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大口黑鲈溃疡综合征病毒MCP基因的原核表达及重组蛋白的免疫效果初步分析 被引量：8
1
作者 马冬梅 邓国成 +3 位作者 白俊杰 江小燕 曹婷婷 蔡磊 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期139-144,共6页
为了预防近年来流行于广东省养殖大口黑鲈(Micropterus salmoides)中的病毒性溃疡综合征,以大口黑鲈溃疡综合征病毒(Largemouth bass ulcerative syndrome virus,以下简称LBUSV)的主要衣壳蛋白(MCP)作为目标抗原蛋白,将MCP基因开放阅读... 为了预防近年来流行于广东省养殖大口黑鲈(Micropterus salmoides)中的病毒性溃疡综合征,以大口黑鲈溃疡综合征病毒(Largemouth bass ulcerative syndrome virus,以下简称LBUSV)的主要衣壳蛋白(MCP)作为目标抗原蛋白,将MCP基因开放阅读框插入到pBV220载体中,转化大肠杆菌DH5α,构建重组表达MCP蛋白的工程菌。重组菌经过42℃温度诱导和SDSPAGE电泳,检测到在分子量51 k D处有一条特异表达蛋白带,重组蛋白约占重组菌体总蛋白的30%。重组MCP蛋白经洗涤、纯化、溶解、复性和透析后纯度达90%以上。将纯化后的重组蛋白与不完全弗氏佐剂混合、乳化后,免疫大口黑鲈,然后进行感染实验,感染后20 d疫苗保护率最高达67.7%。结果表明,该病毒MCP蛋白具有一定的免疫原性,可以作为制作重组疫苗的候选蛋白。 展开更多
关键词 大口黑鲈 溃疡综合征病毒 主要衣壳蛋白 原核表达 免疫效果
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大口黑鲈溃疡综合征病毒MCP基因序列分析及PCR快速检测方法的建立 被引量：10
2
作者 马冬梅 白俊杰 +3 位作者 邓国成 李胜杰 叶星 江小燕 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1149-1156,共8页
为了早期快速诊断近年来流行于广东省养殖大口黑鲈(Micropterussalmoides)中的病毒性溃疡综合征,本研究用基因组步移的方法获得了大口黑鲈溃疡综合征病毒(Largemouthbassulcerativesyndromevirus,LBUSV)主要衣壳蛋白(MCP)基因,该基因编... 为了早期快速诊断近年来流行于广东省养殖大口黑鲈(Micropterussalmoides)中的病毒性溃疡综合征,本研究用基因组步移的方法获得了大口黑鲈溃疡综合征病毒(Largemouthbassulcerativesyndromevirus,LBUSV)主要衣壳蛋白(MCP)基因,该基因编码区全长1392bp。通过序列比较分析,在MCP基因内确定了一段241bp的特异性较强的片段作为靶序列,设计并合成引物,经过优化PCR反应条件,建立了可以快速检测大口黑鲈溃疡综合征病毒的PCR方法。实验表明,在PCR进行到30个循环反应时可以检测到的质粒最小浓度是104拷贝数/μL,相当于104个病毒粒子。利用该方法,从天然感染LBUSV的大口黑鲈脾脏组织DNA可扩增出241bp的片段,而健康大口黑鲈和感染了传染性脾肾坏死病毒样病毒的大口黑鲈脾脏组织则没有扩增条带。本研究建立的PCR检测方法具有检测快速、成本低、准确性高的特点,适用于大范围早期病害诊断的推广应用。 展开更多
关键词 大口黑鲈溃疡综合征病毒 大口黑鲈 虹彩病毒 主要衣壳蛋白 序列分析 PCR检测
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大口黑鲈溃疡综合征病毒TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：8
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作者 马冬梅 白俊杰 +2 位作者 邓国成 李胜杰 张莉莉 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期99-102,共4页
根据大口黑鲈溃疡综合征病毒（Largemouth bass ulcerative syndrome virus,LBUSV）的甲基转移酶（MTase）基因核苷酸序列设计引物及TaqMan-MGB探针,优化荧光定量PCR反应条件和反应体系,建立了LBUSV的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测方法... 根据大口黑鲈溃疡综合征病毒（Largemouth bass ulcerative syndrome virus,LBUSV）的甲基转移酶（MTase）基因核苷酸序列设计引物及TaqMan-MGB探针,优化荧光定量PCR反应条件和反应体系,建立了LBUSV的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测方法.用含有MTase基因的质粒pDNA-MT系列稀释作为标准品模板,在荧光定量PCR仪上进行PCR反应,绘制标准曲线,斜率为-3.24,R2=0.999,呈现很好的线性关系,扩增效率1.04.灵敏度检测结果表明,PCR反应24个循环时可以检测到的质粒最小浓度是102拷贝数/μL.选用107、106、105、104拷贝数/μL 4个浓度梯度质粒做模板,变异系数在1.1%-3.4%范围内,说明该方法具有良好的重复性和稳定性.利用该方法可以准确地检测出感染LBUSV的病鱼,特异性强. 展开更多
关键词 大口黑鲈溃疡综合征病毒 TAQMAN-MGB探针 定量PCR 病毒检测
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