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二价HIV-1融合抑制剂的设计、合成与活性评价 被引量:3
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作者 凌彦博 王昆 +2 位作者 姜喜凤 蔡利锋 刘克良 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2013年第9期2102-2107,共6页
针对人免疫缺陷病毒跨膜糖蛋白(HIV-1 gp41)N末端重复序列靶标设计二价融合抑制剂,以C肽为模板,通过共价交联形成类似发夹结构的相互平行的2条肽链,研究了二价C肽分子不同连接位点与不同连接臂对抗HIV融合活性的影响.细胞-细胞融合活性... 针对人免疫缺陷病毒跨膜糖蛋白(HIV-1 gp41)N末端重复序列靶标设计二价融合抑制剂,以C肽为模板,通过共价交联形成类似发夹结构的相互平行的2条肽链,研究了二价C肽分子不同连接位点与不同连接臂对抗HIV融合活性的影响.细胞-细胞融合活性测试表明,与单价分子相比,所设计的基于N末端交联的C34或T20的二价分子在前体共价交联后,活性明显提升.基于C34或T20的N末端与C末端均存在发生协同效应的可能性,在C34的N末端设计中β-丙氨酸为最适连接臂,而在C末端的设计中C34C的融合活性提高最大.单价分子CβAC34经过氧化形成二硫键连接的二价分子BiCβAC34,融合活性从43.7 nmol/L提高到6.4 nmol/L,表明二价抑制剂中2条C肽链间具有良好的协同效应.本文结果表明,针对gp41靶标设计的二价融合抑制剂能够相互协同. 展开更多
关键词 跨膜糖蛋白gp41 人免疫缺陷病毒(HIV) 二价分子 融合抑制剂 多肽
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HIV-1型gp41抗原蛋白在大肠杆菌无细胞体系中的表达和免疫反应性检测 被引量:2
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作者 来力 杨修亮 +3 位作者 盛嘉元 黄磊 蔡谨 徐志南 《药物生物技术》 CAS 2016年第1期7-11,共5页
HIV-1型gp41抗原蛋白在HIV初筛诊断中有重要应用。该研究合成了gp41全长基因序列,将其与p IVEX2.4c酶切连接构建表达载体,在大肠杆菌无细胞体系中实现了目标蛋白的全长可溶表达。考察了添加不同浓度非离子型去污剂Brij78对蛋白可溶性的... HIV-1型gp41抗原蛋白在HIV初筛诊断中有重要应用。该研究合成了gp41全长基因序列,将其与p IVEX2.4c酶切连接构建表达载体,在大肠杆菌无细胞体系中实现了目标蛋白的全长可溶表达。考察了添加不同浓度非离子型去污剂Brij78对蛋白可溶性的影响,在0.2%Brij78条件下,可溶性gp41重组蛋白的表达水平达到650μg/m L。Ni2+亲和层析纯化目标蛋白,纯度达到95.6%;超滤浓缩后,蛋白浓度为0.9 mg/m L,总回收率为70.8%。免疫反应性检测结果显示该gp41重组抗原制备的乳胶HIV抗体诊断试纸能与不同滴度的HIV-1型阳性标本反应,在检测线位置出现红色条带,而与HIV-1型阴性标本无反应。该研究制备了具有完整氨基酸序列的HIV-1型gp41重组抗原,为进一步提高HIV抗体诊断试剂的质量打下了基础。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒 跨膜蛋白gp41 无细胞体系 去污剂 亲和层析 乳胶免疫层析 试纸 免疫反应性
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HIV-1 gp41重组抗原的表达及其免疫反应性检测 被引量:1
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作者 张昕 梁权 王缦 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期230-233,共4页
为了在大肠杆菌中表达具有良好免疫反应性的HIV-1gp41重组抗原,本实验运用基因工程技术,经PCR扩增gp41的主要抗原表位序列,BamHⅠ、XhoⅠ双酶切后与E3质粒连接,转化克隆宿主菌DH5α,再提取重组质粒进一步转化表达宿主菌BL21(DE3),经IPT... 为了在大肠杆菌中表达具有良好免疫反应性的HIV-1gp41重组抗原,本实验运用基因工程技术,经PCR扩增gp41的主要抗原表位序列,BamHⅠ、XhoⅠ双酶切后与E3质粒连接,转化克隆宿主菌DH5α,再提取重组质粒进一步转化表达宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白,纯化后标记HRP,通过双抗原夹心酶联免疫方法检测其免疫反应性和特异性。结果表明,获得的HIV-1gp41重组抗原能够与相应抗体特异性结合,与多种无关抗体间无交叉反应,对825份HIV阴性标本检测无错检。检测结果说明该重组抗原具有良好的免疫反应性,在HIV-1抗体诊断试剂中具有潜在的应用价值,为进一步研究gp41抗原奠定了基础。 展开更多
关键词 HIV-1 跨膜蛋白gp41 重组抗原 酶联免疫吸附法
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