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土元溶栓蛋白的原核表达和活性检测
被引量：
6
1
作者
柴连琴
王乐
+3 位作者
苗迎春
曹阳阳
孟景会
于威
《河南大学学报（自然科学版）》
CAS
2015年第2期187-191,共5页
本文利用兼并引物成功克隆到土元类胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶基因,通过构建该基因的原核重组表达载体及IPTG体外诱导,包涵体蛋白复性,Ni 2+柱亲和层析纯化,最终获得了重组表达目的蛋白.经体外检测,该蛋白具有较好的溶栓活性,这为揭示土元...
本文利用兼并引物成功克隆到土元类胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶基因,通过构建该基因的原核重组表达载体及IPTG体外诱导,包涵体蛋白复性,Ni 2+柱亲和层析纯化,最终获得了重组表达目的蛋白.经体外检测,该蛋白具有较好的溶栓活性,这为揭示土元溶栓作用的分子基础及其进一步的开发利用奠定了基础.
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关键词
土元
类胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶
原核表达
溶栓活性
原文传递
黄粉虫胰蛋白酶样酶基因TMTLSP全长cDNA的克隆和序列分析
被引量：
3
2
作者
叶韵
韩雅莉
+3 位作者
黄明星
孙建平
代春迎
林非凡
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期169-176,共8页
以黄粉虫(Tenebrio molitor)幼虫全RNA逆转录得到的cDNA为模板,参照地鳖(Eupolyphagasinensis)纤溶酶(fibrinolytic enzyme)简并引物,进行温度梯度PCR.以得到的扩增产物为基础,采用RACE得到基因全长cDNA,命名为黄粉虫胰蛋白酶样丝氨酸...
以黄粉虫(Tenebrio molitor)幼虫全RNA逆转录得到的cDNA为模板,参照地鳖(Eupolyphagasinensis)纤溶酶(fibrinolytic enzyme)简并引物,进行温度梯度PCR.以得到的扩增产物为基础,采用RACE得到基因全长cDNA,命名为黄粉虫胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶(Tenebrio molitor trypsin-likeserine protease,TMTLSP).TMTLSP全长869 bp(GenBank No.JN662461),开放阅读框为777 bp,编码258个氨基酸,并具有蛋白酶样特有的起始位点、活性中心预计底物结合位点.经过比对分析,该基因编码的氨基酸序列与赤拟谷盗、谷蠹、光亮扁角水虻、美洲大蠊等多种昆虫的胰蛋白酶或丝氨酸蛋白酶有较高的相似性.本研究将为胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶的提取及研究提供更为广泛的材料及研究依据.
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关键词
黄粉虫
胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶
RACE
克隆
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职称材料
刺参体壁胰/类胰丝氨酸蛋白酶的性质及其在自溶中的作用
被引量：
1
3
作者
徐锦华
孟泽玲
+4 位作者
葛诗琪
薛鹏
张公亮
侯红漫
孙黎明
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2019年第18期95-100,共6页
以刺参体壁中丝氨酸蛋白酶为研究对象,对其部分酶学性质及其与刺参自溶的关系进行研究。采用Tris-HCl缓冲溶液提取、硫酸铵盐析、透析及超滤获得刺参体壁粗酶液。结果显示,以Boc-Phe-Ser-Arg-MCA为底物时,粗酶液的丝氨酸蛋白酶活力最高...
以刺参体壁中丝氨酸蛋白酶为研究对象,对其部分酶学性质及其与刺参自溶的关系进行研究。采用Tris-HCl缓冲溶液提取、硫酸铵盐析、透析及超滤获得刺参体壁粗酶液。结果显示,以Boc-Phe-Ser-Arg-MCA为底物时,粗酶液的丝氨酸蛋白酶活力最高;以其为底物,测得该类蛋白酶在pH值为6.2和8.5时呈现较强酶活力峰值,两者最适温度范围均为50~55℃;Cu^2+、Fe^3+、Pb^2+、Zn^2+强烈抑制该酶的活性,Ca^2+可提高该酶活力;邻菲咯啉、乙二胺四乙酸以及半胱氨酸修饰剂均能够部分抑制该酶活力。4-(2-氨乙基)苯磺酰氟盐酸盐、苯甲基磺酰氟、Na-对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸氯甲基酮、(3S)-7-氨基-1-氯-3-磺酰氨基-2-庚酮盐酸盐、大豆胰蛋白酶抑制剂能够显著抑制蛋白酶的活力以及自溶过程中可溶性蛋白、三氯乙酸可溶性多肽的生成。上述结果表明,刺参体壁中存在至少2种具有一定的金属离子依赖性的胰/类胰丝氨酸蛋白酶,其活性中心或底物识别位点可能有半胱氨酸的参与,该类蛋白酶很可能参与刺参自溶过程中蛋白质的降解。
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关键词
刺参
胰/类胰丝氨酸蛋白酶
酶学特性
自溶
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职称材料
题名
土元溶栓蛋白的原核表达和活性检测
被引量：
6
1
作者
柴连琴
王乐
苗迎春
曹阳阳
孟景会
于威
机构
河南大学生命科学学院生物工程研究所
广东嘉应制药股份有限公司
通许县农业局
出处
《河南大学学报（自然科学版）》
CAS
2015年第2期187-191,共5页
基金
河南省科技厅基础研究项目(122300410127)
河南省教育厅自然科学研究计划项目(2009A180002)
+1 种基金
河南省重大科技攻关项目(132102110066)
河南省科技攻关项目(132102110112)
文摘
本文利用兼并引物成功克隆到土元类胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶基因,通过构建该基因的原核重组表达载体及IPTG体外诱导,包涵体蛋白复性,Ni 2+柱亲和层析纯化,最终获得了重组表达目的蛋白.经体外检测,该蛋白具有较好的溶栓活性,这为揭示土元溶栓作用的分子基础及其进一步的开发利用奠定了基础.
关键词
土元
类胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶
原核表达
溶栓活性
Keywords
Eupolyphaga
sinensis
trypsin
-
like
serine protease
prokaryotic
expression
fibrinolytic
activity
分类号
Q812 [生物学—生物工程]
原文传递
题名
黄粉虫胰蛋白酶样酶基因TMTLSP全长cDNA的克隆和序列分析
被引量：
3
2
作者
叶韵
韩雅莉
黄明星
孙建平
代春迎
林非凡
机构
广东工业大学轻工化工学院生物工程系
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期169-176,共8页
基金
国家自然科学基金项目(No.30772739)
2011年海口市重点科技计划项目(No.2011-0044)
广东工业大学轻工化工学院211工程培育项目(No.20091015)资助~~
文摘
以黄粉虫(Tenebrio molitor)幼虫全RNA逆转录得到的cDNA为模板,参照地鳖(Eupolyphagasinensis)纤溶酶(fibrinolytic enzyme)简并引物,进行温度梯度PCR.以得到的扩增产物为基础,采用RACE得到基因全长cDNA,命名为黄粉虫胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶(Tenebrio molitor trypsin-likeserine protease,TMTLSP).TMTLSP全长869 bp(GenBank No.JN662461),开放阅读框为777 bp,编码258个氨基酸,并具有蛋白酶样特有的起始位点、活性中心预计底物结合位点.经过比对分析,该基因编码的氨基酸序列与赤拟谷盗、谷蠹、光亮扁角水虻、美洲大蠊等多种昆虫的胰蛋白酶或丝氨酸蛋白酶有较高的相似性.本研究将为胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶的提取及研究提供更为广泛的材料及研究依据.
关键词
黄粉虫
胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶
RACE
克隆
Keywords
Tenebrio
molitor
trypsin
-
like
serine protease
RACE
cloning
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
刺参体壁胰/类胰丝氨酸蛋白酶的性质及其在自溶中的作用
被引量：
1
3
作者
徐锦华
孟泽玲
葛诗琪
薛鹏
张公亮
侯红漫
孙黎明
机构
大连工业大学食品学院
国家海洋食品工程技术研究中心
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2019年第18期95-100,共6页
基金
国家自然科学基金青年科学基金项目（31201300）
辽宁省优秀人才项目（LJQ2012048）
文摘
以刺参体壁中丝氨酸蛋白酶为研究对象,对其部分酶学性质及其与刺参自溶的关系进行研究。采用Tris-HCl缓冲溶液提取、硫酸铵盐析、透析及超滤获得刺参体壁粗酶液。结果显示,以Boc-Phe-Ser-Arg-MCA为底物时,粗酶液的丝氨酸蛋白酶活力最高;以其为底物,测得该类蛋白酶在pH值为6.2和8.5时呈现较强酶活力峰值,两者最适温度范围均为50~55℃;Cu^2+、Fe^3+、Pb^2+、Zn^2+强烈抑制该酶的活性,Ca^2+可提高该酶活力;邻菲咯啉、乙二胺四乙酸以及半胱氨酸修饰剂均能够部分抑制该酶活力。4-(2-氨乙基)苯磺酰氟盐酸盐、苯甲基磺酰氟、Na-对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸氯甲基酮、(3S)-7-氨基-1-氯-3-磺酰氨基-2-庚酮盐酸盐、大豆胰蛋白酶抑制剂能够显著抑制蛋白酶的活力以及自溶过程中可溶性蛋白、三氯乙酸可溶性多肽的生成。上述结果表明,刺参体壁中存在至少2种具有一定的金属离子依赖性的胰/类胰丝氨酸蛋白酶,其活性中心或底物识别位点可能有半胱氨酸的参与,该类蛋白酶很可能参与刺参自溶过程中蛋白质的降解。
关键词
刺参
胰/类胰丝氨酸蛋白酶
酶学特性
自溶
Keywords
sea
cucumber
trypsin
and
trypsin
-
like
serine protease
characterization
autolysis
分类号
TS254.4 [轻工技术与工程—水产品加工及贮藏工程]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
土元溶栓蛋白的原核表达和活性检测
柴连琴
王乐
苗迎春
曹阳阳
孟景会
于威
《河南大学学报（自然科学版）》
CAS
2015
6
原文传递
2
黄粉虫胰蛋白酶样酶基因TMTLSP全长cDNA的克隆和序列分析
叶韵
韩雅莉
黄明星
孙建平
代春迎
林非凡
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
3
下载PDF
职称材料
3
刺参体壁胰/类胰丝氨酸蛋白酶的性质及其在自溶中的作用
徐锦华
孟泽玲
葛诗琪
薛鹏
张公亮
侯红漫
孙黎明
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2019
1
下载PDF
职称材料
已选择
0
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