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TGF-β_1联合VEGF对人羊膜间充质干细胞向韧带成纤维细胞体外分化作用的研究 被引量：5
1
作者 邹刚 李豫皖 +6 位作者 金瑛 朱喜忠 杨继滨 王胜民 尤奇 熊华章 刘毅 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期582-593,共12页
目的探讨人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs)是否具有MSCs特性,以及经TGF-β_1和VEGF联合诱导后是否具有向韧带成纤维细胞分化的能力。方法取自愿捐赠的足月产妇胎盘,采用胰蛋白酶胶原酶联合消化法分... 目的探讨人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs)是否具有MSCs特性,以及经TGF-β_1和VEGF联合诱导后是否具有向韧带成纤维细胞分化的能力。方法取自愿捐赠的足月产妇胎盘,采用胰蛋白酶胶原酶联合消化法分离培养h AMSCs,流式细胞术检测h AMSCs表型分子,免疫荧光染色检测h AMSCs其角蛋白-19(cytokeratin-19,CK-19)和波形蛋白表达情况。取第3代h AMSCs,分别使用含TGF-β_1和VEGF的L-DMEM/F12成韧带或纤维细胞诱导培养基(实验组)和普通L-DMEM/F12培养基(对照组)培养,细胞增殖-毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测两组细胞增殖能力;培养5、10、15 d分别采用免疫荧光染色及实时荧光定量PCR检测韧带及血管生成相关特异性蛋白和基因表达。结果倒置相差显微镜观察示h AMSCs呈单层贴壁生长;流式细胞术结果示h AMSCs表达MSCs表型分子;免疫荧光染色示h AMSCs高表达波形蛋白、低表达CK-19;h AMSCs具有向成骨、成软骨及成脂细胞分化的能力。CCK-8法检测示,7 d时两组细胞均达增殖高峰,实验组细胞增殖能力于7 d后显著高于对照组(P<0.05)。免疫荧光染色示,培养5、10、15 d时实验组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白(Fibronectin)、细胞连接素(Tenascin-C)表达染色均较对照组增强。实时荧光定量PCR结果示,随时间延长实验组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Fibronectin、α-肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、VEGF m RNA相对表达量均逐渐上调(P<0.05)。除培养5 d两组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、VEGF m RNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各时间点实验组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Fibronectin、α-SMA和VEGF m RNA相对表达量均显著高于对照组(P<0.05)。结论 h AMSCs具有MSCs特征,且体外增殖能力良好,可作为组织工程种子细胞来源;体外诱导后韧带成纤维细胞及血管生成相关特异性基因表达上调,韧带成纤维细� 展开更多
关键词 人羊膜间充质干细胞 韧带成纤维细胞 TGF—β1 VEGF 组织工程韧带
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组织工程韧带的研究进展 被引量：3
2
作者 孙正宇 李箭 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1160-1166,共7页
目的对组织工程韧带的研究进展进行综述。方法广泛查阅近年来有关组织工程韧带构建及其在前交叉韧带(anterior cruciate ligament,ACL)损伤中应用的文献,对构建相关的种子细胞、支架材料、生长因子和力学刺激的研究进展进行总结。结果利... 目的对组织工程韧带的研究进展进行综述。方法广泛查阅近年来有关组织工程韧带构建及其在前交叉韧带(anterior cruciate ligament,ACL)损伤中应用的文献,对构建相关的种子细胞、支架材料、生长因子和力学刺激的研究进展进行总结。结果利用MSCs和ACL成纤维细胞构建的组织工程韧带目前已成功应用于动物实验。选择合适的种子细胞、支架材料、力学刺激及必要的细胞因子是构建良好组织工程韧带的关键。培养条件的进一步优化以及如何实现组织工程韧带在体内更好的存活和转归,尚需进一步研究。结论组织工程韧带构建及其在ACL的修复再生方面取得了巨大进步,随着生物化学及支架材料的发展其有望用于临床。 展开更多
关键词 组织工程韧带 成纤维细胞 MSCS 支架材料 生长因子
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脱细胞跟腱复合人成纤维细胞共培养的实验研究 被引量：1
3
作者 王直兵 张峡 +1 位作者 郭新宇 秦川 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期805-809,共5页
目的探讨脱细胞跟腱的制备及其与人成纤维细胞复合培养效果,为组织工程韧带的构建提供一种支架材料。方法取10只5月龄雄性新西兰大白兔(体重4～5 kg)双后肢跟腱,经胰蛋白酶、Triton X-100、SDS脱细胞处理后,行大体、组织学及扫描电镜观... 目的探讨脱细胞跟腱的制备及其与人成纤维细胞复合培养效果,为组织工程韧带的构建提供一种支架材料。方法取10只5月龄雄性新西兰大白兔(体重4～5 kg)双后肢跟腱,经胰蛋白酶、Triton X-100、SDS脱细胞处理后,行大体、组织学及扫描电镜观察。将脱细胞跟腱与人成纤维细胞复合培养,于培养1、3、5、7、9 d行细胞相容性检测,并于4周后取材行组织学、扫描电镜观察以及生物力学检测,并与脱细胞前、后跟腱进行比较。结果跟腱经脱细胞处理后腱膜完整,质柔软、韧性好,体积较处理前跟腱显著增大;跟腱腱束间未见疏松结缔组织及腱细胞,胶原纤维排列疏松,呈三维网状分布,腱束间残留较多孔隙;且细胞相容性良好。复合培养4周后,细胞迁移至纤维束间的孔隙内,三维网状结构消失。生物力学测试示,与脱细胞前跟腱组及细胞-支架复合组比较,脱细胞跟腱组拉伸强度及杨氏弹性模量均显著降低(P<0.05),细胞-支架复合组与脱细胞前跟腱组比较差异无统计学意义(P>0.05);各组间断裂伸长率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论兔脱细胞跟腱与人成纤维细胞生物相容性良好,可作为支架材料用于组织工程韧带构建。 展开更多
关键词 组织工程韧带 脱细胞跟腱 人成纤维细胞 细胞相容性 兔
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韧带组织工程研究进展 被引量：1
4
作者 张蕾 刘肖珩 +1 位作者 陈槐卿 Wang Xiong 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 2004年第4期674-676,共3页
韧带组织血供少 ,损伤后很难完全愈合 ,造成关节功能严重障碍。组织工程学的发展为韧带损伤的治疗提供了新的可能途径。本文对组织工程韧带领域中目前研究的主要成果进行综述 ,着重就组织工程韧带种子细胞的选择、生长因子的应用、支架... 韧带组织血供少 ,损伤后很难完全愈合 ,造成关节功能严重障碍。组织工程学的发展为韧带损伤的治疗提供了新的可能途径。本文对组织工程韧带领域中目前研究的主要成果进行综述 ,着重就组织工程韧带种子细胞的选择、生长因子的应用、支架材料的选择以及细胞与支架材料之间的相互作用四个方面进行了阐述。目前的研究虽取得了一些进展 ,但仍需在构建有良好力学性能和降解性能支架材料、设计制造能对韧带细胞进行三维培养的生物反应器等方面进行大量研究。 展开更多
关键词 韧带 组织工程 种子细胞 支架材料 细胞因子
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牛肌腱复合胶原与人牙周膜成纤维细胞培养的实验研究 被引量：10
5
作者 骆凯 闫福华 +3 位作者 金岩 聂鑫 刘源 王新文 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期234-237,共4页
目的　观察牛肌腱复合胶原三维支架材料 (tendon mixed extraction of bovine collagen,t MEBC)与人牙周膜成纤维细胞的生物相容性 ,探讨其应用于牙周组织工程的可行性。　方法　胎牛肌腱经脱细胞、冷冻 -干燥方法构建复合胶原三维支架... 目的　观察牛肌腱复合胶原三维支架材料 (tendon mixed extraction of bovine collagen,t MEBC)与人牙周膜成纤维细胞的生物相容性 ,探讨其应用于牙周组织工程的可行性。　方法　胎牛肌腱经脱细胞、冷冻 -干燥方法构建复合胶原三维支架载体 ,取 4～ 6代人牙周膜成纤维细胞 (human periodontal ligament fibroblasts,HPDL Fs) ,接种浓度 5× 10 6 / ml与 t MEBC复合材料共培养 ,于培养第 1、3、5及 10天 ,细胞计数法了解细胞附着及增殖情况 ;培养第 5、10天 HE染色、扫描电镜行形态学观察。　结果　 t MEBC具有良好的多孔网状结构 ,HPDL Fs黏附良好 ,复合培养 1d细胞密度达 0 .5 5 6× 10 4 / ml,随培养时间延长细胞增殖明显 ,培养第 10天细胞密度达 3.94 4× 10 4 / ml;组织学检测显示细胞均匀分布于材料内部 ,形成良好的细胞材料复合体。　结论　 t MEBC具有良好的生物相容性 ,可作为支架材料复合HPDL Fs应用于牙周组织工程研究。 展开更多
关键词 组织工程 牙周膜 成纤维细胞 生物相容性 牛 肌腱复合胶原 细胞培养 牙周病
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前交叉韧带组织工程种子细胞筛选的初步研究 被引量：2
6
作者 孟乘飞 张春礼 +2 位作者 范宏斌 徐虎 白建萍 《科学技术与工程》 2007年第9期1858-1862,1867,共6页
为组织工程方法构建前交叉韧带筛选一种理想的种子细胞。用体外分离培养兔前交叉韧带(ACL)、内侧副韧带(MCL)、跟腱(AT)、皮肤成纤维细胞(SK),比较四种细胞的生长状态、增殖活性及Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌量。在含体积分数10%胎牛血清的DMEM培... 为组织工程方法构建前交叉韧带筛选一种理想的种子细胞。用体外分离培养兔前交叉韧带(ACL)、内侧副韧带(MCL)、跟腱(AT)、皮肤成纤维细胞(SK),比较四种细胞的生长状态、增殖活性及Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌量。在含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养液中,四种细胞生长良好、细胞形态相似,但以SK细胞生长最快,AT细胞次之,MCL细胞和ACL细胞生长最慢。SK、MCL、ACL细胞均分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原,AT细胞只分泌Ⅰ型胶原。SK细胞Ⅰ型胶原染色密度较MCL、ACL、AT细胞高,SK细胞Ⅲ型胶原染色密度较MCL、ACL细胞高。说明SK细胞增殖活性高,分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原多,取材简便,是理想的前交叉韧带组织工程种子细胞。 展开更多
关键词 前交叉韧带 组织工程 内侧副韧带 跟腱皮肤成纤维细胞种子细胞
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