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一种新的产生天然蛋白的不依赖于连接的克隆载体 被引量：3
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作者 谈蓉 马立新 《湖北大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2009年第4期415-418,共4页
报道一种新的不依赖于连接的克隆(LIC)载体.该载体被缺刻的内切酶N.BbvCIA和限制性内切酶SwaⅠ作用产生长的粘性末端.靶向基因的PCR片段在4 mmol/L dGTP的孵育下被T4 DNA聚合酶处理生成互补粘性末端.将处理过的载体和PCR产物共转化到大... 报道一种新的不依赖于连接的克隆(LIC)载体.该载体被缺刻的内切酶N.BbvCIA和限制性内切酶SwaⅠ作用产生长的粘性末端.靶向基因的PCR片段在4 mmol/L dGTP的孵育下被T4 DNA聚合酶处理生成互补粘性末端.将处理过的载体和PCR产物共转化到大肠杆菌体内,插入载体的接合能够被宿主酶和给定的重组质粒修复.接着引入到大肠杆菌表达系统,该融合蛋白能够被表达和纯化,再用烟草蚀刻病毒TEV蛋白酶处理将移去靶蛋白的N末端,产生天然蛋白.两个基因,绿色荧光蛋白基因egfp和硫氧环蛋白基因txn已被用于这个系统.结果表明LIC策略对于高通量克隆和表达是高效的,对于天然蛋白的产生也同样高效. 展开更多
关键词 不依赖连接的克隆 烟草蚀刻病毒(tev)蛋白酶 天然蛋白
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