目的建立一种定量检测人体泪液中溶菌酶含量的方法。方法通过改进的Tricine-SDS-PAGE电泳,分析正常人体天然泪液中分子量在3~30 k Da的蛋白质分布,使泪液溶菌酶与其它泪液蛋白有效分离,用Image J软件对溶菌酶电泳条带进行灰度分析,定量...目的建立一种定量检测人体泪液中溶菌酶含量的方法。方法通过改进的Tricine-SDS-PAGE电泳,分析正常人体天然泪液中分子量在3~30 k Da的蛋白质分布,使泪液溶菌酶与其它泪液蛋白有效分离,用Image J软件对溶菌酶电泳条带进行灰度分析,定量测定其中溶菌酶的含量。结果泪液溶菌酶和其它小分子蛋白可用改进的Tricine-SDS-PAGE电泳有效分离,对于人体泪液中的溶菌酶检测专属性良好;上样量10~30μg范围内,溶菌酶含量和电泳条带灰度面积线性关系良好(r=0.9934);分析17例人体泪液的样本,其中溶菌酶的含量在1.38~3.07 mg/m L。结论改进的Tricine-SDS-PAGE电泳法简单直观,并能批量性的一次分析多个样本,可用于科研及临床上人体泪液中溶菌酶的含量检测。展开更多
采用体内注射法，对油松毛虫Dendrolimus tabulaeformis Tsai et Liu 3龄幼虫注射浓度为1．0×10^8孢子／mL的大肠杆菌Escherichia coli菌悬液，诱导其产生抗菌物质，12h后收集制备血淋巴粗提液。分别测定对4种细菌和4种真菌的抗菌...采用体内注射法，对油松毛虫Dendrolimus tabulaeformis Tsai et Liu 3龄幼虫注射浓度为1．0×10^8孢子／mL的大肠杆菌Escherichia coli菌悬液，诱导其产生抗菌物质，12h后收集制备血淋巴粗提液。分别测定对4种细菌和4种真菌的抗菌活性，并检测温度、pH值变化和反复冻融对抗菌活性的影响。采用Tricine—SDS—PAGE电泳法确定抗菌物质的分子量大小。结果发现，诱导后的油松毛虫3龄幼虫血淋巴粗提液对试验的细菌和真菌均有不同程度的抑制作用，其中对革兰氏阴性细菌大肠杆菌E．coli和变形杆菌Proteus species的抑制作用强于革兰氏阳性细菌金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。血淋巴粗提液的的抗菌活性在50℃水浴处理和4～9的pH值条件下保持稳定，反复冻融1～5次抗菌物质的活性降低4．3％～14．9％。电泳结果显示，诱导组血淋巴粗提液在23．2kD和15．0kD处分别出现一条特异性条带，在60．4kD处蛋自带变浅。由此推测从油松毛虫幼虫体内诱导产生的抗菌物质分子量可能是23．2kD和15．0kD。展开更多
文摘采用体内注射法，对油松毛虫Dendrolimus tabulaeformis Tsai et Liu 3龄幼虫注射浓度为1．0×10^8孢子／mL的大肠杆菌Escherichia coli菌悬液，诱导其产生抗菌物质，12h后收集制备血淋巴粗提液。分别测定对4种细菌和4种真菌的抗菌活性，并检测温度、pH值变化和反复冻融对抗菌活性的影响。采用Tricine—SDS—PAGE电泳法确定抗菌物质的分子量大小。结果发现，诱导后的油松毛虫3龄幼虫血淋巴粗提液对试验的细菌和真菌均有不同程度的抑制作用，其中对革兰氏阴性细菌大肠杆菌E．coli和变形杆菌Proteus species的抑制作用强于革兰氏阳性细菌金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。血淋巴粗提液的的抗菌活性在50℃水浴处理和4～9的pH值条件下保持稳定，反复冻融1～5次抗菌物质的活性降低4．3％～14．9％。电泳结果显示，诱导组血淋巴粗提液在23．2kD和15．0kD处分别出现一条特异性条带，在60．4kD处蛋自带变浅。由此推测从油松毛虫幼虫体内诱导产生的抗菌物质分子量可能是23．2kD和15．0kD。
