目的构建大鼠TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体,并观察其转染HSC-T6细胞后对TIMP1基因表达的影响。方法根据BLOCK-iT Poll miR RNAi Expression System with EmGFP要求,应用在线miRNA设计工具http://rnaidesigner.invitrogen.com/rnaiexpress/...目的构建大鼠TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体,并观察其转染HSC-T6细胞后对TIMP1基因表达的影响。方法根据BLOCK-iT Poll miR RNAi Expression System with EmGFP要求,应用在线miRNA设计工具http://rnaidesigner.invitrogen.com/rnaiexpress/,针对大鼠TIMP1基因(GenBank:U06179)的598位点设计、合成Oligo DNA,退火形成双链DNA后,与载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR连接,转化Top10感受态细胞,构建TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体。经PCR扩增及测序鉴定正确后,以脂质体LipofectimineTM2000介导转染经TGF-β1刺激的大鼠肝星状细胞株HSC-T6,24、48、72h后收集细胞,应用RT-PCR鉴定TIMP1的表达情况。结果经PCR及测序鉴定构建的TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体正确;将其转染经TGF-β1刺激的大鼠肝星状细胞株HSC-T6,48 h即可见TIMP1 mRNA表达量下降,72 h检测不到TIMP1 mRNA的表达,而未转染组及转染pLacZ-miR/GFP(阴性对照)组未见此改变。结论成功构建大鼠TIMP1 miR-NA慢病毒RNAi载体pTIMP1-miR/GFP;pTIMP1-miR/GFP使大鼠肝星状细胞株HSC-T6 TIMP1基因沉默。提示了RNA干扰可使肝纤维化形成过程中的关键因子TIMP1基因沉默,为RNA干扰技术进一步应用治疗大鼠肝纤维化模型奠定了基础。展开更多
目的研究骨巨细胞瘤组织中基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2)及其特异性抑制剂金属蛋白酶组织抑制因子-2(Tissue inhibitor of metalloproteinase-2)的表达与肿瘤血管形成和关系。方法用免疫组化SP法检测45例骨巨细胞瘤组织...目的研究骨巨细胞瘤组织中基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2)及其特异性抑制剂金属蛋白酶组织抑制因子-2(Tissue inhibitor of metalloproteinase-2)的表达与肿瘤血管形成和关系。方法用免疫组化SP法检测45例骨巨细胞瘤组织中MMP-2、TIMP-2的表达情况,以CD31标记检测微血管密度(MVD),计算肿瘤复发组和非复发组MMP-2/TIMP-2的比值,分析这些指标与骨巨细胞瘤预后的关系。结果骨巨细胞瘤组织有高水平的MMP-2、TIMP-2和CD31表达。复发组表达MMP-2、MMP-2/TIMP-2比值以及MVD均显著高于非复发组,但与组织学分级无关。MMP-2与MVD呈正的直线相关。结论MMP-2/TIMP-2比值升高与骨巨细胞瘤的复发以及肿瘤血管形成有关。展开更多
文摘目的研究骨巨细胞瘤组织中基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2)及其特异性抑制剂金属蛋白酶组织抑制因子-2(Tissue inhibitor of metalloproteinase-2)的表达与肿瘤血管形成和关系。方法用免疫组化SP法检测45例骨巨细胞瘤组织中MMP-2、TIMP-2的表达情况,以CD31标记检测微血管密度(MVD),计算肿瘤复发组和非复发组MMP-2/TIMP-2的比值,分析这些指标与骨巨细胞瘤预后的关系。结果骨巨细胞瘤组织有高水平的MMP-2、TIMP-2和CD31表达。复发组表达MMP-2、MMP-2/TIMP-2比值以及MVD均显著高于非复发组,但与组织学分级无关。MMP-2与MVD呈正的直线相关。结论MMP-2/TIMP-2比值升高与骨巨细胞瘤的复发以及肿瘤血管形成有关。
