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高速离心-同位素示踪法分析核糖体-mRNA复合物 被引量：1
1
作者 程林丽 李重九 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期29-30,共2页
本实验全面改进了用于蛋白质起始翻译阶段研究的传统介质梯度离心法。以3 2 P (TMV -RNA)为供试mRNA在麦胚离体翻译系统中形成核糖体 mRNA复合物 ,在 10 0 μL蔗糖垫上 (含蔗糖、Hepes、KAC、Mg(AC) 2 和肝素钠 ,pH7.5 ) ,1.5× 10... 本实验全面改进了用于蛋白质起始翻译阶段研究的传统介质梯度离心法。以3 2 P (TMV -RNA)为供试mRNA在麦胚离体翻译系统中形成核糖体 mRNA复合物 ,在 10 0 μL蔗糖垫上 (含蔗糖、Hepes、KAC、Mg(AC) 2 和肝素钠 ,pH7.5 ) ,1.5× 10 4r·min-1离心 15 0min即可分离该复合物与游离mRNA。测定沉淀物的cpm值可对其定性定量分析。该方法简便快速、准确安全。 展开更多
关键词 离心-同位素示踪法 核糖体-mRNA复合物 蔗糖垫 离心—液闪计数分析法
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鸡传染性支气管炎ELISA抗体检测试剂盒的研制 被引量：4
2
作者 王君玮 尹燕博 +4 位作者 刘清河 郭福生 孙淑芳 赵德明 王志亮 《中国动物检疫》 CAS 2004年第3期27-29,共3页
采用加蔗糖垫离心纯化鸡传染性支气管炎病毒(IBV)制备抗原 ,用提纯的IBV抗原包被微量板,建立了检测鸡传染性支气管炎 (IB)抗体的ELISA试剂盒。抗原、被检血清和酶标结合物的最佳工作浓度分别为10ug/ml、1∶200和1∶3200。与IDEXX试剂盒... 采用加蔗糖垫离心纯化鸡传染性支气管炎病毒(IBV)制备抗原 ,用提纯的IBV抗原包被微量板,建立了检测鸡传染性支气管炎 (IB)抗体的ELISA试剂盒。抗原、被检血清和酶标结合物的最佳工作浓度分别为10ug/ml、1∶200和1∶3200。与IDEXX试剂盒相比 ,其敏感性、重复性、特异性均接近国外同类产品水平。对SPF鸡血清、实验免疫与攻毒的SPF鸡血清进行检测 ,结果表明所建立的ELISA特异性为95.6% ,与IDEXX试剂盒符合率为95.6%。用于检测抗IBV特异性IgG抗体发现在免疫接种IB弱毒苗后 ,第4天即可检测到IgG抗体 ,峰值在第3周。试验鸡在通过滴鼻、点眼途径人工感染IBV强毒后 ,第5天抗体滴度明显上升。我们认为 ,该法是目前我国SPF鸡质量监测、养鸡生产中进行IB监测较好的方法。 展开更多
关键词 鸡 传染性支气管炎 ELISA抗体 检测试剂盒 研制技术
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水稻条叶枯病毒云南分离物(RStV-Y)的纯化与理化特性分析 被引量：1
3
作者 曲志才 马向前 +1 位作者 曹清玉 沈大棱 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期447-450,共4页
采用改进的水稻病毒纯化方法，以２００ ｇ／Ｌ的蔗糖垫替代蔗糖密度梯度，从ＲＳｔＶ 感染的水稻叶片中制备了病毒颗粒．电镜观察显示，ＲＳｔＶ 为细丝状和分枝状结构．变性琼脂糖凝胶电泳分析分离纯化的病毒总ＲＮＡ得到４ 个大小不... 采用改进的水稻病毒纯化方法，以２００ ｇ／Ｌ的蔗糖垫替代蔗糖密度梯度，从ＲＳｔＶ 感染的水稻叶片中制备了病毒颗粒．电镜观察显示，ＲＳｔＶ 为细丝状和分枝状结构．变性琼脂糖凝胶电泳分析分离纯化的病毒总ＲＮＡ得到４ 个大小不同的病毒ＲＮＡ．ＳＤＳＰＡＧＥ可检测到病毒编码的外壳蛋白．提纯病毒作为抗原与所制备的抗血清及日本抗血清均有血清学反应． 展开更多
关键词 水稻 条叶枯病毒 RStV 提纯 理化特性 病毒病
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大规模纯化脊髓灰质炎病毒的蔗糖垫层离心法的建立 被引量：1
4
作者 赵冰心 戴素萍 +4 位作者 潘小霞 夏文跃 文喻玲 廖国阳 陈元鼎 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第3期310-313,316,共5页
目的建立可大规模纯化脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)的蔗糖垫层离心法。方法病毒大量增殖后,收集病毒液,经PEG浓缩、三氟三氯乙烷抽提后,采用蔗糖垫层或Cs Cl密度梯度离心法纯化PV(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型),电镜下观察病毒形态,进行核酸及感染性... 目的建立可大规模纯化脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)的蔗糖垫层离心法。方法病毒大量增殖后,收集病毒液,经PEG浓缩、三氟三氯乙烷抽提后,采用蔗糖垫层或Cs Cl密度梯度离心法纯化PV(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型),电镜下观察病毒形态,进行核酸及感染性滴度的检测。将纯化的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型PV免疫豚鼠,心脏采血,分离血清,微量中和试验法检测血清中和抗体滴度。结果蔗糖垫层离心法纯化的各型PV,病毒颗粒形态典型,背景清晰,除完整的光滑型病毒颗粒外,还可见大量空心病毒颗粒样品,纯化效果较好;Cs Cl密度梯度离心法纯化的PV样品,病毒形态也较典型,但完整的病毒颗粒较多。两种纯化方法获得的病毒基因组核酸特征显著,背景清晰,无明显差异。蔗糖垫层离心法纯化的各型PV的感染性滴度及免疫后豚鼠血清中和抗体滴度均高于Cs Cl密度梯度离心法。结论蔗糖垫层离心法纯化的PV纯度高,免疫原性好,可用于大规模纯化PV或其他病毒。 展开更多
关键词 脊髓灰质炎病毒 蔗糖垫层 纯化
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白喉类毒素残余毒性检测新方法的建立
5
作者 马霄 谭亚军 +2 位作者 董国霞 田霖 侯启明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第3期314-316,共3页
目的建立检测联合疫苗中白喉类毒素残余毒性的新方法,以替代现有的家兔皮肤试验法。方法采用Vero细胞法检测白喉类毒素的残余毒性,对该方法的特异性、灵敏度(最低检测限)和重复性进行验证,并对Vero细胞法与家兔皮肤试验法测定白喉类毒... 目的建立检测联合疫苗中白喉类毒素残余毒性的新方法,以替代现有的家兔皮肤试验法。方法采用Vero细胞法检测白喉类毒素的残余毒性,对该方法的特异性、灵敏度(最低检测限)和重复性进行验证,并对Vero细胞法与家兔皮肤试验法测定白喉类毒素残余毒性的结果进行比较。结果 Vero细胞可特异性检测白喉类毒素的残余毒力,该方法的最低检出限为10-8 LD50白喉毒素,重复性良好,灵敏度比家兔皮肤试验法高10 000倍。结论 Vero细胞法可用于白喉类毒素残余毒性检查和毒性逆转检查,该方法特异性强,灵敏度高于家兔皮肤试验法,适用于以白喉、破伤风为基础的联合疫苗(DT-based combined vaccines,DT combos)的安全性评价。 展开更多
关键词 白喉类毒素 残余毒性 VERO细胞
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