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应用磷酸化蛋白质组学方法初步研究喉癌相关基因LCRG1的功能 被引量：6
1
作者 章晓鹏 肖志强 +6 位作者 李萃 李建玲 余艳辉 欧阳咏梅 冯雪萍 张鹏飞 陈主初 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第6期508-516,共9页
mRNA差异显示技术克隆的喉癌相关基因LCRG1,对不表达该基因的喉癌细胞系(Hep-2)的生长具有明显抑制作用.软件分析推测,LCRG1可能在细胞信号传导中发挥作用.为进一步地研究LCRG1的功能,应用RT-PCR和平板克隆形成实验证实,经多次传代的Hep... mRNA差异显示技术克隆的喉癌相关基因LCRG1,对不表达该基因的喉癌细胞系(Hep-2)的生长具有明显抑制作用.软件分析推测,LCRG1可能在细胞信号传导中发挥作用.为进一步地研究LCRG1的功能,应用RT-PCR和平板克隆形成实验证实,经多次传代的Hep-2/LCRG1细胞,仍表达LCRG1,且LCRG1具有显著的抑制细胞增殖的能力.抽提Hep-2/LCRG1和Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系总蛋白质,应用固相pH梯度(IPG)双向凝胶电泳(2DGE),结合抗酪氨酸磷酸化抗体的免疫印迹和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS),鉴定酪氨酸磷酸化的蛋白质.得到了分辨率较高、重复性较好的Hep-2/LCRG1和Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系的总蛋白质双向凝胶电泳图谱;结合免疫印迹反应、软件分析和质谱技术识别并鉴定了13个差异反应的酪氨酸磷酸化的蛋白质.这些蛋白质参与了细胞信号传导和细胞代谢等过程.推测LCRG1可能是通过调节这些蛋白质的酪氨酸磷酸化、去磷酸化状态,参与细胞增殖、代谢和凋亡等过程的调控,而发挥抑瘤作用.这为全面、真实地揭示LCRG1抑瘤作用的分子机理提供了新思路. 展开更多
关键词 LCRG1基因 Hep-2/LCRG1细胞系 Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系 双向凝胶电泳 MALDI-TOF-MS 免疫印迹 酪氨酸磷酸化蛋白质 蛋白质印迹
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姜黄素对缺血再灌注H9c2心肌细胞凋亡和GSK-3表达及其磷酸化的影响 被引量：9
2
作者 虞燕萍 周承亮 +1 位作者 傅云峰 黄先玫 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期240-243,共4页
目的观察姜黄素对缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)H9c2心肌细胞凋亡和糖原合成酶激酶3(GSK-3)表达及其磷酸化的影响。方法利用缺血台氏液对体外培养的H9c2心肌细胞模拟I/R处理,同时随机分为模型组(模拟缺血90min,再灌注30min)、... 目的观察姜黄素对缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)H9c2心肌细胞凋亡和糖原合成酶激酶3(GSK-3)表达及其磷酸化的影响。方法利用缺血台氏液对体外培养的H9c2心肌细胞模拟I/R处理,同时随机分为模型组(模拟缺血90min,再灌注30min)、姜黄素组(再灌注同时加入7.5μmol/L姜黄素)和对照组(正常台氏液培养120min代替模拟I/R),采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,采用Western blot检测GSK-3、酪氨酸磷酸化GSK-3(pTyr-GSK-3)和丝氨酸磷酸化GSK-3(pSer-GSK-3)蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组H9c2细胞凋亡率明显提高(t=10.439,P=0.000),模型组pTyr-GSK-3和pSer-GSK-3表达均显著增加(t=5.208,P=0.006;t=5.854,P=0.004)。与模型组比较,姜黄素组凋亡率及pTyr-GSK-3表达水平显著降低(t=-8.325,P=0.001;t=-3.607,P=0.023),存活率及pSer-GSK-3表达水平显著升高(t=9.165,P=0.001;t=3.747,P=0.02)。结论 GSK-3的酪氨酸和丝氨酸磷酸化可能参与心肌细胞I/R损伤,姜黄素减少I/R心肌细胞凋亡可能与其通过减少酪氨酸磷酸化、增加丝氨酸磷酸化抑制GSK-3活性有关。 展开更多
关键词 姜黄素 心肌细胞 缺血再灌注 糖原合成酶激酶-3 酪氨酸磷酸化蛋白 丝氨酸磷酸化蛋白
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槲皮素对血小板衍生生长因子诱导的血管平滑肌细胞酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响 被引量：6
3
作者 黄慧 王昌明 +2 位作者 阳耀忠 黄文新 陈建中 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 1999年第1期55-57,共3页
目的：研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂槲皮素（quercetin）对血小板衍生生长因子（PDGF）诱导的血管平滑肌细胞（SMC）酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响。方法：采用噻唑蓝比色法，流式细胞术分析槲皮素对PDGF诱导的SMC增殖的影响，应用免疫印迹... 目的：研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂槲皮素（quercetin）对血小板衍生生长因子（PDGF）诱导的血管平滑肌细胞（SMC）酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响。方法：采用噻唑蓝比色法，流式细胞术分析槲皮素对PDGF诱导的SMC增殖的影响，应用免疫印迹法分析观察槲皮素对PDGF诱导的SMC酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响。结果：与对照组相比，槲皮素处理组可显著地抑制PDGF诱导的SMC增殖及酪氨酸磷酸化蛋白的表达，尤以酪氨酸磷酸化蛋白分子量为85～180kD明显。结论：槲皮素可显著地抑制PDGF诱导的SMC酪氨酸磷酸化蛋白的表达。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 血管平滑肌细胞 PDGF 槲 槲皮素
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非小细胞肺癌患者组织及外周血中CABYR的表达及意义
4
作者 盛思源 卢传刚 +1 位作者 周蕾 杨志英 《湘南学院学报（医学版）》 2023年第3期6-10,共5页
目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者肺癌组织和外周血中钙离子结合酪氨酸磷酸化调节蛋白(CABYR)的表达水平,探讨CABYR作为非小细胞肺癌患者肿瘤标志物的临床意义。方法收集NSCLC患者肿瘤组织及其对应癌旁组织、肺癌患者和正常人外周血,同... 目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者肺癌组织和外周血中钙离子结合酪氨酸磷酸化调节蛋白(CABYR)的表达水平,探讨CABYR作为非小细胞肺癌患者肿瘤标志物的临床意义。方法收集NSCLC患者肿瘤组织及其对应癌旁组织、肺癌患者和正常人外周血,同时收集食道癌患者肿瘤组织及其对应癌旁组织作为其他肿瘤对照,用实时荧光定量PCR检测肺癌组织和外周血中CABYR-a/b mRNA的表达;用免疫组织化学法(IHC)检测肺癌组织及其对应癌旁组织中CABYR的表达水平。结果免疫组化证实NSCLC组织中有CABYR的表达;恶性与癌旁组织CABYR-a/b相对表达比值大于1的患者,在NSCLC患者肿瘤组织中CABYR-a/b mRNA的表达率(58.33%)明显高于食道癌组织(12.5%);与正常人外周血相比,NSCLC患者外周血中CABYR-a/b mRNA的表达水平略上调,但无统计学意义(P>0.05);与293T细胞株比较,CABYR-a/b在肺癌细胞株A549和H1650中的表达显著增高(P<0.01)。结论CABYR在NSCLC患者肿瘤组织和外周血中的表达均上调,对NSCLC的诊断和免疫治疗具有一定的临床价值,可能作为NSCLC的生物标志物,为非小细胞肺癌的免疫治疗提供一个新的靶点。 展开更多
关键词 钙离子结合酪氨酸磷酸化调节蛋白 非小细胞肺癌 肿瘤睾丸抗原
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LncRNA00067110通过靶向Cabyr调控B16-F10细胞增殖、凋亡和黑色素生成 被引量：1
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作者 杨婉赟 Ajab Khan +4 位作者 贾琼 胡世雄 焦丁兴 于雷涛 范瑞文 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期799-808,共10页
长非编码RNA(lncRNA)是一类转录长度大于200个核苷酸的非编码RNA。现已证明,多个lncRNA是潜在的癌症治疗靶点。LncRNA00067110是从小鼠黑色素瘤B16-F10细胞和正常黑色素细胞转录物组图谱中发现的差异表达基因。为研究lncRNA00067110是... 长非编码RNA(lncRNA)是一类转录长度大于200个核苷酸的非编码RNA。现已证明,多个lncRNA是潜在的癌症治疗靶点。LncRNA00067110是从小鼠黑色素瘤B16-F10细胞和正常黑色素细胞转录物组图谱中发现的差异表达基因。为研究lncRNA00067110是否调控B16-F10细胞的增殖、凋亡和黑色素生成,本文通过LncTar预测和双荧光酶活性验证了钙结合酪氨酸磷酸化调节蛋白(Cabyr)和lncRNA00067110存在靶向关系。通过构建lncRNA00067110的过表达载体,转染B16-F10细胞,经过对B16-F10细胞的转录图谱分析,并对细胞增殖、凋亡和黑色素生成的表型以及相关基因表达变化进行了检测。结果显示,lncRNA00067110靶向Cabyr,在过表达lncRNA00067110的B16细胞中,17个基因呈差异表达。其中,Cabyr的表达被上调,细胞增殖相关基因MEK/ERK/MNK/CREB和黑色素生成相关基因TYR家族成员及CREB的mRNA和蛋白质水平显著被下调,凋亡相关基因AKT和Bcl-2的mRNA水平和蛋白质丰度被上调。进一步通过细胞增殖和凋亡的表型的变化验证了lncRNA00067110的功能。结果提示,lncRNA00067110通过靶向Cabyr,调控相关基因表达,从而抑制B16-F10细胞的增殖和黑色素生成,并诱导黑色素瘤细胞的凋亡,可能成为治疗和抑制黑色素瘤的新的靶点。 展开更多
关键词 lncRNA00067110 B16-F10 增殖 凋亡 黑色素生成 钙结合酪氨酸磷酸化调节蛋白(Cabyr)
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