SSH法获取水稻矮化突变体相关的cDNA片段 被引量：7

1

作者 王永胜 王景 +2 位作者 李发强 刘筱斌 刘良式 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第5期20-24,共5页

利用抑制性消减杂交 (Suppressivesubtractionhybridization ,SSH)分离水稻矮化突变体dwarf69与其野生型对照品系特光矮 2 (Oryzasativa ,TGA 2indica)间表达有差异的cDNA片段。分别以dwarf69作为驱赶子 ,TGA 2为检测子 ,以及以dwarf69... 利用抑制性消减杂交 (Suppressivesubtractionhybridization ,SSH)分离水稻矮化突变体dwarf69与其野生型对照品系特光矮 2 (Oryzasativa ,TGA 2indica)间表达有差异的cDNA片段。分别以dwarf69作为驱赶子 ,TGA 2为检测子 ,以及以dwarf69作为检测子 ,TGA 2为驱赶子建立了两个差异表达cDNA文库 ,分别代表在TGA 2和dwarf69特异表达的cDNA。经反式Northern检测这两个文库共得到 1 0个阳性克隆。序列分析表明有两个序列为水稻中首次报道 ,一个序列有相应的基因组序列报道 ,但其cDNA序列是首次报道。 展开更多

关键词 抑制性消减杂交 ssh 矮化突变体 反式Northern CDNA片段 水稻

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荔枝胚败育差异表达基因cDNA片段的克隆及序列分析 被引量：11

2

作者 张以顺 向旭 +1 位作者 傅家瑞 黄上志 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期25-28,共4页

利用抑制消减杂交 (Suppressivesubtractionhybridization ,SSH)克隆荔枝败育胚的差异表达基因cDNA片段。分别以荔枝‘桂味’正常发育胚为driver (驱赶子 ) ,败育胚为tester (检测子 ) ,建立差异表达cDNA文库 ,代表桂味败育胚特异表达的... 利用抑制消减杂交 (Suppressivesubtractionhybridization ,SSH)克隆荔枝败育胚的差异表达基因cDNA片段。分别以荔枝‘桂味’正常发育胚为driver (驱赶子 ) ,败育胚为tester (检测子 ) ,建立差异表达cDNA文库 ,代表桂味败育胚特异表达的cDNA。经VirtualNorthern检测 ,在桂味正常发育胚 /败育胚差异表达cDNA文库中得到 3个阳性克隆 ,序列分析表明这 展开更多

关键词 荔枝 胚败育 差异表达基因 基因克隆 序列分析 抑制消减杂交

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菌根真菌诱导的铁皮石斛根差减cDNA文库构建 被引量：11

3

作者 李标 唐坤 +1 位作者 张岗 郭顺星 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第22期1790-1796,共7页

目的构建菌根真菌共生诱导的铁皮石斛根的差减cDNA文库,从中筛选出差异表达基因。方法采用SMARTer PCRcDNA合成方法直接以总RNA为模板合成并富集稀少cDNA,再利用抑制消减杂交(SSH)方法构建受菌根真菌共生诱导铁皮石斛根的差减cDNA文库... 目的构建菌根真菌共生诱导的铁皮石斛根的差减cDNA文库,从中筛选出差异表达基因。方法采用SMARTer PCRcDNA合成方法直接以总RNA为模板合成并富集稀少cDNA,再利用抑制消减杂交(SSH)方法构建受菌根真菌共生诱导铁皮石斛根的差减cDNA文库。结果成功构建了受菌根真菌诱导铁皮石斛根的差减cDNA文库,共获得1 975个阳性克隆。经检测,90%以上克隆能扩增出有效产物,其插入片段大小在150～1 000 bp之间。随机挑取了20个克隆菌液测序并进行了比对分析,大部分为植物应对环境胁迫防御性基因。结论该技术体系所构建的差减cDNA文库质量较好,操作方便,尤其适用于珍稀濒危的植物材料。 展开更多

关键词 铁皮石斛 菌根真菌 抑制消减杂交 CDNA文库 共生

原文传递

黄瓜芽黄突变体抑制消减杂交文库的构建及初步分析 被引量：5

4

作者 李娟娟 陈福龙 +5 位作者 李鑫 王蕾 贾俊忠 陈远良 陈芳 高剑峰 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期905-910,共6页

利用抑制消减杂交技术（suppression subtractive hybridization,SSH）分离了黄瓜芽黄突变体及其野生型之间差异表达的cDNA片段.以突变体和野生型分别作检测子和驱赶子,建立正向和反向两个消减杂交cDNA文库;经阳性克隆鉴定,在正向文库... 利用抑制消减杂交技术（suppression subtractive hybridization,SSH）分离了黄瓜芽黄突变体及其野生型之间差异表达的cDNA片段.以突变体和野生型分别作检测子和驱赶子,建立正向和反向两个消减杂交cDNA文库;经阳性克隆鉴定,在正向文库中获得特异表达的阳性克隆有133个,在反向文库中得到的阳性克隆有73个.测序后将所得到的159条非重复且非黄瓜的ESTs（登录号：GH270133~GH270291）进行序列同源性比对分析,发现这些ESTs分别与叶绿素合成、光合系统、信号转导、转录因子、氨基酸代谢、糖类代谢、脂类代谢等相关酶及蛋白基因高度同源. 展开更多

关键词 黄瓜 芽黄突变体 抑制消减杂交 差异表达基因

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水稻矮化突变体差异表达cDNA片段的克隆与分析 被引量：3

5

作者 王永胜 王景 +2 位作者 李发强 刘筱斌 刘良式 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期59-62,共4页

利用抑制性消减杂交 (Suppressivesubtractionhybridization ,SSH)分离本实验室获得的一株水稻矮化突变体dwarf6 9与其野生型对照品系特光矮_2 (Oryzasativa ,TGA_2indica)间表达有差异的cDNA片段 .分别以dwarf6 9作为驱赶子 ,TGA_2为... 利用抑制性消减杂交 (Suppressivesubtractionhybridization ,SSH)分离本实验室获得的一株水稻矮化突变体dwarf6 9与其野生型对照品系特光矮_2 (Oryzasativa ,TGA_2indica)间表达有差异的cDNA片段 .分别以dwarf6 9作为驱赶子 ,TGA_2为检测子 ,以及以dwarf6 9作为检测子 ,TGA_2为驱赶子建立了两个差异表达cDNA文库 ,分别代表在TGA_2和dwarf6 9中特异表达的cDNA .经反式Northern检测这两个文库共得到 展开更多

关键词 抑制性消减杂交 矮化突变体 反式Northern 水稻 CDNA片段 表达 克隆

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N^＋离子注入陆地棉花粉对胚珠DNA及M1代cDNA表达的影响 被引量：5

6

作者 岳洁瑜 杨郁文 +3 位作者 于艳杰 倪万潮 吴李君 唐灿明 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期54-59,共6页

通过对胚珠DNA的SSR标记分析,在DNA水平上检测氮离子束诱变后胚珠的多态性变化,结果表明,离子注入陆地棉花粉后再授粉雌蕊,会对胚珠的DNA多态性产生影响,表明在一定程度上改变了花粉中精细胞的DNA序列;利用抑制性消减杂交(SSH)分离N+离... 通过对胚珠DNA的SSR标记分析,在DNA水平上检测氮离子束诱变后胚珠的多态性变化,结果表明,离子注入陆地棉花粉后再授粉雌蕊,会对胚珠的DNA多态性产生影响,表明在一定程度上改变了花粉中精细胞的DNA序列;利用抑制性消减杂交(SSH)分离N+离子诱变花粉和正常花粉(对照)分别给雌蕊授粉后产生的M1代植株叶片间表达有差异的cDNA片段,建立差异表达cDNA文库。已测序的有50个缩减cDNA克隆,根据BLAST网络服务检索查询EMBL、Gen Bank、DDBJ和PDB的核苷酸序列数据库以及蛋白质氨基酸序列数据库,进行序列联配,结果发现52%序列在数据库中都有同源的棉属来源的EST。38个EST与其他物种已知基因部分区域的同源性为56%~100%,占总EST的76%;5条EST序列能在数据库中检索到同源性序列,但其功能(占10%)尚不清楚;9个EST能在数据库中发现为推测蛋白,占18%;4个EST在GenBank中没有查到对应的同源序列,占8%。 展开更多

关键词 抑制性消减杂交(ssh) SSR分子标记 N^+离子注入 陆地棉

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石斑鱼性反转相关基因ECaM的克隆及表达特征分析 被引量：4

7

作者 李尚伟 文建军 +1 位作者 刘世贵 龙章富 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第2期147-153,共7页

用甲睾酮片饲喂2～4龄赤点石斑鱼(Epinephelusakaara),6周后90%以上的雌鱼性逆转为功能性雄鱼. 运用抑制性差减杂交技术(SSH),结合SMART cDNA合成和RACE-PCR方法,从性反转雄鱼性腺中克隆到钙调蛋白基因(ECaM). 该基因cDNA全长为582 bp,... 用甲睾酮片饲喂2～4龄赤点石斑鱼(Epinephelusakaara),6周后90%以上的雌鱼性逆转为功能性雄鱼. 运用抑制性差减杂交技术(SSH),结合SMART cDNA合成和RACE-PCR方法,从性反转雄鱼性腺中克隆到钙调蛋白基因(ECaM). 该基因cDNA全长为582 bp,开放阅读框长450 bp,编码的蛋白质由149个氨基酸组成,5'端非编码区74 bp,3'端非编码区58 bp. 虚拟RNA印迹表明,ECaM在性反转雄鱼性腺中表达,而在正常雌鱼性腺中表达微弱. 各种组织的半定量RT-PCR显示,ECaM在脑、心、肝、脾、肾都有转录,在精巢和下丘脑中表达水平较高,而在肌肉中表达甚弱. 性反转不同时期性腺的半定量RT-PCR及蛋白质印迹表明,性逆转过程中性腺里ECaM的表达量逐渐增加. 上述结果提示钙调蛋白可能在赤点石斑鱼性逆转过程中发挥着作用,ECaM可能是促使石斑鱼由雌向雄转变的重要功能基因之一. 展开更多

关键词 石斑鱼 钙调蛋白 性腺 性反转 抑制性差减杂交

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与芒果子叶切段不定根形成相关基因的cDNA片段的克隆 被引量：11

8

作者 肖洁凝 黄学林 +2 位作者 张以顺 黎茵 李筱菊 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 2004年第2期136-140,共5页

在研究芒果子叶横切所形成的远轴面和近轴面的不定根形成时发现,只在近轴面形成不定根。该研究利用抑制性扣除杂交(suppressive subtractivehybridization,SSH)方法,以子叶切段远轴切面作为参照样品,近轴切面作为检测样品,构建正向差异c... 在研究芒果子叶横切所形成的远轴面和近轴面的不定根形成时发现,只在近轴面形成不定根。该研究利用抑制性扣除杂交(suppressive subtractivehybridization,SSH)方法,以子叶切段远轴切面作为参照样品,近轴切面作为检测样品,构建正向差异cDNA文库,分离与芒果子叶切段不定根形成相关基因的cDNA片段。经Virtual Northern杂交分析,获得6个阳性克隆。序列分析和同源性比较结果表明这些cDNA片段均为首次报告,它们分别与转运蛋白、转录调控因子及酶基因的DNA序列同源。 展开更多

关键词 抑制性扣除杂交(ssh) 芒果(Mangifera INDICA L.) 子叶 不定根形成 差异表达

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用抑制消减杂交法分离巴西橡胶树胶乳特异表达基因 被引量：8

9

作者 邓柳红 罗明武 +2 位作者 曾会才 杨卫帆 张春发 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第6期32-36,共5页

采用巴西橡胶树常割树胶乳的Poly(A+)RNA为Tester,叶片Poly(A+)RNA为Driver,通过抑制消减杂交法(suppressivesubtractivehybridization,SSH)构建了一个胶乳特异表达基因差减文库,通过菌落PCR及反式NorthernDot-Blot筛选鉴定阳性差异片段... 采用巴西橡胶树常割树胶乳的Poly(A+)RNA为Tester,叶片Poly(A+)RNA为Driver,通过抑制消减杂交法(suppressivesubtractivehybridization,SSH)构建了一个胶乳特异表达基因差减文库,通过菌落PCR及反式NorthernDot-Blot筛选鉴定阳性差异片段,获得79个胶乳特异表达阳性克隆,部分阳性克隆还通过NorthernBlot杂交及RT-PCR进一步验证。随机挑选部分阳性克隆序列比较分析,结果表明有部分克隆与巴西橡胶树中已知的基因相同,而多数克隆在巴西橡胶树中是新发现,它们与橡胶生物合成、物质代谢运输、信号传导和形态建成等相关。 展开更多

关键词 巴西橡胶树 抑制消减杂交法 胶乳 反式Northern Dot—Blot

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巴西橡胶树顺式异戊烯基转移酶基因cDNA克隆及其序列特征分析 被引量：4

10

作者 罗明武 邓柳红 +2 位作者 易小平 曾会才 肖苏生 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期223-228,共6页

以巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)胶乳的RNA为Tester;叶片RNA为Driver,利用抑制消减杂交法(suppressive subtractive hybridization,SSH)构建了一个胶乳特异表达基因差减文库。通过反式Northern点杂交(reverse Northern dot blots)筛... 以巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)胶乳的RNA为Tester;叶片RNA为Driver,利用抑制消减杂交法(suppressive subtractive hybridization,SSH)构建了一个胶乳特异表达基因差减文库。通过反式Northern点杂交(reverse Northern dot blots)筛选到一个与顺式异戊烯基转移酶基因(橡胶生物合成的关键酶基因)高度同源的阳性克隆R363。采用RACE方法获得该克隆的全长cDNA(GenBank登陆号:AY461414)。序列分析表明,该基因长1156 bp,含有873 bp的阅读框,编码290个氨基酸,分子量约为32.9 kD,等电点为7.2,含有N-端跨膜螺旋区。同源性分析表明R363编码的蛋白质具有异戊烯基转移酶家族的特征,含有cis-异戊烯基链转移酶的5个高度保守区,推测R363可能是一种新的顺式-异戊烯基转移酶基因。Northern blot分析显示,R363在胶乳中高度表达,在叶中不表达。乙烯处理前后表达强度一致,表明该基因表达不为乙烯所诱导。 展开更多

关键词 巴西橡胶树 抑制消减杂交法 胶乳 cis-异戊烯基转移酶

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茜素红诱导下偏肿革裥菌SSH-cDNA文库构建与差异表达基因筛选 被引量：3

11

作者 韩树英 池玉杰 +1 位作者 张健 冯连荣 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期386-394,共9页

为了探索白腐菌偏肿革裥菌降解染料茜素红过程中的生理机制和差异表达基因,在LNAS培养基上培养菌株,以添加茜素红为处理组,加入无菌水为对照组,采用抑制性消减杂交方法构建了在染料降解过程中的差异基因cDNA文库。经过2次差减杂交后所... 为了探索白腐菌偏肿革裥菌降解染料茜素红过程中的生理机制和差异表达基因,在LNAS培养基上培养菌株,以添加茜素红为处理组,加入无菌水为对照组,采用抑制性消减杂交方法构建了在染料降解过程中的差异基因cDNA文库。经过2次差减杂交后所得的阳性克隆,除去重复序列后得到75个独立基因的ESTs序列,即为差异基因的SSH-cDNA文库。文库中显著表达的差异基因主要有编码谷氨酰胺合成酶、热激蛋白70、ɑ,β水解酶、脯氨酰氨肽酶2、MFS普通基质转运蛋白、钙网结构域蛋白、20S蛋白酶体亚基α型3、3脱氧7磷酸庚酮糖合酶、醛酮还原酶、脂肪酸2羟化酶、辅酶Ⅰ黄素氧化还原酶、细胞色素P450等基因,这些差异基因及其产物参加了茜素红的氧化降解反应、糖类和蛋白质的降解作用、应激反应和信号转导途径。此研究结果可为进一步筛选偏肿革裥菌中与染料降解性状相关的基因奠定基础。 展开更多

关键词 偏肿革裥菌 抑制性差减杂交 差异表达基因 氧化还原酶 热激蛋白

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褐飞虱唾液腺中水稻抗性适应基因的分离 被引量：1

12

作者 陈鹏宇 刘顺枝 王小兰 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1235-1243,共9页

褐飞虱Nilaparvatalugens（StM）是一种危害水稻的重要害虫，在取食水稻时其唾液腺分泌的一些物质能激发水稻产生一系列生理生化反应。为了从褐飞虱唾液腺中得到编码这些分泌物的基因，本研究运用抑制差减杂交法（suppressedsubtractive... 褐飞虱Nilaparvatalugens（StM）是一种危害水稻的重要害虫，在取食水稻时其唾液腺分泌的一些物质能激发水稻产生一系列生理生化反应。为了从褐飞虱唾液腺中得到编码这些分泌物的基因，本研究运用抑制差减杂交法（suppressedsubtractivehybridization，SSH）和镜像选择（mirrororientationselection，MOS）法，分别以取食抗虫水稻B5和敏感水稻TNl的褐飞虱唾液腺cDNA为tester和driver，构建了一个含有768个克隆子的抑制差减杂交文库。经筛选得到102个EST，插入序列长250～1000bp，代表35个单基因。其中28个表达上调，7个表达下调。经GenBank里的blastx在线分析工具分析，除了约1／3的转录序列没有相匹配的蛋白质外，其他EST所代表的氨基酸序列与已知蛋白存在不同程度的相似度，如海藻溏酶、卵黄蛋白原、ca。’结合蛋白、组织蛋白酶B（cathepsinB）、黏液样蛋白（putativemucin—likeprotein）、羧酸酯酶（carboxylesterase）和碳酸酐酶（cah·3carbonicanhydrase）等，且多数蛋白含有信号肽，推测与分泌有关。本研究将为进一步研究刺吸式昆虫中的激发子蛋白奠定了一定的基础。 展开更多

关键词 褐飞虱 抗虫水稻 抗性适应基因 激发子 抑制差减杂交(ssh) 镜像选择技术(MOS)

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中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)卵黄发生前期与消退期卵巢和肝胰腺消减文库的初步构建及分析

13

作者 杨波 刘红 +1 位作者 蔡生力 方昱 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第14期138-143,共6页

利用抑制性消减杂交技术(SSH)分别对中国明对虾在卵黄发生的两个关键时期(卵黄发生前期和消退期)构建卵巢和肝胰腺的正反向消减文库,测序结果与GenBank进行BLASTx同源比较并利用GO分析进行功能注释。结果显示,各文库中的差异表达基因与... 利用抑制性消减杂交技术(SSH)分别对中国明对虾在卵黄发生的两个关键时期(卵黄发生前期和消退期)构建卵巢和肝胰腺的正反向消减文库,测序结果与GenBank进行BLASTx同源比较并利用GO分析进行功能注释。结果显示,各文库中的差异表达基因与卵巢发育时期相吻合,卵黄发生前期的卵巢和肝胰腺中分别检测到与卵黄蛋白原相关基因的出现,说明卵黄发生前期与卵黄发生有重要联系。在消退期中检测到与皮质棒形成相关的基因,说明消退期仍有皮质棒的形成,同时也检测到一些与免疫相关的基因,在机体中差异表达时期的功能有待进一步探讨。 展开更多

关键词 中国明对虾 卵巢 肝胰腺 抑制性消减杂交(ssh)

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DADS诱导HL-60 G2/M期阻滞消减文库的构建与初步筛选

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作者 汪煜华 曾永智 +2 位作者 张晓红 罗红梅 唐圣松 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第23期4435-4438,共4页

目的:构建DADS诱导HL60-细胞G2/M期阻滞的差异表达文库,初步筛选相关基因。方法:分别提取无DADS和有DADS处理HL-60细胞的总RNA和mRNA,构建消减cDNA文库。随即挑选正向SSH的阳性克隆,PCR检测插入片段,将含插入片段的克隆测序。Blastn分... 目的:构建DADS诱导HL60-细胞G2/M期阻滞的差异表达文库,初步筛选相关基因。方法:分别提取无DADS和有DADS处理HL-60细胞的总RNA和mRNA,构建消减cDNA文库。随即挑选正向SSH的阳性克隆,PCR检测插入片段,将含插入片段的克隆测序。Blastn分析差异cDNA片段的同源性。结果:构建了DADS诱导人白血病HL-60细胞G2/M期阻滞差异表达文库,其中包含120个正向SSH的克隆和100个反向SSH的克隆。50个随机正向SSH的克隆测序、比较同源性,发现5个新EST片段,已经在GenBank中登录。结论:所构建的DADS诱导人白血病HL-60细胞G2/M期阻滞消减文库为进一步筛选白血病HL-60细胞G2/M期阻滞相关基因奠定了基础。 展开更多

关键词 二烯丙基二硫 G2/M期阻滞 抑制消减杂交 消减文库 表达序列标签

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差异显示反转录-PCR及抑制性扣除杂交在基因表达差异分析中的应用 被引量：2

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作者 黄升谋 邹应斌 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 2002年第2期183-185,共3页

差异显示反转录 -PCR和抑制性扣除杂交是目前广泛应用于基因表达差异分析的方法 ,它们分别具有灵敏度高假阳性率低等特点 ,对其原理、技术。

关键词 差异显示反转录-PCR 抑制性扣除杂交 基因表达差异分析 应用

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