉默CADM1基因的慢病毒载体及细胞株均正确构建。1、2、3组CADM1 mRNA相对表达量分别为4.84±0.02、1.12±0.03、1.00±0.00,CADM1蛋白相对表达量分别为4.53±0.03、1.05±0.04、1.00±0.01,1组CADM1 mRNA及蛋白相对表达量高于2、3组(P均<0.05)。A、B、C、D、E组CADM1 mRNA相对表达量分别为0.28±0.05、0.98±0.02、0.74±0.01、0.99±0.01、1.00±0.00,CADM1蛋白相对表达量分别为0.33±0.04、0.86±0.12、0.67±0.07、1.00±0.04、1.00±0.03,A组CADM1 mRNA及蛋白相对表达量低于B、C、D、E组(P均<0.05)。结论成功构建了过表达及沉默CADM1基因的膀胱癌细胞株T24。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 膀胱癌细胞株 细胞黏附分子1 基因沉默
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猪苓多糖对膀胱癌T24细胞凋亡及细胞周期分布的影响 被引量：2
2
作者 曾星 梅玉屏 +1 位作者 黄羽 黄建华 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第S1期137-139,共3页
目的:探讨中药猪苓多糖(PPS)对膀胱癌 T24细胞的作用。方法:应用细胞计数形态学观察和流式细胞分析技术观察 PPS 对 T24细胞形态、细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。结果:PPS 组细胞数量减少,细胞形态改变,较多细胞伸出伪足。PPS 组凋... 目的:探讨中药猪苓多糖(PPS)对膀胱癌 T24细胞的作用。方法:应用细胞计数形态学观察和流式细胞分析技术观察 PPS 对 T24细胞形态、细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。结果:PPS 组细胞数量减少,细胞形态改变,较多细胞伸出伪足。PPS 组凋亡细胞与对照组比较差异无显著性,但细胞周期分布中 S期细胞增加,G_2期细胞减少。结论:PPS 有抑制 T24细胞增殖作用,可能是通过阻止 T24细胞由 S 期进入G_2期所致。 展开更多
关键词 猪苓多糖 膀胱癌 T24细胞 细胞周期
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