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连环蛋白基因功能区截短突变体的构建及其功能
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作者 张瑞 鄢和新 +3 位作者 陈磊 唐亮 杨安钢 王红阳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期385-389,共5页
目的 :观察连环蛋白 (βcatenin)基因功能截短体的亚细胞定位及转录活性的变化。方法 :采用反转录PCR克隆全长野生型βcatenin基因。在此基础上 ,分别构建 βcatenin基因N端、C端及Armadillo区缺失突变体的真核基因表达载体和融合绿色... 目的 :观察连环蛋白 (βcatenin)基因功能截短体的亚细胞定位及转录活性的变化。方法 :采用反转录PCR克隆全长野生型βcatenin基因。在此基础上 ,分别构建 βcatenin基因N端、C端及Armadillo区缺失突变体的真核基因表达载体和融合绿色荧光蛋白 (EGFP)的表达载体。应用双荧光素酶报告系统 ,在2 93细胞中检测不同功能截短体的转录活性。在倒置荧光显微镜下观察不同功能截短体在COS7细胞中的亚细胞定位。结果 :成功地构建了 βcatenin基因不同功能截短体的真核表达载体及与绿色荧光蛋白基因融合的表达载体。在 2 93细胞中检测到Armadillo区缺失的突变体蛋白丧失了转录活性 ,N端及C端缺失突变体蛋白的转录活性较野生型分别下降了80 %和 90 %。在COS7细胞中观察到C端缺失突变体蛋白主要定位于胞浆中 ,N端缺失突变体蛋白以粗颗粒形式定位于胞核中 ,Armadillo区缺失突变体的定位情况类似野生型 βcatenin ,以细颗粒形式定位于胞核中。结论 :βcatenin基因不同功能区亚细胞定位的不同 ,提示其在转录激活过程中发挥着不同的作用。 展开更多
关键词 连环蛋白 绿色荧光蛋白 转录活性 亚细胞定位
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