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核基质结合区的位置对转基因表达的影响
被引量：
3
1
作者
张俊河
昝玉玺
王天云
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第9期839-843,共5页
为研究核基质结合区(MAR)序列不同插入位置对转基因表达作用的影响,PCR扩增人β-珠蛋白MAR分别插入到含氯霉素乙酰转移酶(chloramphenicol acetyltransferase,CAT)报告基因真核表达载体pCATG表达盒两侧、5′端及3′端.酶切鉴定后,用阳...
为研究核基质结合区(MAR)序列不同插入位置对转基因表达作用的影响,PCR扩增人β-珠蛋白MAR分别插入到含氯霉素乙酰转移酶(chloramphenicol acetyltransferase,CAT)报告基因真核表达载体pCATG表达盒两侧、5′端及3′端.酶切鉴定后,用阳离子聚合物转染CHO细胞,G418筛选出阳性细胞克隆,ELISA分析CAT基因的表达水平,半定量PCR分析CAT基因相对拷贝数.结果表明,表达盒两侧含MAR序列的载体能提高介导的转基因表达水平平均提高10.4倍,5′端含MAR序列的载体表达水平平均提高3.9倍,3′端含MAR序列的载体反而降低转基因表达水平.5′端含MAR序列的表达载体其转基因相对拷贝数高于其它两组载体的基因拷贝数,转基因表达量与基因拷贝数不成正比.
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关键词
核基质结合区
插入位置
转基因表达
报告基因
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职称材料
EGFP小鼠ES细胞来源的生殖系嵌合小鼠的获得和鉴定
2
作者
段彪
邵华
+2 位作者
魏著英
王凤武
旭日干
《Zoological Research》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第4期417-422,共6页
生殖系嵌合体的获得是实现ES细胞介导的转基因途径的决定步骤,而嵌合体的制作及生殖系嵌合体的获得则是判定ES细胞系是否具有配子分化能力的有效方法。利用一株表达绿色荧光蛋白的杂种ES细胞系制备出嵌合体小鼠,共获得9只表达绿色荧光...
生殖系嵌合体的获得是实现ES细胞介导的转基因途径的决定步骤,而嵌合体的制作及生殖系嵌合体的获得则是判定ES细胞系是否具有配子分化能力的有效方法。利用一株表达绿色荧光蛋白的杂种ES细胞系制备出嵌合体小鼠,共获得9只表达绿色荧光蛋白的嵌合体小鼠,其中有8只雄性, 1只雌性,目前均发育成健康成年小鼠。流式细胞检测显示了绿色荧光蛋白在嵌合鼠以下器官的表达情况:心(77.96±15.78) %、脾(84.06±3.60) %、肾(42.49±19.79) %、骨髓(52.02±18.78) %。昆明雌鼠与雄性嵌合鼠杂交1代(F1)毛色表型分析显示该株ES细胞具有生殖系嵌合能力。
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关键词
EGFP转基因小鼠
嵌合体
杂种ES细胞
生殖系
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职称材料
题名
核基质结合区的位置对转基因表达的影响
被引量：
3
1
作者
张俊河
昝玉玺
王天云
机构
新乡医学院生物化学与分子生物学教研室
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第9期839-843,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30470030)
河南省科技厅科技攻关项目(No.0624410041)
河南省教育厅自然科学基金资助项目(No.2008A310008)~~
文摘
为研究核基质结合区(MAR)序列不同插入位置对转基因表达作用的影响,PCR扩增人β-珠蛋白MAR分别插入到含氯霉素乙酰转移酶(chloramphenicol acetyltransferase,CAT)报告基因真核表达载体pCATG表达盒两侧、5′端及3′端.酶切鉴定后,用阳离子聚合物转染CHO细胞,G418筛选出阳性细胞克隆,ELISA分析CAT基因的表达水平,半定量PCR分析CAT基因相对拷贝数.结果表明,表达盒两侧含MAR序列的载体能提高介导的转基因表达水平平均提高10.4倍,5′端含MAR序列的载体表达水平平均提高3.9倍,3′端含MAR序列的载体反而降低转基因表达水平.5′端含MAR序列的表达载体其转基因相对拷贝数高于其它两组载体的基因拷贝数,转基因表达量与基因拷贝数不成正比.
关键词
核基质结合区
插入位置
转基因表达
报告基因
Keywords
matrix
attachment
regions
positional
effect
transgene
expressions
reporter
gene
分类号
Q781 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
EGFP小鼠ES细胞来源的生殖系嵌合小鼠的获得和鉴定
2
作者
段彪
邵华
魏著英
王凤武
旭日干
机构
内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室
出处
《Zoological Research》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第4期417-422,共6页
基金
国家"863"计划资助项目(2002AA242061)
文摘
生殖系嵌合体的获得是实现ES细胞介导的转基因途径的决定步骤,而嵌合体的制作及生殖系嵌合体的获得则是判定ES细胞系是否具有配子分化能力的有效方法。利用一株表达绿色荧光蛋白的杂种ES细胞系制备出嵌合体小鼠,共获得9只表达绿色荧光蛋白的嵌合体小鼠,其中有8只雄性, 1只雌性,目前均发育成健康成年小鼠。流式细胞检测显示了绿色荧光蛋白在嵌合鼠以下器官的表达情况:心(77.96±15.78) %、脾(84.06±3.60) %、肾(42.49±19.79) %、骨髓(52.02±18.78) %。昆明雌鼠与雄性嵌合鼠杂交1代(F1)毛色表型分析显示该株ES细胞具有生殖系嵌合能力。
关键词
EGFP转基因小鼠
嵌合体
杂种ES细胞
生殖系
Keywords
transgen
ic
mouse
express
ing
EGFP
Chimera
Hybrid
ES
cells
Germ
line
分类号
Q813 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
核基质结合区的位置对转基因表达的影响
张俊河
昝玉玺
王天云
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
3
下载PDF
职称材料
2
EGFP小鼠ES细胞来源的生殖系嵌合小鼠的获得和鉴定
段彪
邵华
魏著英
王凤武
旭日干
《Zoological Research》
CAS
CSCD
北大核心
2007
0
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职称材料
已选择
0
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参考文献
引证文献
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