尿素转运因子B影响牛瘤胃尿素氮再循环的机制 被引量：2

1

作者 付彤 廉红霞 +3 位作者 高腾云 赵卫东 孙宇 李改英 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期2798-2803,共6页

尿素转运因子B(UT-B)是高选择性快速通透尿素的膜通道蛋白分子,介导尿素顺浓度梯度的跨膜转运,对于尿素氮进入瘤胃的再循环过程起着关键的调控作用。其基因表达受饲粮氮水平及瘤胃发酵参数和内环境指标等影响。但UT-B如何调控牛瘤胃尿... 尿素转运因子B(UT-B)是高选择性快速通透尿素的膜通道蛋白分子,介导尿素顺浓度梯度的跨膜转运,对于尿素氮进入瘤胃的再循环过程起着关键的调控作用。其基因表达受饲粮氮水平及瘤胃发酵参数和内环境指标等影响。但UT-B如何调控牛瘤胃尿素氮再循环,尚有待进一步研究。本文旨在就牛瘤胃尿素氮再循环及UT-B在牛瘤胃尿素氮再循环中的作用进行综述,同时也对影响UT-B表达的因素,如饲粮氮水平和瘤胃发酵参数及内环境指标等进行探讨。 展开更多

关键词 尿素转录因子b 尿素氮再循环 瘤胃 牛

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高盐饮食对尿素通道蛋白B基因缺失小鼠动脉血压的影响及其机制 被引量：2

2

作者 王松 郭瀛泽 +6 位作者 李天舒 宋金萍 刘科苑 周伟 赵丽晶 姜铁超 郭丽荣 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1052-1057,I0004,共7页

目的:探讨高盐饮食对尿素通道蛋白B基因(UT-B)缺失(UT-B^-/-)小鼠动脉血压的影响,阐明UT-B^-/-导致小鼠动脉血压改变的可能机制。方法:杂合子小鼠交配获得遗传背景相同野生型(UT-B^+/+)小鼠和UT-B^-/-小鼠;选取4周龄雄性UT-B^+/+小鼠和U... 目的:探讨高盐饮食对尿素通道蛋白B基因(UT-B)缺失(UT-B^-/-)小鼠动脉血压的影响,阐明UT-B^-/-导致小鼠动脉血压改变的可能机制。方法:杂合子小鼠交配获得遗传背景相同野生型(UT-B^+/+)小鼠和UT-B^-/-小鼠;选取4周龄雄性UT-B^+/+小鼠和UT-B^-/-小鼠,分别给予4周普通饮食(0.3%NaCl)或高盐饮食(8.0%NaCl),分为UT-B^+/+小鼠+普通饮食组(UT-B^+/++N)、UT-B^-/-小鼠+普通饮食组(UT-B^-/-+N)、UT-B^+/+小鼠+高盐饮食组(UT-B^+/++H)和UT-B^-/-小鼠+高盐饮食组(UT-B^-/-+H),共4组。监测各组小鼠饮水量和平均动脉压的变化,采用RT-PCR法、Westernblotting法和免疫组织化学法检测脑组织脉络丛(CP)UT-BmRNA和蛋白表达水平和定位,ELISA法检测各组小鼠血清血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平和脑脊液中钠离子水平。结果:PCR法检测鼠尾基因组DNA,UT-B^+/+小鼠在400bp处有1条碱基片段,杂合子小鼠在250和400bp处各有1条碱基片段,UT-B^-/-小鼠在250bp处有1条碱基片段。与普通饮食组比较,高盐饮食组小鼠饮水量明显增加(P<0.01);与UT-B^-/-小鼠+普通饮食组和UT-B^+/+小鼠+高盐饮食组比较,UT-B^-/-小鼠+高盐饮食组小鼠平均动脉压明显升高(P<0.01);UT-BmRNA和蛋白表达于UT-B^+/+小鼠脑组织CP上皮细胞。与UT-B^-/-小鼠+普通饮食组和UT-B^+/+小鼠+高盐饮食组比较,UT-B^-/-小鼠+高盐饮食组小鼠血清AngⅡ水平明显升高(P<0.01),脑脊液中钠离子水平明显升高(P<0.05)。结论:高盐 饮食可导致UT-B^-/-小鼠平均动脉压明显升高,其机制与升高小鼠血清AngⅡ和脑脊液钠离子水平有关。 展开更多

关键词 高盐饮食 尿素通道蛋白b 平均动脉压 脑脊液 钠离子

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尿素通道蛋白B敲除小鼠海马毛细血管的体视学 被引量：1

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作者 侯良绢 冉建华 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期442-445,共4页

目的:研究尿素通道蛋白B(UT-B)敲除小鼠海马组织中尿素对海马毛细血管形态结构的影响,探讨UT-B基因敲除小鼠出现抑郁样行为的病理机制.方法:采用糖水偏好实验观察野生型和UT-B基因敲除小鼠的抑郁样行为,尿素检测试剂盒测定2型小鼠海马... 目的:研究尿素通道蛋白B(UT-B)敲除小鼠海马组织中尿素对海马毛细血管形态结构的影响,探讨UT-B基因敲除小鼠出现抑郁样行为的病理机制.方法:采用糖水偏好实验观察野生型和UT-B基因敲除小鼠的抑郁样行为,尿素检测试剂盒测定2型小鼠海马尿素水平,免疫组织化学和体视学定量检测2型小鼠海马毛细血管总长度、总体积、总表面积、平均直径等形态学指标.结果:糖水偏好实验中,野生型和UT-B基因敲除小鼠的糖水偏爱指数分别为77.22％±3.93％vs6L 20％±4.42％,差异具有统计学意义.野生型和UT-B基因敲除小鼠海马尿素水平,海马毛细血管的总长度、总体积、总表面积、平均直径差异均有统计学意义.结论:UT-B敲除导致小鼠海马尿素堆积,引发小鼠海马毛细血管的形态改变,毛细血管总体积下降造成海马血灌注量不足而引发小鼠的抑郁样行为. 展开更多

关键词 海马 毛细血管 尿素通道蛋白b 体视学 小鼠

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尿素通道蛋白B在人膀胱癌组织中的表达及其临床意义 被引量：1

4

作者 历春 付天悦 +1 位作者 杨宝学 盖晓东 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期705-708,I0003,共5页

目的:检测膀胱癌患者肿瘤组织和正常膀胱黏膜组织中尿素通道蛋白B(UT-B)的表达,阐明其在膀胱癌组织中表达的临床意义。方法:收集临床膀胱癌患者术后石蜡包埋标本52例,以正常膀胱黏膜组织15例作为对照,采用免疫组织化学方法检测UT-B蛋白... 目的:检测膀胱癌患者肿瘤组织和正常膀胱黏膜组织中尿素通道蛋白B(UT-B)的表达,阐明其在膀胱癌组织中表达的临床意义。方法:收集临床膀胱癌患者术后石蜡包埋标本52例,以正常膀胱黏膜组织15例作为对照,采用免疫组织化学方法检测UT-B蛋白阳性表达率,分析UT-B蛋白阳性表达率在膀胱癌组织和正常膀胱黏膜表达的差异以及其与患者临床病理参数的关联。结果:UT-B蛋白在膀胱癌组织中低表达,阳性表达率为44.2%;在正常膀胱黏膜组织中高表达,阳性表达率为93.3%,2组UT-B蛋白阳性表达率比较差异有统计学意义(P=0.001)。膀胱癌组织中UT-B蛋白的阳性表达率随肿瘤组织分级的增高而逐渐降低,不同分级间比较差异有统计学意义(P=0.010)。膀胱癌组织中UT-B蛋白在非肌层浸润期(Ta+T1)的阳性表达率明显高于肌层浸润期(T2+T3),组间比较差异有统计学意义(P=0.014)。结论:UT-B蛋白的表达降低或缺失可能促进了膀胱癌的发生发展和侵袭。 展开更多

关键词 膀胱肿瘤 尿素通道蛋白b 免疫组织化学

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尿素通道蛋白B敲除引起小鼠大脑皮质毛细血管形态改变的体视学研究

5

作者 侯良绢 陈林 +3 位作者 张雪 甘胜伟 唐勇 冉建华 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期97-100,共4页

目的:研究尿素通道蛋白B(Urea transporter B,UT-B)敲除对小鼠大脑皮质毛细血管形态结构的影响及出现抑郁样行为的病理机制。方法采用强迫游泳实验观察野生型和UT-B基因敲除小鼠的抑郁样行为,免疫组化技术和体视学方法定量检测两型小鼠... 目的:研究尿素通道蛋白B(Urea transporter B,UT-B)敲除对小鼠大脑皮质毛细血管形态结构的影响及出现抑郁样行为的病理机制。方法采用强迫游泳实验观察野生型和UT-B基因敲除小鼠的抑郁样行为,免疫组化技术和体视学方法定量检测两型小鼠大脑皮质毛细血管总长度、总体积、总表面积、平均直径等形态学指标。结果强迫游泳实验中,野生型和UT-B基因敲除小鼠的不动时间分别为(123±19 s)和(86±13 s),P=0.0012<0.05,差异具有显著性。两型小鼠大脑皮质的体积皱缩率分别为0.53±0.04、0.51±0.07(P>0.05),无显著性差异。野生型小鼠和UT-B基因敲除小鼠大脑皮质毛细血管的总长度为(29.20±1.20)m和(24.00±2.45)m(P=0.093>0.05),总体积为(1.159±0.095)mm3和(0.855±0.060)mm3(P=0.035<0.05),总表面积为(6.143±0.377)cm2和(4.616±0.455)cm2(P=0.042<0.05),平均直径为(6.506±0.161)μm和(5.564±0.118)μm(P=0.016<0.05)。结论:UT-B敲除可能导致小鼠大脑皮质毛细血管总表面积、总体积和平均直径显著下降,造成大脑血灌注量不足而引发小鼠的抑郁样行为。 展开更多

关键词 尿素通道蛋白b 小鼠 体视学 抑郁样行为

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大鼠UT-B重组腺病毒载体的构建及体外转染Caco-2细胞后基因表达

6

作者 张征 刘怡晟 +2 位作者 蒋更如 陈凉 潘曙明 《湖南中医药大学学报》 CAS 2013年第8期66-70,共5页

目的采用GatewayTM技术构建含大鼠尿素转运蛋白B(Urea transporter B,UT-B)和增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fuorescent protein,EGFP)的重组腺病毒载体,并以该载体体外转染Caco-2细胞,观察Caco-2细胞内UT-B的表达。方法分别以pMD1... 目的采用GatewayTM技术构建含大鼠尿素转运蛋白B(Urea transporter B,UT-B)和增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fuorescent protein,EGFP)的重组腺病毒载体,并以该载体体外转染Caco-2细胞,观察Caco-2细胞内UT-B的表达。方法分别以pMD18-UT-B和IRES2-EGFP质粒为模板,PCR扩增UT-B和IRES-EGFP序列,通过引物重叠区进行PCR拼接,并在UT-B-IRES-EGFP两端引入attB1、attB2重组臂序列。PCR产物经BP重组系统将UT-B-IRES-EGFP融合基因重组到入门载体pDONR221中,构建入门克隆。入门克隆与表达载体pAD/CMV/V5-DEST使用LR重组系统进行体外重组,构建表达克隆pAD-UT-B-IRES-EGFP,pAD-UT-B-IRES-EGFP转化DH-5α,筛选阳性克隆,PCR及测序验证。pAD-UT-BIRES-EGFP用Pac I酶切线性化后由Lipofectamine 2000介导转染293A细胞,包装病毒,收集病毒液并测定滴度。重组的腺病毒体外感染培养的Caco-2细胞,RT-PCR观察Caco-2细胞中UT-B mRNA的表达。结果成功构建了pAD-UT-B-IRES-EGFP载体,经PCR及测序验证,表达载体包含UT-B基因,且序列与GeneBank中收录的大鼠UT-B序列一致。重组的腺病毒感染Caco-2细胞后可检测到UT-B mRNA的表达。结论利用GatewayTM系统成功构建了包含UT-B和IRES-EGFP的腺病毒表达载体,为进一步研究其功能奠定了基础。 展开更多

关键词 尿素转运蛋白b 腺病毒载体 CACO-2细胞 大鼠

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尿素通道蛋白B敲除小鼠脑组织水通道蛋白4表达改变与抑郁样行为的关系

7

作者 袁德智 侯良绢 +3 位作者 田宽 胡玲 李晋芳 冉建华 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期326-331,共6页

目的探讨尿素通道蛋白B(UT-B)敲除小鼠海马超微结构改变,以及水通道蛋白4(AQP4)的表达变化,探讨形态改变与小鼠抑郁样行为的关系。方法采用糖水偏好和强迫游泳实验检测野生型与UT-B敲除小鼠(各10只)的行为差异,透射电子显微电镜观察小... 目的探讨尿素通道蛋白B(UT-B)敲除小鼠海马超微结构改变,以及水通道蛋白4(AQP4)的表达变化,探讨形态改变与小鼠抑郁样行为的关系。方法采用糖水偏好和强迫游泳实验检测野生型与UT-B敲除小鼠(各10只)的行为差异,透射电子显微电镜观察小鼠海马组织的超微结构改变,免疫组织化学观察脑组织AQP4的表达,免疫印迹技术检测AQP4表达水平。结果野生型小鼠与UT-B基因敲除小鼠糖水偏好指数分别为(84.67±4.85)%和(65.67±7.97)%(P<0.001),而强迫游泳实验不动时间分别为(128.56±11.24)s和(209.11±20.99)s(P<0.001);两种行为学检测结果显示,UT-B敲除小鼠表现出抑郁样行为。电子显微镜结果显示,敲除小鼠出现神经元神经纤维肿胀和退行性改变,血管周围星形胶质细胞终足肿胀。免疫组织化学结果显示,敲除小鼠脑皮质、海马、丘脑等部位AQP4免疫阳性细胞数量明显减少,AQP4免疫阳性细胞主要分布于软脑膜、室管膜及脑血管周围,但脑血管周围免疫染色减弱。免疫印迹法检测提示,海马组织中AQP4表达水平下调27.1%(P<0.05)。结论UT-B基因敲除小鼠脑皮质和海马AQP4表达减少,可能通过影响神经发生和脑代谢引起小鼠的抑郁样行为。 展开更多

关键词 尿素通道蛋白b 水通道蛋白4 抑郁 透射电子显微术 免疫印迹法 小鼠

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UT-B基因敲除小鼠睾丸间质细胞睾酮分泌水平变化及其对性成熟的影响

8

作者 赵丽晶 路明 +5 位作者 韩雪 张睿 李若文 赵雪俭 杨宝学 郭丽荣 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期448-452,F0002,共6页

目的:利用尿素通道蛋白B(UT-B)基因敲除小鼠模型探讨UT-B基因对雄性小鼠睾丸间质Leydig细胞分泌睾酮能力的影响。方法:饲养、繁殖并鉴定UT-B基因敲除(UT-B-/-)小鼠;选取4周龄遗传背景相同的野生型(UT-B+/+)雄性小鼠和UT-B-/-雄性小鼠各5... 目的:利用尿素通道蛋白B(UT-B)基因敲除小鼠模型探讨UT-B基因对雄性小鼠睾丸间质Leydig细胞分泌睾酮能力的影响。方法:饲养、繁殖并鉴定UT-B基因敲除(UT-B-/-)小鼠;选取4周龄遗传背景相同的野生型(UT-B+/+)雄性小鼠和UT-B-/-雄性小鼠各5只,采用放射免疫法检测2种小鼠血清睾酮和黄体生成素(LH)水平;分离培养并鉴定Leydig细胞,测定培养液上清中睾酮的水平。结果:成功获得UT-B-/-雄性小鼠和UT-B+/+雄性小鼠;成功分离培养原代Leydig细胞并经3β-HSD染色方法鉴定纯度达80%以上;4周龄UTB-/-雄性小鼠血清睾酮水平[(7.29±1.27)×10-2μg.L-1]明显高于UT-B+/+雄性小鼠[(5.53±1.58)×10-2μg.L-1](P<0.05),2种小鼠血清LH水平比较差异无统计学意义(P>0.05);UTB-/-雄性小鼠Leydig细胞培养上清中睾酮水平[(17.300±1.179)nmol.L-1]明显高于UT-B+/+雄性小鼠[(12.300±0.916)nmol.L-1](P<0.01)。结论:4周龄UT-B-/-雄性小鼠Leydig细胞分泌睾酮的能力明显高于UT-B+/+小鼠,这可能是UT-B-/-雄性小鼠比UT-B+/+小鼠生殖育龄提前的原因之一。 展开更多

关键词 尿素通道蛋白b 睾丸间质细胞 睾酮 基因敲除

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饲料中添加沸石对慢性肾衰犬结肠尿素转运蛋白B及氨转运体蛋白Rh表达的影响

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作者 朱道仙 刘莉 +3 位作者 陆江 梅素红 袁华根 赵学刚 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期2243-2248,共6页

本研究旨在探究沸石对慢性肾衰犬结肠尿素转运蛋白B及氨转运体蛋白Rh表达的影响。选取15条2岁左右的中华田园犬,采用肾动脉结扎制作慢性肾衰(CRF)模型,另取5只犬仅腹壁切开作为假手术对照组(SOG)。造模成功后,随机等分成3组:模型组(MD)... 本研究旨在探究沸石对慢性肾衰犬结肠尿素转运蛋白B及氨转运体蛋白Rh表达的影响。选取15条2岁左右的中华田园犬,采用肾动脉结扎制作慢性肾衰(CRF)模型,另取5只犬仅腹壁切开作为假手术对照组(SOG)。造模成功后,随机等分成3组:模型组(MD)、低剂量沸石组(LCD)和高剂量沸石组(HCD),SOG组与MD组饲喂基础饲料,LCD组为1%沸石饲料,HCD为5%沸石饲料,试验连续4周。用自动化血液生化仪检测血清尿素氮(BUN)和粪尿素氮(FUN),用谷氨酸脱氢酶法测定门静脉血氨,用尿素检测试剂盒测定尿尿素量(uUrea),qRT-PCR检测结肠黏膜尿素转运蛋白B(UT-B)、氨转运体蛋白b(Rhbg)与氨转运体蛋白c(Rhcg)mRNA表达,Western blot法检测UT-B、Rhbg与Rhcg的蛋白表达。结果显示,MD组的BUN、FUN及门静脉血氨均高于SOG组,uUrea降低(P<0.01),与MD组比较,HCD组的BUN、FUN、门静脉血氨均显著降低(P<0.05);MD组Rhbg、Rhcg的mRNA表达显著高于SOG组(P<0.05),与MD组比较,HCD组Rhbg、Rhcg及LCD组Rhcg的mRNA表达显著下调(P<0.05),各组间UT-B的mRNA表达无显著变化(P>0.05);MD组Rhbg、Rhcg的蛋白表达显著高于SOG组(P<0.05),与MD组比较,HCD组Rhbg、Rhcg的表达降低,MCD组Rhcg表达降低,差异显著(P<0.05),各组间UT-B表达无差异;Pearson相关性分析发现,慢性肾衰犬BUN水平与Rhcg呈强的正相关(r=0.855,P<0.05),与Rhbg呈中等正相关(r=0.769,P<0.05)。以上结果表明,沸石具有促进CRF犬BUN经肠排泄的作用,与结肠黏膜Rhbg、Rhcg的表达下调有关,以添加5%剂量最佳。 展开更多

关键词 沸石 犬 慢性肾衰 尿素转运蛋白b 氨转运体蛋白b(Rhb) 氨转运体蛋白c(Rhc)

原文传递

2mol/L尿素溶血试验在UT-B基因敲除小鼠核型鉴定中的应用 被引量：1

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作者 赵华山 李志满 +6 位作者 吕斌 郭丽荣 梁爽 陈燕 孟艳 杨宝学 赵雪俭 《中国实验诊断学》 2007年第11期1425-1428,共4页

目的探讨2 mol/L尿素溶血试验在UT-B基因敲除小鼠核型鉴定中的作用。方法(1)按SP级动物饲养标准进行饲养和繁殖;以UT-B基因敲除纯合子(UT-B-/-)成年雄鼠与C57/bl雌鼠合笼,繁殖出UT-B基因敲除杂合型小鼠(UT-B+/-,F1代),F1代UT-B+/-雄、... 目的探讨2 mol/L尿素溶血试验在UT-B基因敲除小鼠核型鉴定中的作用。方法(1)按SP级动物饲养标准进行饲养和繁殖;以UT-B基因敲除纯合子(UT-B-/-)成年雄鼠与C57/bl雌鼠合笼,繁殖出UT-B基因敲除杂合型小鼠(UT-B+/-,F1代),F1代UT-B+/-雄、雌鼠交配获F2代小鼠。(2)取F2代小鼠剪尾提取基因组DNA进行核型鉴定筛选纯合子小鼠(UT-B-/-)和野生型小鼠(UT-B+/+);(3)应用2 mol/L尿素溶血试验和肾脏RT-PCR进行UT-B-/-(JKnull)表型鉴定。结果(1)在SP级饲养和繁殖的条件下,已获得足够的UT-B-/-和UT-B+/+小鼠;(2)2 mol/L尿素溶血试验证明,UT-B+/+小鼠和UT-B+/-小鼠的红细胞加入到2 mol/L尿素中立刻溶血,UT-B-/-小鼠的红细胞10 min内不溶显示溶血抵抗。结论2 mol/L尿素溶血试验可准确地鉴定出UT-B-/-小鼠,与基因组DNA的PCR鉴定方法联合应用,可以使引进的UT-B-/-小鼠稳定繁殖、传代。 展开更多

关键词 UT-b 基因敲除 小鼠 尿素 溶血试验

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大鼠尿素转运蛋白B基因克隆及真核表达载体的构建

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作者 陈凉 刘怡晟 +2 位作者 蒋更如 张征 潘曙明 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1109-1112,共4页

目的克隆sD大鼠尿素转运蛋白B（ureatransporterB，UT-B）的CDS全长基因并构建其真核表达载体。方法从SD大鼠肾髓质中提取总RNA并经逆转录反应获取总cDNA，以cDNA为模板，PCR扩增UT-B基因的CDS区全长片段，PCR产物加＂A＂尾后克隆至pMD-... 目的克隆sD大鼠尿素转运蛋白B（ureatransporterB，UT-B）的CDS全长基因并构建其真核表达载体。方法从SD大鼠肾髓质中提取总RNA并经逆转录反应获取总cDNA，以cDNA为模板，PCR扩增UT-B基因的CDS区全长片段，PCR产物加＂A＂尾后克隆至pMD-18T克隆载体，双酶切后获取UT-B片段，T4DNA连接酶将UT-B片段与KpnI和BamHI双酶切后的真核表达载体pcDNA3-1（-）连接，构建大鼠UT-B真核表达载体pcDNA3．1（-）-UT-B。结果成功克隆了sD大鼠UT-B基因，构建的pcDNA3．1（-）-UT-B载体经PCR扩增、KpnI和BamHI双酶切鉴定及测序验证，表达载体包含UT-B基因，且UT-B碱基序列与GeneBank中收录的大鼠UT-B序列-致。结论成功克隆了该基因并构建了其真核表达载体pcDNA3．1（-）-UT-B，为进-步进行UT-B基因转染治疗尿毒症的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 尿素转运蛋白b(UT—b) 基因克隆 载体构建 大鼠 尿毒症

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转录因子GATA结合蛋白2在奶牛瘤胃上皮细胞中对尿素转运因子-B基因启动子的作用研究

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作者 张传凯 刘怡帆 +4 位作者 何刘宽 张立阳 付彤 高腾云 廉红霞 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期5349-5358,共10页

本研究旨在探明转录因子GATA结合蛋白2(GATA2)在奶牛瘤胃上皮细胞中对尿素转运因子-B(UT-B)基因启动子的作用。首先构建UT-B基因的启动子载体与GATA2真核表达载体,二者共转染奶牛瘤胃上皮细胞,通过荧光素酶报告基因研究GATA2过表达对UT-... 本研究旨在探明转录因子GATA结合蛋白2(GATA2)在奶牛瘤胃上皮细胞中对尿素转运因子-B(UT-B)基因启动子的作用。首先构建UT-B基因的启动子载体与GATA2真核表达载体,二者共转染奶牛瘤胃上皮细胞,通过荧光素酶报告基因研究GATA2过表达对UT-B基因启动子转录活性的调控作用。不同浓度(0.5、1.0和1.5 mmol/L)尿素作用下,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测氮转运相关基因UT-B、GATA2、水通道蛋白3(AQP3)的基因表达量,Western blot检测其蛋白表达量。结果表明:1)1.0 mmol/L尿素可显著提高体外培养条件下奶牛瘤胃上皮细胞UT-B、GATA2及AQP3基因和蛋白表达量(P<0.05)。2)奶牛瘤胃上皮细胞中,GATA2显著上调UT-B-1、UT-B-2基因启动子活性(P<0.05)。由此可见,GATA2影响氮转运相关基因(AQP3、UT-B)转录变化且对UT-B基因启动子具有调控作用,这对探明奶牛瘤胃氮再循环的机制,丰富奶牛氮素营养理论具有重要意义。 展开更多

关键词 奶牛 瘤胃上皮细胞 尿素转运因子-b GATA2 特异结合

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