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登革病毒3型病毒样颗粒在酵母体内的表达与鉴定 被引量：2
1
作者 付春云 方丹云 +4 位作者 刘岩 喻治准 江汉宁 江丽芳 周俊梅 《热带医学杂志》 CAS 2011年第6期613-616,656,共5页
目的探讨登革病毒3型病毒样颗粒(DENV3-VLPs)的免疫原性。方法用PCR法扩增登革病毒3型prME基因,插入载体pGAPZaA构建重组质粒pGAPZaA-prME-D3,将其转化毕赤酵母X33构建转化子pGAPZaA-prME-D3/X33。对转化子表达上清和细胞裂解液进行SDS-... 目的探讨登革病毒3型病毒样颗粒(DENV3-VLPs)的免疫原性。方法用PCR法扩增登革病毒3型prME基因,插入载体pGAPZaA构建重组质粒pGAPZaA-prME-D3,将其转化毕赤酵母X33构建转化子pGAPZaA-prME-D3/X33。对转化子表达上清和细胞裂解液进行SDS-PAGE和Western blotting分析。用蔗糖密度梯度离心纯化表达的DENV3-VLPs并进行鉴定和电镜观察。结果成功构建重组载体pGAPZaA-prME-D3,获得酵母转化子pGAPZaA-prME-D3/X33,并应用毕赤酵母表达了DENV3-VLPs,表达蛋白约50000Mr,电镜观察VLPs直径为20～50nm。结论应用酵母表达系统成功表达了DENV-3VLPs,经鉴定表明其具有免疫反应性,为后续免疫原性研究及四价登革VLPs疫苗的构建奠定了基础。 展开更多
关键词 登革病毒 病毒样颗粒 蔗糖密度梯度离心 毕赤酵母
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储存mRNA在大豆胚根萌发过程的作用
2
作者 莫蓓莘 黄彪 +2 位作者 刘丽 叶浩 徐晓峰 《深圳大学学报（理工版）》 EI CAS 北大核心 2013年第1期84-90,共7页
为研究种子是否能完全依靠储存的mRNA或储存的蛋白质完成萌发过程,分别利用转录抑制剂α-鹅膏蕈碱(α-amanitin)和制剂放线菌酮处理大豆胚根,抑制新的mRNA或新的蛋白质的合成,观察大豆胚根的萌发情况.结果发现,在转录抑制的条件下,大豆... 为研究种子是否能完全依靠储存的mRNA或储存的蛋白质完成萌发过程,分别利用转录抑制剂α-鹅膏蕈碱(α-amanitin)和制剂放线菌酮处理大豆胚根,抑制新的mRNA或新的蛋白质的合成,观察大豆胚根的萌发情况.结果发现,在转录抑制的条件下,大豆胚根能够完成萌发,种子萌发后,种苗生长停止;在翻译被抑制的条件下,大豆胚根不能完成萌发.说明大豆胚根萌发能够依赖发育过程合成并贮存在干种子中的mRNA;但种苗的发育不能完全依赖储存的RNA,需要新合成的mRNA参与.大豆胚根不能依赖储存蛋白质完成萌发过程.对大豆胚根细胞内容物进行超速离心并对不同组分中mRNA含量进行定量分析发现,干种子中的mRNA主要存在于多核糖体之外的细胞结构中,而在萌发过程中,mRNA主要存在于多核糖体中.这表明干种子中的mRNA主要以储存状态存在于mRNA的储存结构中,萌发过程大部分mRNA从储存结构中转移到多核糖体中变为活跃的翻译状态.不同萌发时期多核糖体的特征曲线也体现mRNA在细胞内存在位置的这种变化. 展开更多
关键词 植物细胞生理学 贮存信使核糖核酸 大豆胚根 种子萌发 转录抑制剂 α-鹅膏蕈碱 翻译抑制剂 放线菌酮 实时定量聚合酶链式反应 蔗糖密度梯度超速离心
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