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猪流感疫苗研究进展 被引量:6
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作者 孔维立 刘志刚 +2 位作者 亓文宝 焦培荣 张桂红 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第6期70-74,共5页
猪流感是由猪流感病毒引起的一种急性高度传染性疾病,可引起病猪高热、食欲不振、呼吸困难、孕猪流产、延迟出栏等,同时该病常继发其他细菌病感染,严重危害养猪业的发展。由于该病具有重要的公共卫生意义,因此研制安全有效的疫苗尤其重... 猪流感是由猪流感病毒引起的一种急性高度传染性疾病,可引起病猪高热、食欲不振、呼吸困难、孕猪流产、延迟出栏等,同时该病常继发其他细菌病感染,严重危害养猪业的发展。由于该病具有重要的公共卫生意义,因此研制安全有效的疫苗尤其重要。目前对猪流感疫苗的研究热点主要集中在表位疫苗和利用反向遗传构建弱毒疫苗。论文针对国内外猪流感疫苗的研究情况做了系统描述,包括灭活疫苗、弱毒疫苗、DNA疫苗、载体疫苗等,旨在为新型疫苗的研制提供参考。 展开更多
关键词 猪流感 表位疫苗 DNA疫苗 载体疫苗
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猪流感病毒抗原表位基因表达载体构建与免疫原性分析 被引量:5
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作者 刘惠莉 邢继兰 +2 位作者 潘洁 杨秋峰 赵艳敏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期690-694,共5页
根据猪流感病毒血凝素蛋白基因(Heamuglutinine,HA)的核苷酸序列,设计、筛选HA蛋白氨基酸序列的主要表位多肽4个,将4个片段以柔性连接串联成模拟蛋白,核苷酸约为300 bp,体外扩增该模拟蛋白基因,插入到原核表达载体pET30a(+)中,转染宿主... 根据猪流感病毒血凝素蛋白基因(Heamuglutinine,HA)的核苷酸序列,设计、筛选HA蛋白氨基酸序列的主要表位多肽4个,将4个片段以柔性连接串联成模拟蛋白,核苷酸约为300 bp,体外扩增该模拟蛋白基因,插入到原核表达载体pET30a(+)中,转染宿主菌诱导表达,结果获得分子量为20 kD的表达蛋白,该蛋白可与抗His-tag抗体、抗猪流感病毒H1N1、H3N2亚型高免血清发生免疫学反应。纯化后免疫小鼠,ELISA及血凝抑制(Heamuglutinine inhibitor,HI)试验检测,小鼠产生针对多肽抗原的血清抗体,同时还可检测到H1N1、H3N2亚型SIV血凝抗体。流氏细胞仪检测免疫组外周血淋巴细胞高于对照组,说明该模拟蛋白具有与H1N1、H3N2亚型猪流感病毒相似的免疫原性及反应原性,为H1N1、H3N2血清亚型猪流感病毒疫苗研制提供了新手段。 展开更多
关键词 猪流感病毒 抗原表位 新型疫苗
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猪流感病毒的流行现状及疫苗研究进展 被引量:3
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作者 唐攀 崔恩慧 +3 位作者 李博硕 刘万华 王晶钰 杜恩岐 《动物医学进展》 北大核心 2024年第3期101-106,共6页
猪流感(swine influenza,SI)是猪的重要呼吸道疾病之一,其特征为发热、咳嗽、呼吸困难、食欲不振等。临床上SI感染病死率较低,但常导致饲料利用率下降,生长性能差,可与其他病原体合并感染而引起高发病率甚至死亡。猪在流感种间传播中起... 猪流感(swine influenza,SI)是猪的重要呼吸道疾病之一,其特征为发热、咳嗽、呼吸困难、食欲不振等。临床上SI感染病死率较低,但常导致饲料利用率下降,生长性能差,可与其他病原体合并感染而引起高发病率甚至死亡。猪在流感种间传播中起着复杂且重要的作用,SI的发生不仅给养猪业造成巨大经济损失,对公共卫生也造成严重威胁。论文对近10年我国猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)感染的流行病学、病毒进化、跨物种传播、疫苗研发等情况进行综述,分析了综合防控策略,为SI的风险评估和综合防控提供参考。 展开更多
关键词 猪流感 流行现状 进化 疫苗
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Porcine Interleukin-2 Expression in Insect Cells and Its Enhancement of Pig Immunity to Swine Influenza Virus Inactivated Vaccine 被引量:3
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作者 CHEN Hong-ying ZHANG Hong-ying HUANG Yan-quan CUI Bao-an WANG Zhen-ya WANG Yan-bin LIU Jin-peng CHAO An-jun 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2010年第8期1211-1220,共10页
Mature porcine interleukin-2 (pIL-2) gene was amplified by PCR from the plasmid pGEM-T-pIL2 and cloned into the baculovirus pFastBacTM Dual vector of the Bac-to-Bac baculovirus expression system under the control of... Mature porcine interleukin-2 (pIL-2) gene was amplified by PCR from the plasmid pGEM-T-pIL2 and cloned into the baculovirus pFastBacTM Dual vector of the Bac-to-Bac baculovirus expression system under the control of the PH promoter. Recombinant plL-2 (rpIL-2) expressed in Sf9 insect cells was detected by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis and immunofluorescence assay. Western blot analysis confirmed that the rpIL-2 protein had a molecular mass of 20 kDa, which was larger than the molecular mass of the mature protein predicted based on its peptide sequence. The rpIL-2 protein induced in vitro proliferation of ConA-stimulated porcine splenocytes and enhanced in vivo protective immune responses induced by vaccinating the pigs with inactivated oil emulsion vaccine against swine influenza virus. The results showed that the rpIL-2 expressed in Sf9 insect cells has immunoenhancement effects; the finding lays the foundation for the preparation of a specific recombinant IL-2 protein and the development of a novel immune adjuvant of vaccines against various infectious porcine pathogens to increase the immunoprotective efficacy of vaccines. 展开更多
关键词 porcine interleukin-2 Sf9 insect cells EXPRESSION inactivated vaccine swine influenza virus
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猪流感(H1N1+H3N2)二价油乳剂灭活疫苗的研制 被引量:4
5
作者 王新 徐守振 +5 位作者 刘均华 徐振浩 郭妍妍 程跃星 徐忠梅 尹燕博 《畜牧与兽医》 北大核心 2013年第11期11-16,共6页
猪流感病毒H1N1和H3N2经SPF鸡胚繁殖后的尿囊液经过浓缩提纯、灭活后,制备了3批猪流感(H1N1+H3N2)二价油乳剂灭活疫苗,并对3批疫苗的物理性状、有效性、安全性及保存期等进行了相关研究。物理性状检验和无菌检验结果显示,该疫苗... 猪流感病毒H1N1和H3N2经SPF鸡胚繁殖后的尿囊液经过浓缩提纯、灭活后,制备了3批猪流感(H1N1+H3N2)二价油乳剂灭活疫苗,并对3批疫苗的物理性状、有效性、安全性及保存期等进行了相关研究。物理性状检验和无菌检验结果显示,该疫苗为油包水型乳白色乳剂,黏度为62.0cP左右,离心管底无水相析出且无菌生长,均符合现行《中国兽药典》中灭活疫苗的要求;安全检验结果表明,所有试验猪10/10健活,且精神、采食和粪便等均正常,无任何局部和全身不良反应;效力检验结果表明,易感猪免疫后28日测抗体,H1的HI抗体效价几何平均值为7.8log2~8.0log2,H3的HI抗体效价几何平均值为7.4log2—7.6log2;H1和H3的免疫攻毒保护率均为5/5,非免疫组H1的攻毒保护率为0/5,H3N2为1/5。疫苗的有效保护期为4个月,疫苗于4℃保存时,保存期为12个月。以上结果表明该疫苗对猪安全,免疫保护效果良好,且便于保存。 展开更多
关键词 猪流感病毒 H1N1亚型 H3N2亚型 油乳剂灭活疫苗
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A Review on 2009 Influenza A Virus 被引量:3
6
作者 刘超 刘连芬 +3 位作者 王波 李付国 姜乃化 曾晓辉 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2012年第2期424-427,共4页
[Objective] The paper was to introduce the research progress of 2009 influenza A virus. [Method] 2009 influenza A virus was introduced from the aspects of classification and host, virology, molecular characteristics a... [Objective] The paper was to introduce the research progress of 2009 influenza A virus. [Method] 2009 influenza A virus was introduced from the aspects of classification and host, virology, molecular characteristics and vaccine. [Result] A novel influenza A/H1N1 virus emerged in early April 2009 quickly spread worldwide through human-to-human transmission. The virus contained a group of novel gene segments, the nearest known precursor was the virus found in swine. The virus appeared to retain the potential to infect swine again and thus continued reassort with swine viruses. All registered 2009 influenza A vaccines were tested for safety and immunogenicity in clinical trials on human volunteers, and all vaccines were found to be safe, single dose of vaccine could cause protective antibody responses. [Conclusion] The paper provided basis for further study on 2009 influenza A virus. 展开更多
关键词 swine-origin influenza virus influenza A H1N1 Gene reassortment HEMAGGLUTININ vaccine
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分子佐剂C3d增强猪流感病毒HA-DNA疫苗免疫原性的研究 被引量:3
7
作者 李国新 郑宝亮 +3 位作者 金媛媛 田志军 周艳君 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期814-820,共7页
为了探讨分子佐剂C3d对猪流感病毒HA-DNA疫苗免疫原性的影响,本研究构建了3种表达不同形式HA的重组质粒,分别为:表达分泌型HA的质粒p-sHA、表达全长HA的质粒p-tmHA和融合表达3拷贝鼠C3d与HA的质粒p-sHA/mC3d3。3种质粒与空载体pCAGGS分... 为了探讨分子佐剂C3d对猪流感病毒HA-DNA疫苗免疫原性的影响,本研究构建了3种表达不同形式HA的重组质粒,分别为:表达分泌型HA的质粒p-sHA、表达全长HA的质粒p-tmHA和融合表达3拷贝鼠C3d与HA的质粒p-sHA/mC3d3。3种质粒与空载体pCAGGS分别免疫BALB/c小鼠后,采用ELISA和HI试验检测抗体水平。结果显示,免疫后第8周,p-sHA组与p-tmHA组的抗体水平没有明显差别,而p-sHA/mC3d3免疫组的抗体水平显著高于这两组,说明分子佐剂C3d增强了抗体应答水平。淋巴细胞增殖试验及细胞因子检测实验结果显示,免疫后第8周,p-tmHA诱导了更强的淋巴细胞增殖反应和更高水平的IFN-,而p-sHA/mC3d3诱导了更高水平的IL-4,说明HA表达形式的变化影响了免疫反应的类型,C3d与HA融合后通过诱导IL-4的产生而使免疫反应倾向于Th2型。总之,本研究证实3拷贝分子佐剂C3d与分泌型HA融合后显著提高了DNA疫苗诱导的抗体水平。这提示质粒p-sHA/mC3d3免疫可能对接种动物提供高水平的保护,有希望成为抗猪流感病毒的候选疫苗。 展开更多
关键词 猪流感病毒 DNA疫苗 分子佐剂 C3D
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H1亚型猪流感病毒HA基因密码子优化的DNA疫苗免疫保护效力研究 被引量:2
8
作者 杨馥如 于海 +4 位作者 王斌 黄梦 马继红 周艳君 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 2011年第4期13-19,共7页
DNA疫苗的免疫效果与抗原基因的表达量及表达抗原的免疫原性有直接关系。为了提高猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)HA基因DNA疫苗的表达量,增强其免疫效果,本研究通过人工合成的方法将H1亚型猪流感病毒A/Swine/Guangdong/... DNA疫苗的免疫效果与抗原基因的表达量及表达抗原的免疫原性有直接关系。为了提高猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)HA基因DNA疫苗的表达量,增强其免疫效果,本研究通过人工合成的方法将H1亚型猪流感病毒A/Swine/Guangdong/1/01(H1N1)的HA基因密码子优化为猪体内偏嗜性密码子optiHA,同野生型A/Swine/Guangdong/1/01(H1N1)的HA基因分别与真核表达载体PCAGGS连接构成重组质粒PCAGGS—optiHA和PCAGGS—HA,然后分别转染293T细胞,48h后采用间接免疫荧光的方法检测Ⅲ基因的瞬时表达蛋白情况。将质粒PCAGGS—HA、PCAGGS—optiHA以100μg/只的剂量,采用后腿肌肉多点注射的方式,免疫6-8周龄雌性BALB/c小鼠,同时设立空载体PCAGGS对照。共免疫3次,每次间隔2周,三免2周后对每组以10^3.87 EID50的A/Swine/Guangdong/1/01(H1N1)进行攻毒。采用ELISA、血凝抑制试验、细胞因子检测和肺组织病毒含量测定等实验评价这两种DNA疫苗的免疫效果。结果表明,HA基因密码子优化的DNA疫苗可显著提高体液免疫和细胞免疫的应答水平,攻毒后免疫组PCAGGS—optiHA的保护效力明显高于免疫组PCAGGS—HA。这一结果为进一步研究和设计有效的SIVDNA疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 猪流感病毒 H1亚型 HA基因 密码子优化 DNA疫苗
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融合表达猪源C3d与猪流感病毒HA DNA疫苗的构建 被引量:1
9
作者 连艳鲜 郑宝亮 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第6期91-95,共5页
为了构建融合表达分子佐剂猪补体C3d与猪流感病毒血凝素(HA)的真核表达载体,论文克隆了猪C3d全长基因与H3N2亚型猪流感病毒的HA基因,并构建了包含3拷贝的C3d和经过改造的HA(替换信号肽并去除跨膜区)的质粒pHA-C3d3。序列分析表明,... 为了构建融合表达分子佐剂猪补体C3d与猪流感病毒血凝素(HA)的真核表达载体,论文克隆了猪C3d全长基因与H3N2亚型猪流感病毒的HA基因,并构建了包含3拷贝的C3d和经过改造的HA(替换信号肽并去除跨膜区)的质粒pHA-C3d3。序列分析表明,获得的猪C3d与参考序列相比核苷酸同源性达到99.7%,氨基酸同源性达99.3%。受体结合功能区p28氨基酸序列与参考序列完全一致。猪补体C3d的氨基酸序列与鼠、牛、羊、人的同源性都在80%以上,而与鸡的同源性仅为62.5%。受体结合功能区p28氨基酸序列与鼠、牛、羊、人有4~7个氨基酸的不同,而与鸡有17个氨基酸的不同,表明哺乳动物C3d与禽类有明显的差别。质粒DNA pHA-C3d3转染293T细胞后,Western blot分析显示,在细胞裂解产物中检测到了与预期大小一致的特异性条带,说明融合蛋白得到了表达。为进一步探讨C3d分子佐剂及猪流感DNA疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪流感病毒 DNA疫苗 分子佐剂C3d
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猪流感疫苗研究进展 被引量:1
10
作者 陈永忠 刘业兵 夏业才 《中国兽药杂志》 2009年第6期38-42,共5页
全面综述了国内外猪流感(SI)疫苗的研究现状。从激发体液免疫、细胞免疫、交叉保护以及避免母源抗体干扰和区分野毒感染等方面分别阐述了常规疫苗、减毒疫苗、亚单位疫苗、DNA疫苗、病毒活载体疫苗的研究进展,以期找到最佳控制猪流感的... 全面综述了国内外猪流感(SI)疫苗的研究现状。从激发体液免疫、细胞免疫、交叉保护以及避免母源抗体干扰和区分野毒感染等方面分别阐述了常规疫苗、减毒疫苗、亚单位疫苗、DNA疫苗、病毒活载体疫苗的研究进展,以期找到最佳控制猪流感的疫苗及免疫方案,为进一步研究猪流感疫苗提供参考。 展开更多
关键词 猪流感 病毒 疫苗
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猪流感疫苗研究进展 被引量:1
11
作者 崔克 江甜 《中国动物保健》 2011年第8期14-16,共3页
猪流感(Swine Influenza,SI)是由正黏病毒科A型流感病毒属的猪流感病毒(Swine Influenza Virus,SIV)引起的猪的一种急性、热性、高度接触性呼吸道传染病。该病对畜牧业造成巨大危害,同时又有着深远的公共卫生意义,对其防控的重点是预防... 猪流感(Swine Influenza,SI)是由正黏病毒科A型流感病毒属的猪流感病毒(Swine Influenza Virus,SIV)引起的猪的一种急性、热性、高度接触性呼吸道传染病。该病对畜牧业造成巨大危害,同时又有着深远的公共卫生意义,对其防控的重点是预防为主。本文对目前疫苗的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 猪流感 疫苗
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猪IL-18基因真核表达质粒的构建及其表达产物的生物学活性
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作者 邵攀峰 崔沛 +3 位作者 郑兰兰 魏战勇 盛敏 崔保安 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2009年第12期85-90,共6页
【目的】构建猪IL-18的重组质粒,检测其表达产物的生物学活性,为进一步研究猪IL-18基因的结构与功能奠定基础。【方法】通过PCR技术从含猪IL-18全基因的克隆质粒中扩增猪IL-18基因,定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒pIL... 【目的】构建猪IL-18的重组质粒,检测其表达产物的生物学活性,为进一步研究猪IL-18基因的结构与功能奠定基础。【方法】通过PCR技术从含猪IL-18全基因的克隆质粒中扩增猪IL-18基因,定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒pIL-18,在脂质体作用下转染猪肾PK15细胞。【结果】重组质粒pIL-18经酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确。通过RT-PCR检测,证实了猪IL-18在PK15细胞中的表达;SDS-PAGE分析结果表明,表达产物是与猪IL-18相符的约22 ku的蛋白条带;Western blot证实,表达产物能与猪IL-18单克隆抗体发生特异性反应。pIL-18对H1亚型猪流感灭活疫苗免疫增强作用的研究表明,pIL-18能够提高猪流感灭活疫苗诱发的细胞免疫应答。【结论】成功地构建了猪IL-18的重组质粒pIL-18,并在PK15细胞中获得了瞬时表达,且具有一定的免疫原性。 展开更多
关键词 猪白细胞介素18 真核表达 生物学活性 猪流感灭活疫苗
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重组细胞高产型H3N2猪流感病毒株的拯救 被引量:7
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作者 杨涛 刘明 +4 位作者 刘春国 张云 刘大飞 陈浩 童光志 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期471-476,共6页
为拯救出一株能够在动物传代细胞中高水平复制的H3N2亚型猪流感疫苗株,利用反向遗传操作技术,将A/Goose/Dalian/3/01(H9N2)毒株的PB1、PA、NP、M、NS基因和A/PR/8/34毒株的PB2基因作为内部基因与猪流感病毒A/Swine/Henan/S4/01(H3N2)毒... 为拯救出一株能够在动物传代细胞中高水平复制的H3N2亚型猪流感疫苗株,利用反向遗传操作技术,将A/Goose/Dalian/3/01(H9N2)毒株的PB1、PA、NP、M、NS基因和A/PR/8/34毒株的PB2基因作为内部基因与猪流感病毒A/Swine/Henan/S4/01(H3N2)毒株的HA、NA基因进行重组,成功拯救出了具有高度细胞适应性毒株rH3N2株,该毒株接毒MDCK细胞60h后,血凝价可以达到1∶512,表明该毒株具有高度适应细胞繁殖特性,为H3N2亚型猪流感病毒细胞培养型疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 猪流感 H3N2亚型 反向遗传操作技术 细胞培养型流感疫苗
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中国流行的2009甲型H1N1猪源流感病毒HA和NA基因的分子和遗传特征 被引量:8
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作者 闫丽萍 周艳君 +2 位作者 李国新 于海 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第4期13-19,共7页
目前流行的甲型H1N1流感病毒是一个复杂的基因重配病毒。对病毒的分子生物学研究,尤其是病毒囊膜蛋白血凝素(haemagglutini,HA)基因和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因的研究,为控制和预防H1N1流感病毒具有重要的意义。本研究对中... 目前流行的甲型H1N1流感病毒是一个复杂的基因重配病毒。对病毒的分子生物学研究,尤其是病毒囊膜蛋白血凝素(haemagglutini,HA)基因和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因的研究,为控制和预防H1N1流感病毒具有重要的意义。本研究对中国流行的2009甲型H1N1猪源流感病毒的HA和NA基因与疫苗株A/California/07/2009(H1N1),以及不同国家和地区的病毒株进行核苷酸和氨基酸序列分析。从NCBI的GenBank数据库下载所需要毒株的序列,采用Lasergene 6.0软件包中的EditSeq和MegAlign进行序列分析,进化树分析采用MEGA4.1软件。进化分析表明,中国流行的2009 H1N1流感病毒与疫苗株的核苷酸同源率分别在98.8%~99.7%和98.6%~99.6%之间;裂解位点处为I/VPSIQSR↓G,不具备高致病性流感病毒的特征;有1株NA抗性病毒。尽管与疫苗株相比,中国流行株2009甲型H1N1猪源流感病毒的HA和NA基因有部分突变,但这些突变并不是重要的。本研究首次详细分析了中国流行的2009甲型H1N1猪源流感病毒株与疫苗株的HA和NA基因的分子特征,对实时监测流感病毒HA和NA基因的变化具有重要意义。 展开更多
关键词 2009H1N1流感病毒 疫苗株 血凝素 神经氨酸酶 分子和遗传特征
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H1N1亚型猪流感病毒反向遗传操作系统的建立及高产细胞型疫苗株的拯救 被引量:5
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作者 刘大飞 刘明 +8 位作者 刘春国 杨涛 万春和 陈浩 齐金龙 杜金玲 李洪涛 孙恩成 刘大程 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期1797-1804,共8页
【目的】建立H1N1亚型猪流感病毒反向遗传学操作系统及拯救出能够在动物传代细胞中高水平复制的H1N1亚型猪流感疫苗株。【方法】利用反向遗传操作技术,对猪流感病毒广东分离株进行拯救。【结果】首次成功拯救出全部片段均来自于亲本株... 【目的】建立H1N1亚型猪流感病毒反向遗传学操作系统及拯救出能够在动物传代细胞中高水平复制的H1N1亚型猪流感疫苗株。【方法】利用反向遗传操作技术,对猪流感病毒广东分离株进行拯救。【结果】首次成功拯救出全部片段均来自于亲本株的猪流感病毒rH1N1,并且成功拯救出了具有高度细胞适应性毒株re-LM株,研究结果表明二者均具有良好的遗传稳定性。rH1N1经MDCK细胞连续传代培养后,血凝价最高仅为1:64;而re-LM的血凝价最高可以稳定在1:1024,表明该毒株具有细胞繁殖高产的特性。用该重组病毒制备油乳剂灭活苗免疫2月龄仔猪,首免2周即可检测出HI抗体,平均效价在1:32以上,三免后2周HI抗体平均效价达到1:512,说明其有良好的免疫原性。【结论】H1N1亚型猪流感病毒反向遗传操作系统的成功建立为猪流感病毒致病机理、传播机制及病毒基因功能的研究奠定了基础;重组细胞高产型猪流感病毒株的拯救为H1N1亚型猪流感疫苗的研制开辟了新的途径。 展开更多
关键词 猪流感 H1N1亚型 反向遗传操作技术 细胞培养型流感疫苗
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猪流感二价灭活疫苗对H1N1亚型流行毒株的攻毒保护效果
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作者 张秀华 吕晓妍 +2 位作者 苏玮玮 陈超阳 路伟 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第12期81-84,共4页
旨在评价猪流感二价灭活疫苗(H1N1 LN株+H3N2 HLJ株)对2021年国内H1N1亚型猪流感流行毒株的交叉保护效果。将10头4周龄健康易感猪随机均分为疫苗接种组和对照组,疫苗接种组每头接种疫苗2 mL,首免14 d后进行二免,对照组未接种疫苗;首免后... 旨在评价猪流感二价灭活疫苗(H1N1 LN株+H3N2 HLJ株)对2021年国内H1N1亚型猪流感流行毒株的交叉保护效果。将10头4周龄健康易感猪随机均分为疫苗接种组和对照组,疫苗接种组每头接种疫苗2 mL,首免14 d后进行二免,对照组未接种疫苗;首免后28 d,每头猪经气管内注射A/Swine/Jiangsu/NL33/2021(H1N1)(简称NL33株)4.0 mL;综合临床症状、鼻拭子病毒分离和肺脏病变3个方面进行判定。结果:试验组保护率为80%,对照组发病率为100%。综上,猪流感二价灭活疫苗(H1N1 LN株+H3N2 HLJ株)接种对2021年国内流行的H1N1亚型猪流感病毒攻击产生了较好的交叉保护效果,猪群接种该疫苗后能有效抵抗猪流感流行毒株的攻击。 展开更多
关键词 猪流感二价灭活疫苗 H1N1亚型 流行毒株 交叉保护
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欧亚类禽型H1N1猪流感病毒HA蛋白的表达及免疫原性评估 被引量:4
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作者 贾云慧 许程志 +6 位作者 隋金钰 吴运谱 许榜丰 陈艳 杨焕良 乔传玲 陈化兰 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期930-938,共9页
【目的】表达欧亚类禽型(eurasian avian-like,EA)H1N1猪流感病毒(SIV)的血凝素(HA)蛋白,并对其免疫原性进行测定。【方法】利用RT-PCR技术扩增病毒A/swine/Zhejiang/245/2013(H1N1)(ZJ245)的HA基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS中,获... 【目的】表达欧亚类禽型(eurasian avian-like,EA)H1N1猪流感病毒(SIV)的血凝素(HA)蛋白,并对其免疫原性进行测定。【方法】利用RT-PCR技术扩增病毒A/swine/Zhejiang/245/2013(H1N1)(ZJ245)的HA基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS中,获得重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245),将其转染293T细胞,采用间接免疫荧光(IFA)检测和Western blot检测HA蛋白在体外的表达;将重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)经肌肉注射途径、以100μg/只剂量免疫16只6周龄BALB/c小鼠(I组和II组),间隔3周后进行加强免疫(二免);同等数量的小鼠以相同方式注射100μL无菌PBS作为非免疫对照组(III组和IV组)。首免和二免每周采血,分别采用血凝抑制(HI)试验和病毒中和(VN)试验两种方法测定不同类型的血清抗体效价;二免2周后,其中两组小鼠(I组和III组)用50μL(106.0EID50)的ZJ245病毒经滴鼻感染途径进行攻毒,另外两组(II组和IV组)用A/swine/Heilongjiang/44/2009(H1N1)(HLJ44)病毒进行攻毒。攻毒后14 d内每天观察小鼠的临床症状、统计发病与死亡情况,且每天称量小鼠体重,在体重下降比率超过25%时判定为小鼠死亡。攻毒后第3天,每组随机剖杀3只小鼠,分别采集脑、鼻甲、肺、脾和肾等脏器,匀浆处理后通过接种10日龄的非免疫鸡胚测定脏器的病毒含量。通过小鼠体重变化以及脏器滴定的病毒含量评估重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)的免疫保护效果。【结果】经酶切鉴定和测序验证表明ZJ245的HA基因的已正确克隆至真核表达质粒p CAGGS中获得重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245),经体外转染293T细胞后,IFA和Western blot证实了病毒的HA蛋白能够正确表达,并具有良好的生物学活性;小鼠的免疫与攻毒试验结果表明,重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)首免后一周可检测到针对同源病毒ZJ245的低水平HI和VN抗体,加强免疫后抗体水平明显升高,HI抗体达到76.88、VN抗体达到152.5;同时针对异源病毒HLJ44也产生了较低水平的HI和VN 展开更多
关键词 欧亚类禽型H1N1猪流感病毒 HA蛋白 重组质粒 免疫原性 DNA疫苗
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猪对禽用禽流感H5N1基因重组灭活疫苗免疫应答 被引量:3
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作者 张苏华 孙泉云 +6 位作者 周锦萍 刘佩红 鞠龚讷 李凯航 薛霞 卢军 张维谊 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期13-16,共4页
为评估猪对禽流感疫苗的敏感性、安全性和免疫效果,将63日龄育肥肉猪分为4组,按不同剂量进行禽流感H5N1亚型疫苗的免疫试验,其中第1、3组于首免后第21天按同样剂量进行二免。结果表明:试验猪首免后第10天能检出特异性禽流感抗体,随后抗... 为评估猪对禽流感疫苗的敏感性、安全性和免疫效果,将63日龄育肥肉猪分为4组,按不同剂量进行禽流感H5N1亚型疫苗的免疫试验,其中第1、3组于首免后第21天按同样剂量进行二免。结果表明:试验猪首免后第10天能检出特异性禽流感抗体,随后抗体转阳率和抗体效价持续上升。二免试验组免疫反应优于一免试验组,而以第1组免疫效果最好。同时,采用荧光RT-PCR技术对试验猪的鼻拭样品进行H5亚型禽流感病毒的检测,结果均为阴性,表明目前使用的禽流感H5N1疫苗不会造成猪体带毒,使用安全。 展开更多
关键词 禽流感H5N1疫苗 免疫应答
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H1亚型流感病毒通用疫苗的构建及其对小鼠免疫保护效力研究 被引量:2
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作者 杨馥如 于海 +5 位作者 王斌 黄梦 马继红 温峰 周艳君 童光志 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期240-249,共10页
本研究旨在为研制一种安全、有效并具有广泛保护作用的流感病毒通用疫苗进行初步的探索。从Gen-Bank上获得所有H1亚型经典猪源流感病毒和甲型流感病毒的HA基因序列,通过系统进化分析获得其共有序列,并对共有序列进行密码子优化(Optimize... 本研究旨在为研制一种安全、有效并具有广泛保护作用的流感病毒通用疫苗进行初步的探索。从Gen-Bank上获得所有H1亚型经典猪源流感病毒和甲型流感病毒的HA基因序列,通过系统进化分析获得其共有序列,并对共有序列进行密码子优化(Optimized consensus,opti-CS),同时将H1亚型的A/Swine/Guangdong/1/01(H1N1)和重组甲型流感病毒rPan09(H1N1,其HA和NA来自A/Swine/California/04/09,其余6个片段来自PR8的重组病毒)的HA基因分别进行密码子优化(opti-G11,opti-r09),并将这3种片段与真核表达载体pCAGGS连接获得重组质粒pCA-opti-CS、pCA-opti-G11和pCA-opti-r09。将重组质粒瞬时转染293T细胞,检测HA基因在哺乳动物细胞中的表达情况。免疫6~8周雌性BALB/c小鼠,免疫3次,每次间隔3周,同时设立空载体pCAGGS对照。三免2周后从每个质粒免疫组中选取一半小鼠每只以50μL 103.87 EID50的剂量接种A/Swine/Guangdong/1/01(H1N1)病毒,另一半小鼠每只以50μL 107.45 EID50的剂量接种rPan09病毒。采集血清,对HA抗体水平、HI滴度、细胞因子产生情况、肺组织病毒含量进行检测,并对肺组织病理学变化进行观察。结果显示:重组质粒中HA基因均能够在哺乳动物细胞中有效的表达。pCA-opti-CS免疫后能够诱导小鼠产生较高的HA抗体水平,较高的HI滴度,并且能够诱导机体产生较高水平的IL-4和IFN-γ。肺组织病毒含量测定以及组织病理学观察结果显示:HA共有序列密码子优化的DNA疫苗pCA-opti-CS免疫后能够有效限制病毒A/Swine/Guangdong/1/01(H1N1)和rPan09HA在肺脏中的复制,减轻肺脏病理变化。结果提示:HA共有序列密码子优化的DNA疫苗pCA-opti-CS能够诱导小鼠产生较高水平的体液免疫和细胞免疫应答,并具有较好的交叉保护效力,能够保护小鼠抵抗异源流感病毒的攻击。本研究为流感通用疫苗的研究提供了有益的参考。 展开更多
关键词 H1亚型流感病毒 通用型疫苗 共有序列 密码子优化
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猪流感二价灭活疫苗(H1N1 HN株+H3N2 HLJ株)单剂量重复接种安全性试验 被引量:1
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作者 陈丕坤 张智明 李倩 《饲料博览》 CAS 2021年第4期22-24,32,共4页
为评价猪流感二价灭活疫苗(H1N1 HN株+H3N2 HLJ株)单剂量重复接种仔猪的安全性,试验选取4周龄健康易感仔猪20头,随机分为4组(免疫1组、免疫2组、免疫3组和对照组),每组5头,免疫组分别颈部肌肉接种3批次猪流感二价灭活疫苗(H1N1 HN株+H3N... 为评价猪流感二价灭活疫苗(H1N1 HN株+H3N2 HLJ株)单剂量重复接种仔猪的安全性,试验选取4周龄健康易感仔猪20头,随机分为4组(免疫1组、免疫2组、免疫3组和对照组),每组5头,免疫组分别颈部肌肉接种3批次猪流感二价灭活疫苗(H1N1 HN株+H3N2 HLJ株)制品,2.0 mL·头^(-1),免疫后第14天按相同的剂量重复接种1次,对照组接种等量的生理盐水,对试验猪开展安全性评价。结果显示:疫苗单剂量重复接种后试验猪全部健活,体温正常,精神状态良好,行为、采食和饮水正常,无其他全身不良反应;注射局部吸收良好,无红肿、硬结。说明疫苗单剂量重复接种对仔猪安全性良好。 展开更多
关键词 猪流感二价灭活疫苗 H1N1 HN株 H3N2 HLJ株 单剂量重复接种 安全性
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