目的研究非编码小RNA-1896（miRNA-1896）和miRNA-409—3p对细胞因子信号抑制蛋白-3（suppressors of cytokinesignaling-3，SOTS3）基因的调控作用，构建floes3基因3’端非翻译区（3’-untranslated re-gion，3’-UTR）野生型和突变型...目的研究非编码小RNA-1896（miRNA-1896）和miRNA-409—3p对细胞因子信号抑制蛋白-3（suppressors of cytokinesignaling-3，SOTS3）基因的调控作用，构建floes3基因3’端非翻译区（3’-untranslated re-gion，3’-UTR）野生型和突变型重组荧光素酶报告载体。方法以原代培养的小鼠星形胶质细胞总eDNA为模板，通过点突变和缺失突变的方式分别对SOCS33’-UTR序列中miRNA-1896和miRNA-409—3p种子区的结合位点CAGAGA（897—902位）和AACATT（1425—1430位）进行突变，并将野生型的3’-UTR序列与突变的3’-UTR序列分别插入到虫荧光素酶表达质粒pGL3-Promoter获得重组质粒，命名为pGL3-SOCS3-WT、pGL3-SOCS3-M1和pGL3-SOCS3-M2。将上述重组质粒分别与miRNA-1896和miRNA-409—3p共转染至HEK293T细胞中，测定虫荧光素酶的活性。结果酶切验证及测序结果表明，重组质粒pGL3-SOCS3-WT、pGL3-SOCS3-M1和pGL3-SOCS3-M2构建成功。与对照组相比，转染miRNA-1896和miRNA-409—3p均显著降低了pGL3-SOCS3-WT虫荧光素酶的活性，但对pGL3-SOCS3-M1和pGL3-SOCS3-M2荧光素酶的活性并无明显影响。结论成功构建了soc33’-UTR野生型及突变型的虫荧光素酶重组表达质粒，确认CA-GAGA（897—902位）和AACATr（1425—1430位）分别是miRNA-1896和miRNA-409—3p种子区与socs33’-UTR结合的关键位点。展开更多
细胞因子信号抑制物（suppressor of cytokine signaling,SOCS）家族是具有调控Janus激酶/信号转导与转录激活因子（janus kinase/signal transducer and activator of transcription,JAK/STAT）信号通路作用的蛋白质家族,包括SOCS-1-7...细胞因子信号抑制物（suppressor of cytokine signaling,SOCS）家族是具有调控Janus激酶/信号转导与转录激活因子（janus kinase/signal transducer and activator of transcription,JAK/STAT）信号通路作用的蛋白质家族,包括SOCS-1-7及CIS。其中,SOCS-3对胰岛素信号转导具有重要调节作用,通过调控胰岛素受体、胰岛素受体底物、JAK 2、STAT 3、瘦素等信号转导因子,介导胰岛素抵抗的发生和发展。SOCS-3有望成为治疗胰岛素抵抗新的作用靶点。展开更多
文摘目的研究非编码小RNA-1896（miRNA-1896）和miRNA-409—3p对细胞因子信号抑制蛋白-3（suppressors of cytokinesignaling-3，SOTS3）基因的调控作用，构建floes3基因3’端非翻译区（3’-untranslated re-gion，3’-UTR）野生型和突变型重组荧光素酶报告载体。方法以原代培养的小鼠星形胶质细胞总eDNA为模板，通过点突变和缺失突变的方式分别对SOCS33’-UTR序列中miRNA-1896和miRNA-409—3p种子区的结合位点CAGAGA（897—902位）和AACATT（1425—1430位）进行突变，并将野生型的3’-UTR序列与突变的3’-UTR序列分别插入到虫荧光素酶表达质粒pGL3-Promoter获得重组质粒，命名为pGL3-SOCS3-WT、pGL3-SOCS3-M1和pGL3-SOCS3-M2。将上述重组质粒分别与miRNA-1896和miRNA-409—3p共转染至HEK293T细胞中，测定虫荧光素酶的活性。结果酶切验证及测序结果表明，重组质粒pGL3-SOCS3-WT、pGL3-SOCS3-M1和pGL3-SOCS3-M2构建成功。与对照组相比，转染miRNA-1896和miRNA-409—3p均显著降低了pGL3-SOCS3-WT虫荧光素酶的活性，但对pGL3-SOCS3-M1和pGL3-SOCS3-M2荧光素酶的活性并无明显影响。结论成功构建了soc33’-UTR野生型及突变型的虫荧光素酶重组表达质粒，确认CA-GAGA（897—902位）和AACATr（1425—1430位）分别是miRNA-1896和miRNA-409—3p种子区与socs33’-UTR结合的关键位点。
文摘细胞因子信号抑制物（suppressor of cytokine signaling,SOCS）家族是具有调控Janus激酶/信号转导与转录激活因子（janus kinase/signal transducer and activator of transcription,JAK/STAT）信号通路作用的蛋白质家族,包括SOCS-1-7及CIS。其中,SOCS-3对胰岛素信号转导具有重要调节作用,通过调控胰岛素受体、胰岛素受体底物、JAK 2、STAT 3、瘦素等信号转导因子,介导胰岛素抵抗的发生和发展。SOCS-3有望成为治疗胰岛素抵抗新的作用靶点。
