目的研究p53 249编码子突变对小鼠EF细胞p53功能和信号传导的影响。方法利用基因打靶技术在小鼠ES细胞p53基因249编码子中引入点突变，使编码子249由Arg变成Ser，根据同源重组规律采用PCR或Southern方法筛选带有p53 249突变的阳性ES细...目的研究p53 249编码子突变对小鼠EF细胞p53功能和信号传导的影响。方法利用基因打靶技术在小鼠ES细胞p53基因249编码子中引入点突变，使编码子249由Arg变成Ser，根据同源重组规律采用PCR或Southern方法筛选带有p53 249突变的阳性ES细胞，并通过测序确定该ES细胞的p53 249编码子已经由Arg变成Ser，然后将含突变而不含筛选标记的ES细胞微注射到从Hprt-／-小鼠收集的囊胚中，将注射过的囊胚植入假孕的雌性小鼠子宫，到第14天取小鼠胚胎EF细胞，用含HAT的培养液EDMEM含10％FCS，glutamine，antibiotics，50 mM mecaptoethanol，和HAT（0．016mg of hypoxanthine／ml，0．01 mM aminopterin，0．0048mg of thymidine／m1）]筛选出从ES细胞分化而成的MEF细胞，经测序证实该细胞含有249Arg到Ser的突变后，该细胞用于研究。利用细胞流式仪检测该突变对MEF细胞周期及凋亡的影响，并利用Western检测相关蛋白的表达。结果（1）用uV处理EF细胞后，含p53249编码子突变的EF细胞凋亡百分数，较含野生型p53的EF细胞凋亡百分数明显减少（P〈0．05）。（2）用UV处理EF细胞后，含p53 249编码子突变的EF细胞对UV诱导的G1／G0细胞周期阻滞作用减弱。（3）用UV处理细胞后，含p53 249编码子突变EF细胞的p53的表达，与含野生型p53EF细胞p53的表达没有差别，但含p53249编码子突变EF细胞的BAX和p21的表达，较含野生型p53EF细胞的BAX和P21的表达减少。结论p53 249编码子突变可以减弱p53在UV诱导MEF细胞周期阻滞和凋亡过程中的作用，但对p53的表达没有影响。展开更多
目的探讨不同免疫表型的弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell 1ymphoma,DLBCL)抑癌基因TP53缺失情况的差异。方法根据淋巴瘤细胞免疫标志物CD10、Bcl-6及MUM-1的表达情况,将57例DLBCL石蜡包埋组织标本分为GCB(生发中心样B细胞)与non...目的探讨不同免疫表型的弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell 1ymphoma,DLBCL)抑癌基因TP53缺失情况的差异。方法根据淋巴瘤细胞免疫标志物CD10、Bcl-6及MUM-1的表达情况,将57例DLBCL石蜡包埋组织标本分为GCB(生发中心样B细胞)与non-GCB(非生发中心样B细胞)淋巴瘤两类,用荧光原位杂交(FISH)技术检测GCB与non-GCB类中TP53缺失情况。结果 24例GCB类中有4例(16.7%)TP53缺失,33例non-GCB类中有14例(42.4%)TP53缺失。二者TP53缺失率差异有统计学意义(P<0.05)。结论 non-GCB类患者TP53缺失发生率较高,TP53缺失是non-GCB类预后差的可能原因之一。FISH可以快速、准确、灵敏地检测出TP53的缺失。展开更多
文摘目的研究p53 249编码子突变对小鼠EF细胞p53功能和信号传导的影响。方法利用基因打靶技术在小鼠ES细胞p53基因249编码子中引入点突变，使编码子249由Arg变成Ser，根据同源重组规律采用PCR或Southern方法筛选带有p53 249突变的阳性ES细胞，并通过测序确定该ES细胞的p53 249编码子已经由Arg变成Ser，然后将含突变而不含筛选标记的ES细胞微注射到从Hprt-／-小鼠收集的囊胚中，将注射过的囊胚植入假孕的雌性小鼠子宫，到第14天取小鼠胚胎EF细胞，用含HAT的培养液EDMEM含10％FCS，glutamine，antibiotics，50 mM mecaptoethanol，和HAT（0．016mg of hypoxanthine／ml，0．01 mM aminopterin，0．0048mg of thymidine／m1）]筛选出从ES细胞分化而成的MEF细胞，经测序证实该细胞含有249Arg到Ser的突变后，该细胞用于研究。利用细胞流式仪检测该突变对MEF细胞周期及凋亡的影响，并利用Western检测相关蛋白的表达。结果（1）用uV处理EF细胞后，含p53249编码子突变的EF细胞凋亡百分数，较含野生型p53的EF细胞凋亡百分数明显减少（P〈0．05）。（2）用UV处理EF细胞后，含p53 249编码子突变的EF细胞对UV诱导的G1／G0细胞周期阻滞作用减弱。（3）用UV处理细胞后，含p53 249编码子突变EF细胞的p53的表达，与含野生型p53EF细胞p53的表达没有差别，但含p53249编码子突变EF细胞的BAX和p21的表达，较含野生型p53EF细胞的BAX和P21的表达减少。结论p53 249编码子突变可以减弱p53在UV诱导MEF细胞周期阻滞和凋亡过程中的作用，但对p53的表达没有影响。
