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致病性猪链球菌主要毒力因子基因多重PCR检测 被引量:18
1
作者 王花茹 王长军 +3 位作者 陆承平 潘秀珍 陶开华 唐家琪 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期640-644,共5页
目的建立多重PCR体系,实现猪链球菌毒力相关因子基因cps、mrp、epf(epf*)和sly的同步检测。方法根据上述毒力因子基因核苷酸序列,设计和合成4对特异性引物,通过体系和条件优化,建立多重PCR检测方法,并对72株种属背景明确的实验菌株(其... 目的建立多重PCR体系,实现猪链球菌毒力相关因子基因cps、mrp、epf(epf*)和sly的同步检测。方法根据上述毒力因子基因核苷酸序列,设计和合成4对特异性引物,通过体系和条件优化,建立多重PCR检测方法,并对72株种属背景明确的实验菌株(其中猪链球菌48株、阴性对照株24株)及49株猪临床分离的链球菌样本进行检测分析。结果48株猪链球菌中,cps2检出率为33.3%(16/48)、mrp检出率为29.2%(14/48)、epf检出率为25%(12/48)、epf*检出率为6.3%(3/48)、sly检出率为54.2%(26/48),上述检测结果与菌株的毒力因子背景情况完全相符;24株阴性对照和49株猪临床分离样本毒力因子检测结果均为阴性。结论多重PCR可用于猪链球菌毒力相关因子CPS2、MRP、EF、Sly的基因检测,特异性和敏感性好,为该病快速诊断和分子流行病学调查提供了新的技术手段。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 毒力因子 荚膜多糖 溶菌酶释放蛋白 胞外因子 溶血素 多重PCR检测 猪链球菌 基因检测 致病性
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Crystal structure of cytotoxin protein suilysin from Streptococcus suis 被引量:10
2
作者 Lingfeng Xu Bo Huang +4 位作者 Huamao Du Xuejun CZhang Jianguo Xu Xuemei Li Zihe Rao 《Protein & Cell》 SCIE CSCD 2010年第1期96-105,共10页
Cholesterol-dependent cytolysins(CDC)are pore forming toxins.A prototype of the CDC family members is perfringolysin O(PFO),which directly binds to the cell membrane enriched in cholesterol,causing cell lysis.However,... Cholesterol-dependent cytolysins(CDC)are pore forming toxins.A prototype of the CDC family members is perfringolysin O(PFO),which directly binds to the cell membrane enriched in cholesterol,causing cell lysis.However,an exception of this general observation is intermedilysin(ILY)of Streptococcus intermedius,which requires human CD59 as a receptor in addition to cholesterol for its hemolytic activity.A possible explanation of this functional difference is the conformational variation between the C-terminal domains of the two toxins,particularly in the highly conserved undecapeptide termed tryptophan rich motif.Here,we present the crystal structure of suilysin,a CDC toxin from the infectious swine pathogen Streptococcus suis.Like PFO,suilysin does not require a host receptor for hemolytic activity;yet the crystal structure of suilysin exhibits a similar conformation in the tryptophan rich motif to ILY.This observation suggests that the current view of the structure-function relationship between CDC proteins and membrane association is far from complete. 展开更多
关键词 suilysin cholesterol-dependent cytolysin crystal structure
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猪链球菌2型溶血素基因缺失菌株的构建及生物学特性的研究 被引量:6
3
作者 王雅 张安定 +4 位作者 李冉 胡攀 刘成 陈焕春 金梅林 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期854-858,共5页
溶血素(SLY)在猪链球菌2型(SS2)侵入和裂解细胞的过程中发挥重要作用,被认为是SS2的一种重要的毒力相关因子。为了探讨SLY在2005年中国四川资阳分离强毒株SS205ZY致病过程中的作用,作者利用同源重组基因敲除法成功构建了SS205ZY的sly基... 溶血素(SLY)在猪链球菌2型(SS2)侵入和裂解细胞的过程中发挥重要作用,被认为是SS2的一种重要的毒力相关因子。为了探讨SLY在2005年中国四川资阳分离强毒株SS205ZY致病过程中的作用,作者利用同源重组基因敲除法成功构建了SS205ZY的sly基因敲除突变菌株(Δsly)。并比较了菌株的溶血能力以及对小鼠的致病力。结果表明sly基因敲除后可导致猪链球菌裂解红细胞的能力显著下降,对小鼠的致病力也有一定程度的减弱,但仍表现较高的致病力。本研究结果提示SLY是猪链球菌裂解细胞的重要毒力相关因子,但造成SS205ZY的高致病性很显然与多种毒力相关因子的协同作用有关。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 溶血素 溶血活性 致病力
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肉豆蔻酸抑制猪链球菌细胞溶素活性及分子机制研究 被引量:1
4
作者 王贵珍 刘洪涛 +3 位作者 杨秀柏 姜雨晴 杨丽丽 邱家章 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2023年第15期62-68,共7页
为研究肉豆蔻酸对猪链球菌细胞溶素生物活性抑制作用及相互作用机制,本文开展了成孔活性试验、寡聚化试验、分子对接、分子动力学模拟、抗菌活性试验和乳酸脱氢酶活性试验。结果表明,肉豆蔻酸浓度为16μg/mL时显著降低了细胞溶素寡聚体... 为研究肉豆蔻酸对猪链球菌细胞溶素生物活性抑制作用及相互作用机制,本文开展了成孔活性试验、寡聚化试验、分子对接、分子动力学模拟、抗菌活性试验和乳酸脱氢酶活性试验。结果表明,肉豆蔻酸浓度为16μg/mL时显著降低了细胞溶素寡聚体的形成量,进而抑制了细胞溶素的成孔活性,血红素释放量是对照组的8.88%,抑制率达到91.12%。分子对接和分子动力学模拟结果表明肉豆蔻酸结合到细胞溶素的第一、二和三级结构域的交界处,且82Asn、83Asn、84Ser、87Ile、88Ala、90Ile、193Phe、194Gly、275Phe、372Ile、373Leu、374Ser贡献了较大结合能,在细胞溶素和肉豆蔻酸的结合过程中发挥了关键作用。无抗猪链球菌活性的肉豆蔻酸(最低抑菌浓度128μg/mL)浓度为16μg/mL时细胞溶素处理组和猪链球菌处理组乳酸脱氢酶释放量是对照组的67.84%和45.72%,表明肉豆蔻酸可显著缓解细胞溶素和猪链球菌介导的细胞毒性作用。以上研究结果表明:肉豆蔻酸通过与细胞溶素结合,影响了其寡聚体的形成,抑制了其成孔活性,在无抗菌活性的前提下显著缓解了细胞溶素和猪链球菌引发的细胞毒性作用,未来有望开发为抗猪链球菌感染药物。 展开更多
关键词 猪链球菌细胞溶素 分子模拟 肉豆蔻酸 细胞毒性
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猪链球菌2型溶血素的纯化及生物学活性研究 被引量:4
5
作者 律清宇 郝淮杰 +3 位作者 毕丽丽 郑玉玲 姜永强 吕淑霞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期374-376,共3页
目的:摸索天然和重组猪链球菌2型溶血素的纯化工艺,评价制备蛋白的生物学活性。方法:天然猪溶血素的纯化采用硫酸铵沉淀,阴离子交换层析和疏水层析制备,重组猪溶血素采用镍柱亲和层析进行柱上变复性后,用Th iolproyl-sepharose 6B进一... 目的:摸索天然和重组猪链球菌2型溶血素的纯化工艺,评价制备蛋白的生物学活性。方法:天然猪溶血素的纯化采用硫酸铵沉淀,阴离子交换层析和疏水层析制备,重组猪溶血素采用镍柱亲和层析进行柱上变复性后,用Th iolproyl-sepharose 6B进一步亲和纯化。通过溶血实验,细胞毒性测定实验评价纯化蛋白的活性。结果:制备的天然和重组猪溶血素纯度均在90%以上,具有较高的溶血活性,较高浓度时能损伤靶细胞,胆固醇能够完全封闭其活性。结论:制备获得的重组猪溶素与天然蛋白具有相近的生物学活性,为进一步研究猪链球菌2型溶血素在猪链球菌致病机制方面的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 猪链球菌溶血素 溶血活性 细胞毒性
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猪链球菌2型溶血素成熟蛋白的原核表达及其生物学特性与免疫保护性 被引量:4
6
作者 倪艳秀 何孔旺 +11 位作者 周俊明 汪伟 吕立新 俞正玉 茅爱华 温立斌 张雪寒 李彬 胡屹屹 郭容利 王小敏 陆承平 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第2期335-340,共6页
根据猪链球菌2型溶血素(SLY)的基因序列设计引物,以江苏分离株SS2-1的基因组为模板,扩增除信号肽序列外的溶血素成熟蛋白基因,并克隆到表达载体pET-32α(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌经1 mmol/L IPTG诱导,在37℃下4 h时表达产物... 根据猪链球菌2型溶血素(SLY)的基因序列设计引物,以江苏分离株SS2-1的基因组为模板,扩增除信号肽序列外的溶血素成熟蛋白基因,并克隆到表达载体pET-32α(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌经1 mmol/L IPTG诱导,在37℃下4 h时表达产物(分子量约为7.2×104)达到高峰,表达量约占菌体总蛋白质的20%,表达产物在上清和包涵体中各占一半。将上清经镍柱亲和层析纯化,纯化蛋白质经Western blotting鉴定呈阳性,对绵羊红细胞、鸡红细胞的溶血效价分别为1.707×105HU/mg、4.267×104HU/mg,并可引起HEp-2和Vero细胞的颗粒增多、圆缩和脱落。纯化蛋白质对BALB/c小鼠的免疫保护率为83.3%(5/6)。这为进一步研究SLY致病机理和研制猪链球菌新型疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 溶血素成熟蛋白 原核表达 生物学特性 免疫保护性
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重组猪溶素的生物学活性分析 被引量:4
7
作者 杜华茂 许凌峰 +3 位作者 王晓玲 李雪梅 叶长芸 徐建国 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期792-798,共7页
【目的】通过研究重组猪溶素(Recombinant Suilysin,rSLY)的生物学活性来分析猪溶素(Suilysin,SLY)在猪链球菌致病过程中的作用。【方法】利用原核表达载体pET30a(+)表达SC22株猪链球菌的猪溶素基因(sly),经Ni2+亲和柱、阴离子交换柱和... 【目的】通过研究重组猪溶素(Recombinant Suilysin,rSLY)的生物学活性来分析猪溶素(Suilysin,SLY)在猪链球菌致病过程中的作用。【方法】利用原核表达载体pET30a(+)表达SC22株猪链球菌的猪溶素基因(sly),经Ni2+亲和柱、阴离子交换柱和凝胶过滤纯化获得rSLY制品。用微量法测定rSLY对人红细胞的溶血效价,用LDH法测定rSLY对人外周血白细胞、人胚胎肺源细胞、人胚胎肝细胞和人胚胎心肌细胞的毒性强度,并用水溶性胆固醇、人血清和特异性抗体阻断rSLY的溶血活性。用Luminex测定rSLY刺激小鼠后血清中前炎性细胞因子的浓度。【结果】我们测得重组猪溶素的溶血效价仅为0.125nmol/L,但1nmol/Lr SLY对人外周血白细胞等的细胞毒性强度为20%~25%。水溶性胆固醇可阻断等摩尔浓度的rSLY,人血清样品(游离胆固醇的平均浓度为1~2mmol/L)仅能阻断1nmol/Lr SLY的溶血作用。在人血清中添加15mg/ml兔源抗猪溶素IgG可使10nmol/Lr SLY的裂解强度从77%降到5%,将猪溶素浓度提高到100nmol/L时,红细胞裂解强度为60%。C57BL/6小鼠经腹腔注射rSLY后血清中白介素6、趋化因子KC持续上升,这与注射牛血清白蛋白的对照组小鼠血清中相应细胞因子浓度有显著性差异。【结论】重组猪溶素不仅能直接损伤宿主细胞还能导致机体产生强烈的炎症反应,并进而损伤招募到炎症部位的免疫细胞;血清阻断rSLY溶血作用的能力很有限,特异性抗猪溶素抗体的保护作用表现为剂量依赖性。 展开更多
关键词 猪链球菌 猪溶素 细胞因子 胆固醇 抗体
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猪链球菌2型重组suilysin的高效表达及其生物学特性 被引量:1
8
作者 陈正涛 颜世敢 +7 位作者 张秀美 张琳 杨少华 许传田 胡北侠 郝明飞 李建亮 崔言顺 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期861-866,共6页
根据猪链球菌2型(SS2)HA9801株溶血素(suilysin,SLY)基因全长序列设计引物,扩增SLY基因,与原核表达载体pET-28a连接,转入大肠杆菌Transetta(DE3)中诱导表达,收集表达菌体,超声破壁、镍柱纯化获得可溶性rSLY蛋白,电泳鉴定后测定rSLY的溶... 根据猪链球菌2型(SS2)HA9801株溶血素(suilysin,SLY)基因全长序列设计引物,扩增SLY基因,与原核表达载体pET-28a连接,转入大肠杆菌Transetta(DE3)中诱导表达,收集表达菌体,超声破壁、镍柱纯化获得可溶性rSLY蛋白,电泳鉴定后测定rSLY的溶血活性及其溶血谱,系统研究温度、酸碱度、离子强度等理化因素对rSLY溶血活性的影响。结果表明,本试验建立的rSLY原核表达体系能高效可溶性表达具有溶血活性的rSLY,纯度达电泳纯,相对分子质量为54 000左右,100mL菌液诱导后能纯化出约8mg电泳纯的rSLY。rSLY具有高溶血活性,溶血比活为4 057HU/mg。rSLY对多种动物的红细胞有溶血作用,其中对猪、兔和豚鼠的作用最强。rSLY在4℃保存时溶血活性最稳定,保存48h后溶血活性不降低。在pH 6~7和离子强度为500mmol/L时溶血活性最高。本试验获得了高表达、可溶性、高溶血活性的rSLY,首次系统研究了不同理化因素对rSLY生物学活性的影响,为SLY致病机理深入研究及SS2亚单位疫苗和诊断试剂的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 溶血素 重组溶血素 原核表达 溶血活性
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猪链球菌2型溶血素介导细菌致病机制研究进展 被引量:3
9
作者 朱乐欣 石琴凤 蒋小武 《中国热带医学》 CAS 2020年第12期1212-1215,共4页
猪链球菌(Streptococcus suis)是一种重要的人畜共患病原菌,其中猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)致病性最强、发病率最高,SS2患病猪只传染给人,可导致败血症、心内膜炎、关节炎及脑膜炎等症状。关于其毒力因子的挖掘与功能... 猪链球菌(Streptococcus suis)是一种重要的人畜共患病原菌,其中猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)致病性最强、发病率最高,SS2患病猪只传染给人,可导致败血症、心内膜炎、关节炎及脑膜炎等症状。关于其毒力因子的挖掘与功能探索一直是猪链球菌致病机理研究的重要方向。溶血素(Sly)作为猪链球菌2型分泌性毒力因子,一直被视为是SS2的毒力标志因子之一,在细菌感染与致病过程中扮演重要作用。本文阐述了猪链球菌2型溶血素因子的溶血特性与分子结构,并重点论述Sly因子在介导SS2的黏附与侵袭、细菌繁殖与免疫逃避、突破血脑屏障与诱导脑膜炎等感染生物学过程中的作用。以期为推进猪链球菌基础研究及其他链球菌溶血素因子的机制探索提供参考。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 溶血素 致病机制
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猪链球菌2型溶血素融合蛋白的制备及免疫活性测定 被引量:3
10
作者 王海丽 徐公义 +1 位作者 葛长城 赵德明 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第6期3604-3605,3614,共3页
[目的]研究四川资阳脑膜炎病例猪链球菌2型分离株ZYH33溶血素(suliysin,sly)基因的克隆表达及融合蛋白生物活性分析。[方法]从sly中获取第230~593氨基酸残基区域的基因片段,克隆至pMD18-T载体并鉴定,以重组pMD18-T/sly为模板PCR扩增... [目的]研究四川资阳脑膜炎病例猪链球菌2型分离株ZYH33溶血素(suliysin,sly)基因的克隆表达及融合蛋白生物活性分析。[方法]从sly中获取第230~593氨基酸残基区域的基因片段,克隆至pMD18-T载体并鉴定,以重组pMD18-T/sly为模板PCR扩增基因片段,与表达载体pQE-30连接,转化至大肠杆菌TG1,重组子经PCR、酶切、测序鉴定。IPTG诱导重组蛋白表达,Western blot法鉴定融合蛋白的抗原性。[结果]基因片段在大肠杆菌中得到了表达,表达的融合蛋白可被猪链球菌2型菌体ZY05719抗血清识别,具有抗原性。[结论]所克隆、表达的溶血素区域可作为猪链球菌的诊断抗原,为基因工程疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 溶血素 克隆 表达 抗原性
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猪链球菌ZJ株溶血素基因的克隆和序列分析 被引量:2
11
作者 宋厚辉 马有智 +2 位作者 李建荣 梁雪芽 方维焕 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期103-105,共3页
猪链球菌ZJ株溶血素 (suilysin)基因 (sly)用特异引物进行PCR扩增后 ,采用T_A克隆策略将其克隆至E .ColiDH5浕。PCR产物和重组质粒酶切分析表明该基因与已报道的sly基因一致 ,核苷酸序列分析表明sly基因与P1/ 7株和 1933株的同源性分别... 猪链球菌ZJ株溶血素 (suilysin)基因 (sly)用特异引物进行PCR扩增后 ,采用T_A克隆策略将其克隆至E .ColiDH5浕。PCR产物和重组质粒酶切分析表明该基因与已报道的sly基因一致 ,核苷酸序列分析表明sly基因与P1/ 7株和 1933株的同源性分别为 99.6 %和 99.7%。 展开更多
关键词 链球菌 ZJ株 溶血素基因 序列分析 基因克隆
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猪链球菌2型溶血素B细胞表位预测 被引量:2
12
作者 邢红方 彭远义 《中国动物保健》 2010年第6期12-15,共4页
目的预测猪链球菌2型(SS2)溶血素(SLY)B细胞表位。方法以DNAstar分析为主,综合分析二级结构、亲水性、表面可及性及抗原性指数,辅以吴玉章氨基酸抗原指数计算方法进行SS2溶血素B细胞表位预测。结果推测最有可能的B细胞表位位于溶血素N端... 目的预测猪链球菌2型(SS2)溶血素(SLY)B细胞表位。方法以DNAstar分析为主,综合分析二级结构、亲水性、表面可及性及抗原性指数,辅以吴玉章氨基酸抗原指数计算方法进行SS2溶血素B细胞表位预测。结果推测最有可能的B细胞表位位于溶血素N端第74~85、231~244区域位。结论应用多参数预测SS2溶血素的特征,为表位疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 猪2型链球菌 溶血素 B细胞表位
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毛蕊花糖苷抑制2型猪链球菌的溶血素蛋白活性而降低其小鼠致病性 被引量:1
13
作者 詹佳飞 徐魁 +8 位作者 张磊 夏介英 洪杨 董涵 刘洋露 周静 袁明铭 王永金 鄢良春 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第8期1609-1616,共8页
为了探究天然化合物毛蕊花糖苷(verbascoside, VBS)对2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2, SS2)致病性的作用,本研究通过测定最低抑菌浓度、绘制细菌生长曲线及红细胞溶血试验,发现低浓度下的毛蕊花糖苷不影响猪链球菌的正常生... 为了探究天然化合物毛蕊花糖苷(verbascoside, VBS)对2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2, SS2)致病性的作用,本研究通过测定最低抑菌浓度、绘制细菌生长曲线及红细胞溶血试验,发现低浓度下的毛蕊花糖苷不影响猪链球菌的正常生长,但对其溶血活性有显著抑制作用;免疫印迹试验表明,毛蕊花糖苷不影响2型猪链球菌分泌溶血素蛋白(suilysin, SLY);通过分子对接预测毛蕊花糖苷可与SLY的2个氨基酸残基(SER-388、GLN-441)形成3条氢键结合从而使毛蕊花糖苷嵌入SLY蛋白的第4结构域,同时体外溶血活性试验进一步证实毛蕊花糖苷可直接抑制SLY介导的溶血活性;最后,小鼠体内试验结果表明,毛蕊花糖苷可明显提高2型猪链球菌感染小鼠的存活率。综上,毛蕊花糖苷在不影响2型猪链球菌生长活性的情况下,可通过抑制溶血素活性来降低2型猪链球菌对小鼠的致病性。 展开更多
关键词 2型猪链球菌 溶血素 毛蕊花糖苷 致病性
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SLY在猪链球菌性脑膜炎致病机理中的作用初探 被引量:2
14
作者 郭洋 伊鹏霏 +4 位作者 李鹏 何剑斌 张涛 韦旭斌 穆祥 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期684-690,共7页
为探索猪链球菌溶血素(SLY)在猪链球菌性脑膜炎致病机理中发挥的作用,采用纯化的SLY作用于大鼠脑微血管内皮细胞(RBMEC),利用LDH法测定其对内皮细胞的毒性,并用ELISA检测法测定其对内皮细胞IL-6分泌水平的影响,TEER值检测法测定其对内... 为探索猪链球菌溶血素(SLY)在猪链球菌性脑膜炎致病机理中发挥的作用,采用纯化的SLY作用于大鼠脑微血管内皮细胞(RBMEC),利用LDH法测定其对内皮细胞的毒性,并用ELISA检测法测定其对内皮细胞IL-6分泌水平的影响,TEER值检测法测定其对内皮细胞通透性的影响。结果表明:SLY可诱导RBMEC产生细胞毒性,且其毒性与SLY浓度及作用时间呈正相关;SLY可诱导RBMEC异常分泌IL-6,引发RBMEC的炎症反应,24h内,SLY能刺激RBMEC产生过量IL-6,除2h时IL-6的分泌水平与空白对照组无显著差异外,其他各时间点均显著高于空白对照组(p<0.01),不同浓度的SLY刺激RBMEC 12h后能造成IL-6的过量分泌,各浓度组的IL-6分泌水平均显著高于空白对照组(p<0.01);SLY可造成RBMEC细胞间通透性的增加,在一定的作用浓度范围内,其通透性增加水平与SLY浓度及作用时间呈正相关,除2μg·m L-1和4μg·m L-1组对TEER值的影响差异不显著之外,其他各SLY刺激组对TEER百分比的降低在8h后均呈浓度依赖。SLY可通过多种途径造成RBMEC的损伤,是导致血脑屏障通透性增加的重要因素,本研究初步证明了其在猪链球菌性脑膜炎致病机理中发挥了重要作用。 展开更多
关键词 猪链球菌溶血素 猪链球菌性脑膜炎 脑微血管内皮细胞 LDH IL-6 TEER
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猪链球菌2型江苏分离株溶血素基因的检测及序列分析 被引量:2
15
作者 方绍庆 陆承平 《中国畜牧兽医》 CAS 2006年第3期59-61,共3页
根据猪链球菌2型(strep tococcus su is type 2)溶血素基因(sly)设计和合成了一对可扩增其完整阅读框的引物,对HA 9801等6株猪链球菌2型江苏分离株、1株德国分离株SS2-D及猪链球菌C群参考株ATCC 35246的核酸进行PCR扩增,结果显示HA 9801... 根据猪链球菌2型(strep tococcus su is type 2)溶血素基因(sly)设计和合成了一对可扩增其完整阅读框的引物,对HA 9801等6株猪链球菌2型江苏分离株、1株德国分离株SS2-D及猪链球菌C群参考株ATCC 35246的核酸进行PCR扩增,结果显示HA 9801等6株江苏分离株及德国株SS2呈阳性,ATCC 35246呈阴性。HA 9801株PCR产物纯化后测序,序列分析结果表明该DNA片段与猪链球菌2型1933株的sly基因同源性为99%。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 溶血素 核苷酸序列
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四川脑膜炎病例猪链球菌2型溶血素抗原表位富集区的原核表达 被引量:2
16
作者 王海丽 徐公义 +2 位作者 葛长城 王长军 唐家琪 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期477-479,484,共4页
对2005年四川资阳脑膜炎病例猪链球菌2型分离株ZYH33溶血素编码蛋白中包含多个抗原表位的第230-593氨基酸残基区域的基因片段进行扩增并克隆。基因片段经酶切处理后插入表达载体pQE-30的BamHⅠ和SalⅠ位点之间,构建融合表达质粒,转化宿... 对2005年四川资阳脑膜炎病例猪链球菌2型分离株ZYH33溶血素编码蛋白中包含多个抗原表位的第230-593氨基酸残基区域的基因片段进行扩增并克隆。基因片段经酶切处理后插入表达载体pQE-30的BamHⅠ和SalⅠ位点之间,构建融合表达质粒,转化宿主菌TG1经IPTG诱导后融合基因得到了表达,用猪链球菌2型菌体抗血清对表达的融合蛋白进行免疫印迹试验,分析融合蛋白的免疫反应性。试验结果提示该溶血素蛋白第230-593氨基酸残基区域可作为猪链球菌的诊断抗原,为基因工程疫苗的研制奠定基础。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 溶血素 抗原表位 表达
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黄芩提取物对猪链球菌溶血素抑制作用的试验 被引量:2
17
作者 张伟 孙忻 +1 位作者 张沛 李莉 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第7期52-55,I0001,共5页
为了治疗和控制猪链球菌病,本文通过最小抑菌浓度、生长曲线的测定以及溶血试验等筛选针对猪链球菌溶血素(Suilysin,SLY)的抑制剂,研究发现较低浓度的黄芩提取物对猪链球菌几乎没有抗菌活性,但可以显著抑制猪链球菌SLY所诱导的溶血活性... 为了治疗和控制猪链球菌病,本文通过最小抑菌浓度、生长曲线的测定以及溶血试验等筛选针对猪链球菌溶血素(Suilysin,SLY)的抑制剂,研究发现较低浓度的黄芩提取物对猪链球菌几乎没有抗菌活性,但可以显著抑制猪链球菌SLY所诱导的溶血活性;并且黄芩提取物可以显著降低猪链球菌感染所引发的细胞损伤;此外,体内研究发现,黄芩提取物可降低猪链球菌感染小鼠的死亡率。综上,本研究结果表明,黄芩提取物可以通过抑制SLY的生物活性而在猪链球菌感染中发挥治疗作用,是一种具有开发价值、治疗猪链球菌感染的先导复合物。 展开更多
关键词 黄芩提取物 猪链球菌 溶血素
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猪链球菌溶血素(SLY)引起血小板聚集活性分析 被引量:1
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作者 张省委 刘鹏 +4 位作者 徐茂凯 尚学义 郑玉玲 袁媛 姜永强 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期40-44,共5页
目的研究重组表达的2型猪链球菌溶血素(SLY)与血小板的相互作用,为临床猪链球菌感染的救治提供理论基础。方法镍柱亲和层析法纯化重组SLY蛋白,光密度法检测其溶血活性,再通过血小板聚集仪和扫描电子显微镜观察SLY蛋白与血小板的相互作用... 目的研究重组表达的2型猪链球菌溶血素(SLY)与血小板的相互作用,为临床猪链球菌感染的救治提供理论基础。方法镍柱亲和层析法纯化重组SLY蛋白,光密度法检测其溶血活性,再通过血小板聚集仪和扫描电子显微镜观察SLY蛋白与血小板的相互作用,并研究抗血小板药物阿司匹林对SLY引起的血小板聚集的影响,通过比较野生株05ZYH33和sly基因突变株Δsly对小鼠体内血小板体积和数量的影响,推测SLY蛋白对体内血小板的影响。结果与结论重组SLY蛋白溶血活性为2000 HU,1μg/ml SLY蛋白可引起血小板高度聚集,5 mmol/L阿司匹林可显著抑制聚集,SLY蛋白可引起小鼠体内单个血小板体积增大和血小板数量减少。 展开更多
关键词 2型猪链球菌 猪链球菌溶血素 血小板聚集 阿司匹林 血小板减少
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重组表达的猪溶素及其突变体诱导小鼠巨噬细胞的细胞毒性和IL-1β释放 被引量:1
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作者 任志鸿 黄元铭 +2 位作者 王淑京 杜华茂 宋利琼 《疾病监测》 CAS 2014年第4期276-280,共5页
目的观察猪溶素(Suilysin,SLY)及其无溶血活性的突变体诱导小鼠腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophage,PM)释放IL-1β和细胞毒的差异,为进一步研究SLY诱导炎性体激活通路奠定基础。方法重组表达纯化SLY及第353氨基酸位点突变体rSLY... 目的观察猪溶素(Suilysin,SLY)及其无溶血活性的突变体诱导小鼠腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophage,PM)释放IL-1β和细胞毒的差异,为进一步研究SLY诱导炎性体激活通路奠定基础。方法重组表达纯化SLY及第353氨基酸位点突变体rSLY^353L,体外和小鼠PM相互作用,用乳酸脱氢酶释放法检测细胞毒作用,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-1β的水平。结果不同浓度rSLY(0.1~10μg)诱导小鼠PM细胞毒性呈现明显的剂量效应,rSLY(1μ/ml)诱导产生750pg/ml的IL-1β同时细胞毒〈20%;rSLY(5μg/ml)可引起最大量的IL-1μ释放但细胞毒高达90%。相同剂量的rSLY^353L不能诱导可检测到的IL—1β和细胞毒性。rSLY与PM共孵育20hIL-1β产量最高,20h后IL—1β产量下降但细胞毒性随孵育时间延长而增大。结论1μ/ml SLY和PM作用20h可诱导较高的IL-1β产生同时细胞毒性较低,该实验条件适用于进一步进行SLY激活PM炎性体信号通路的机制研究。 展开更多
关键词 猪溶素 炎症因子 细胞毒性
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猪溶血素突变体的构建及活性评价 被引量:1
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作者 任志强 郑玉玲 +4 位作者 甘淑珍 律清宇 郝淮杰 姜永强 宗浩 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期580-582,共3页
目的:构建无溶血活性的猪溶血素突变体,并对制备蛋白进行功能评价。方法:根据猪溶素的晶体结构,采用定点突变分别将其353位脯氨酸突变为丙氨酸、亮氨酸和缬氨酸。重组表达的突变体蛋白采用镍柱亲和层析进行柱上复性后,评价纯化蛋白的溶... 目的:构建无溶血活性的猪溶血素突变体,并对制备蛋白进行功能评价。方法:根据猪溶素的晶体结构,采用定点突变分别将其353位脯氨酸突变为丙氨酸、亮氨酸和缬氨酸。重组表达的突变体蛋白采用镍柱亲和层析进行柱上复性后,评价纯化蛋白的溶血活性和免疫原性。结果:获得三种猪溶素突变体,SLY(P353A),SLY(P353L)和SLY(P353V)。溶血试证明SLY(P353V)无溶血活性,蛋白质免疫印迹和动物实验显示SLY(P353V)具有免疫原性。结论:猪溶素突变体SLY(P353V)无溶血活性,有免疫原性。 展开更多
关键词 猪溶血素 定点突变 猪链球菌
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