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转LdOA1基因果蝇品系GSTs基因表达及对溴氰菊酯胁迫响应
被引量：
1
1
作者
孙丽丽
刘鹏
+2 位作者
王志英
梁斌
曹传旺
《北京林业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第6期72-78,共7页
舞毒蛾是重要林业食叶害虫,揭示其G蛋白偶联受体介导G蛋白对GSTs的调控,这对于挖掘分子靶标开发新型杀虫剂具有重要意义。本文构建转LdOA1基因果蝇载体,获得表达LdOA1基因果蝇品系,分析了转基因果蝇GSTs基因表达量及对溴氰菊酯胁迫的响...
舞毒蛾是重要林业食叶害虫,揭示其G蛋白偶联受体介导G蛋白对GSTs的调控,这对于挖掘分子靶标开发新型杀虫剂具有重要意义。本文构建转LdOA1基因果蝇载体,获得表达LdOA1基因果蝇品系,分析了转基因果蝇GSTs基因表达量及对溴氰菊酯胁迫的响应,为明确昆虫OA1基因功能提供理论依据。通过传统的酶切-连接方法构建重组载体pUAST-att B-LdOA1,采用转基因技术构建表达LdOA1基因的纯合果蝇品系;利用PCR技术验证转基因果蝇品系;并运用实时荧光定量RT-PCR技术测定转基因果蝇GSTs Delta家族基因表达量及低浓度溴氰菊酯胁迫对GSTs基因表达量的影响。PCR扩增条带显示转LdOA1基因果蝇品系均能检测到453 bp目的基因条带。与非转基因果蝇相比,转LdOA1基因果蝇品系中GSTs Delta家族基因（除GSTd4和GSTd7）均上调表达,为非转基因组1.01-3.27倍。低浓度溴氰菊酯胁迫6 h,非转基因果蝇GSTd6和GSTd10基因被显著诱导激活,而其他GSTs基因被显著抑制,抑制率为6.48%-95.84%;胁迫12-72 h,GSTs基因（除GSTd1和GSTd10外）均被显著抑制。低浓度溴氰菊酯胁迫转基因果蝇GSTs表达量变化趋势与非转基因果蝇基本一致,但转基因果蝇品系GSTs表达量显著高于非转基因果蝇品系（除12-48 h GSTd1和GSTd10）,且胁迫6 h表达量最大。这些结果表明LdOA1基因可能介导G蛋白信号通路调控下游GSTs Delta亚家族基因表达响应溴氰菊酯胁迫。
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关键词
转基因果蝇
舞毒蛾
Ld
OA1
GSTS
下载PDF
职称材料
转舞毒蛾LdCYP6AN15v1基因果蝇品系对氯虫苯甲酰胺胁迫响应
被引量：
1
2
作者
党英侨
殷晶晶
+3 位作者
陈传佳
孙丽丽
刘鹏
曹传旺
《林业科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2017年第6期94-104,共11页
【目的】舞毒蛾是林业重要害虫,细胞色素P450是昆虫体内广泛分布的参与外源化合物代谢关键酶系,探讨P450家族基因CYP6AN15v1对杀虫剂代谢解毒功能,为舞毒蛾有效治理提供依据。【方法】通过RT-PCR法获得Ld CYP6AN15v1基因c DNA全长,采用...
【目的】舞毒蛾是林业重要害虫,细胞色素P450是昆虫体内广泛分布的参与外源化合物代谢关键酶系,探讨P450家族基因CYP6AN15v1对杀虫剂代谢解毒功能,为舞毒蛾有效治理提供依据。【方法】通过RT-PCR法获得Ld CYP6AN15v1基因c DNA全长,采用传统酶切连接的方法构建转CYP6AN15v1基因果蝇载体,通过转基因技术获得表达Ld CYP6AN15v1果蝇品系(命名为att P40>CYP6AN15v1)。采用分光光度计法研究低剂量氯虫苯甲酰胺(7.17mg·L^(-1))处理对转基因和非转基因果蝇品系细胞色素P450活性的影响,并采用qRT-PCR法测定其对CYP6AN15v1基因表达的影响。【结果】从舞毒蛾无参照转录本文库中克隆获得CYP6AN15v1全长基因,编码512个氨基酸,蛋白分子质量为59.02 k Da;系统进化树分析表明CYP6AN15v1与甜菜夜蛾和棉铃虫关系较近。以DNA和c DNA为模板,att P40>CYP6AN15v1果蝇品系均检测到1 539 bp目的基因,表明Ld CYP6AN15v1基因成功整合到果蝇基因组。与非转基因att P40果蝇品系相比,转基因att P40>CYP6AN15v1果蝇品系对氯虫苯甲酰胺的敏感性显著降低,致死中浓度LC50为非转基因果蝇的2.92倍;低剂量(7.17 mg·L^(-1))氯虫苯甲酰胺胁迫下,舞毒蛾细胞色素P450酶活性和CYP6AN15v1基因的诱导作用呈现时间效应,att P40>CYP6AN15v1果蝇品系P450活性为非转基因果蝇的1.09~1.93倍,主要表现为诱导效应;att P40>CYP6AN15v1果蝇品系的CYP6AN15v1基因mRNA表达量呈诱导激活,其表达量为非转基因的44.54~137.80倍。【结论】利用转基因技术成功构建了转Ld CYP6AN15v1果蝇品系att P40>CYP6AN15v1;氯虫苯甲酰胺可能通过诱导Ld CYP6AN15v1基因mRNA的上调表达而增强黑腹果蝇P450酶活性,从而参与对氯虫苯甲酰胺的解毒作用。
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关键词
舞毒蛾
转基因果蝇
氯虫苯甲酰胺
CYP6AN15v1
诱导表达
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职称材料
题名
转LdOA1基因果蝇品系GSTs基因表达及对溴氰菊酯胁迫响应
被引量：
1
1
作者
孙丽丽
刘鹏
王志英
梁斌
曹传旺
机构
东北林业大学林学院
河南省新乡市牧野区农林畜牧局
出处
《北京林业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第6期72-78,共7页
基金
国家自然科学基金项目(31570642和31101676)
黑龙江省自然科学基金面上项目(C201409)
文摘
舞毒蛾是重要林业食叶害虫,揭示其G蛋白偶联受体介导G蛋白对GSTs的调控,这对于挖掘分子靶标开发新型杀虫剂具有重要意义。本文构建转LdOA1基因果蝇载体,获得表达LdOA1基因果蝇品系,分析了转基因果蝇GSTs基因表达量及对溴氰菊酯胁迫的响应,为明确昆虫OA1基因功能提供理论依据。通过传统的酶切-连接方法构建重组载体pUAST-att B-LdOA1,采用转基因技术构建表达LdOA1基因的纯合果蝇品系;利用PCR技术验证转基因果蝇品系;并运用实时荧光定量RT-PCR技术测定转基因果蝇GSTs Delta家族基因表达量及低浓度溴氰菊酯胁迫对GSTs基因表达量的影响。PCR扩增条带显示转LdOA1基因果蝇品系均能检测到453 bp目的基因条带。与非转基因果蝇相比,转LdOA1基因果蝇品系中GSTs Delta家族基因（除GSTd4和GSTd7）均上调表达,为非转基因组1.01-3.27倍。低浓度溴氰菊酯胁迫6 h,非转基因果蝇GSTd6和GSTd10基因被显著诱导激活,而其他GSTs基因被显著抑制,抑制率为6.48%-95.84%;胁迫12-72 h,GSTs基因（除GSTd1和GSTd10外）均被显著抑制。低浓度溴氰菊酯胁迫转基因果蝇GSTs表达量变化趋势与非转基因果蝇基本一致,但转基因果蝇品系GSTs表达量显著高于非转基因果蝇品系（除12-48 h GSTd1和GSTd10）,且胁迫6 h表达量最大。这些结果表明LdOA1基因可能介导G蛋白信号通路调控下游GSTs Delta亚家族基因表达响应溴氰菊酯胁迫。
关键词
转基因果蝇
舞毒蛾
Ld
OA1
GSTS
Keywords
transformant
drosophila
gypsy
moth
LdOA1
GSTs
分类号
S763.42 [农业科学—森林保护学]
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职称材料
题名
转舞毒蛾LdCYP6AN15v1基因果蝇品系对氯虫苯甲酰胺胁迫响应
被引量：
1
2
作者
党英侨
殷晶晶
陈传佳
孙丽丽
刘鹏
曹传旺
机构
东北林业大学林学院
出处
《林业科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2017年第6期94-104,共11页
基金
国家自然科学基金项目(31570642)
黑龙江省自然科学基金项目(C201409)
东北林业大学本科生创新项目(201510225183)
文摘
【目的】舞毒蛾是林业重要害虫,细胞色素P450是昆虫体内广泛分布的参与外源化合物代谢关键酶系,探讨P450家族基因CYP6AN15v1对杀虫剂代谢解毒功能,为舞毒蛾有效治理提供依据。【方法】通过RT-PCR法获得Ld CYP6AN15v1基因c DNA全长,采用传统酶切连接的方法构建转CYP6AN15v1基因果蝇载体,通过转基因技术获得表达Ld CYP6AN15v1果蝇品系(命名为att P40>CYP6AN15v1)。采用分光光度计法研究低剂量氯虫苯甲酰胺(7.17mg·L^(-1))处理对转基因和非转基因果蝇品系细胞色素P450活性的影响,并采用qRT-PCR法测定其对CYP6AN15v1基因表达的影响。【结果】从舞毒蛾无参照转录本文库中克隆获得CYP6AN15v1全长基因,编码512个氨基酸,蛋白分子质量为59.02 k Da;系统进化树分析表明CYP6AN15v1与甜菜夜蛾和棉铃虫关系较近。以DNA和c DNA为模板,att P40>CYP6AN15v1果蝇品系均检测到1 539 bp目的基因,表明Ld CYP6AN15v1基因成功整合到果蝇基因组。与非转基因att P40果蝇品系相比,转基因att P40>CYP6AN15v1果蝇品系对氯虫苯甲酰胺的敏感性显著降低,致死中浓度LC50为非转基因果蝇的2.92倍;低剂量(7.17 mg·L^(-1))氯虫苯甲酰胺胁迫下,舞毒蛾细胞色素P450酶活性和CYP6AN15v1基因的诱导作用呈现时间效应,att P40>CYP6AN15v1果蝇品系P450活性为非转基因果蝇的1.09~1.93倍,主要表现为诱导效应;att P40>CYP6AN15v1果蝇品系的CYP6AN15v1基因mRNA表达量呈诱导激活,其表达量为非转基因的44.54~137.80倍。【结论】利用转基因技术成功构建了转Ld CYP6AN15v1果蝇品系att P40>CYP6AN15v1;氯虫苯甲酰胺可能通过诱导Ld CYP6AN15v1基因mRNA的上调表达而增强黑腹果蝇P450酶活性,从而参与对氯虫苯甲酰胺的解毒作用。
关键词
舞毒蛾
转基因果蝇
氯虫苯甲酰胺
CYP6AN15v1
诱导表达
Keywords
Lymantria
dispar
transformant
drosophila
chlorantraniliprole
CYP6AN15v1
induced
expression
分类号
S763.306 [农业科学—森林保护学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
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被引量
操作
1
转LdOA1基因果蝇品系GSTs基因表达及对溴氰菊酯胁迫响应
孙丽丽
刘鹏
王志英
梁斌
曹传旺
《北京林业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
1
下载PDF
职称材料
2
转舞毒蛾LdCYP6AN15v1基因果蝇品系对氯虫苯甲酰胺胁迫响应
党英侨
殷晶晶
陈传佳
孙丽丽
刘鹏
曹传旺
《林业科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2017
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