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β-catenin基因克隆及pcDNA3.1(-)myc/hisA载体的构建
1
作者 秦国维 熊毅 +1 位作者 黎玉凤 冯乐平 《华夏医学》 CAS 2011年第2期132-134,共3页
目的:通过RT-PCR技术获得β-catenin基因,构建重组的克隆载体,再进行亚克隆构建重组pcD-NA3.1(-)myc/hisA表达载体,为进一步研究细胞增殖的信号传导提供基础。方法:应用TRIZO试剂盒从胰岛瘤NIT细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得β-catenin... 目的:通过RT-PCR技术获得β-catenin基因,构建重组的克隆载体,再进行亚克隆构建重组pcD-NA3.1(-)myc/hisA表达载体,为进一步研究细胞增殖的信号传导提供基础。方法:应用TRIZO试剂盒从胰岛瘤NIT细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得β-catenin目的基因,胶回收后的PCR产物与pGEM-T克隆载体相连,酶切鉴定后再亚克隆至pcDNA3.1(-)myc/hisA表达载体,重组的表达载体转化E.coli工程菌JM109,获得大量的含目的基因pcDNA3.1(-)myc/hisA表达载体。结果:经过氨苄青霉素的筛选、重组质粒的单酶切和双酶切鉴定表明,β-catenin成功连入载体pcDNA3.1(-)表达载体中,同时得到了大量含目的基因的克隆子。结论:成功构建pcDNA3.1(-)myc/hisA-βcatenin的重组质粒,为进一步研究β-catenin功能和Wnt细胞信号传导通路奠定了基础。 展开更多
关键词 Β-CATENIN 基因重组 pcDNA3.1(-)myc/hisA载体 T载体亚克隆
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编码霍乱肠毒素B亚单位基因植物表达载体的构建 被引量：3
2
作者 彭志强 俞守义 +1 位作者 余迪求 贺竹梅 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第8期736-738,共3页
目的构建含霍乱肠毒素B亚单位(CTB)基因的植物双元表达载体。方法采用高保真PCR方法调出CTB基因,定向克隆到中间载体pRTL2,经测序证实核酸序列正确后,再亚克隆到含植物双元表达载体pBI121上;采用电击法,将含CTB的植物表达载体转入根癌... 目的构建含霍乱肠毒素B亚单位(CTB)基因的植物双元表达载体。方法采用高保真PCR方法调出CTB基因,定向克隆到中间载体pRTL2,经测序证实核酸序列正确后,再亚克隆到含植物双元表达载体pBI121上;采用电击法,将含CTB的植物表达载体转入根癌农杆菌中,并进行酶切证实。结果PCR扩增的CTB片断亚克隆到中间载体,得到pRCTB和pRCTBK,测序证实CTB核酸序列正确;再与根癌农杆菌双元载体pBI121连接,获得含CTB基因的植物双元表达载体pBI-CTB和pBI-CTBK,转入根癌农杆菌的载体,酶切证实正确。结论采用正确技术路线,构建了含CTB基因的植物表达载体,为下一步的转基因植物表达研究打下了坚实的基础。 展开更多
关键词 霍乱肠毒素 亚克隆 多聚酶链式反应 植物表达载体
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肝细胞生长因子真核表达质粒的构建、鉴定及表达
3
作者 李德鹏 桑威 +3 位作者 李振宇 黄一虹 张奎 徐开林 《徐州医学院学报》 CAS 2012年第12期803-806,共4页
目的克隆人肝细胞生长因子（humanhepatocytegrowthfactor，hHGF）的编码基因，构建真核表达载体，获得hHGF蛋白。方法从含hHGF的人肝脏组织总RNA中，利用RT—PCR方法扩增出hHGFcDNA；利用TA克隆技术，将该基因片段克隆至真核表达载体pc... 目的克隆人肝细胞生长因子（humanhepatocytegrowthfactor，hHGF）的编码基因，构建真核表达载体，获得hHGF蛋白。方法从含hHGF的人肝脏组织总RNA中，利用RT—PCR方法扩增出hHGFcDNA；利用TA克隆技术，将该基因片段克隆至真核表达载体pcDNA3．1＋质粒，转化E．coliDH5a细胞，鉴定pcDNA3．1＋-hH—GF重组质粒。将重组质粒pcDNA3．1＋-hHGF转染293T细胞，应用ELISA方法检测hHGF在293T细胞中的表达。结果①测序结果证实本实验克隆的基因与人HGF基因序列-致。②重组质粒pcDNA3．1＋-hHGF是具有表达功能的真核表达质粒。③pcDNA3．1＋-hHGF转染293T细胞，于转染后12、24、48、72h均能检测到hH-GF表达。结论成功构建hHGF真核表达载体，获得分泌性hHGF蛋白。 展开更多
关键词 人肝细胞生长因子 TA克隆 亚克隆 真核表达载体
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嗜碱细菌NTT36嗜碱基因的亚克隆及其在大肠杆菌和农杆菌中的表达
4
作者 刘同明 曹军卫 +2 位作者 王玲燕 刘阳 俞雁寻 《氨基酸和生物资源》 CAS 1999年第2期37-40,共4页
将大肠杆菌ＨＢ１０１嗜碱转化子中质粒ｐＧＣＡ所携带的嗜碱基因亚克隆至双元载体ｐＢＩ１２１质粒中，构建了植物表达载体ｐＬＧＣ重组质粒。用其转化大肠杆菌ＨＢ１０１获得了能在碱性和卡那霉素抗性平板上生长的转化子，再通过三亲... 将大肠杆菌ＨＢ１０１嗜碱转化子中质粒ｐＧＣＡ所携带的嗜碱基因亚克隆至双元载体ｐＢＩ１２１质粒中，构建了植物表达载体ｐＬＧＣ重组质粒。用其转化大肠杆菌ＨＢ１０１获得了能在碱性和卡那霉素抗性平板上生长的转化子，再通过三亲交配法将亚克隆质粒ｐＬＧＣ转化进农杆菌ＬＢＡ４４０４，又获得能在碱性平板和卡那霉素及利福平双抗平板上生长的转化子，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果表明ＨＢ１０１转化子亚克隆质粒ｐＬＧＣ是由来自于嗜碱芽孢杆菌ＮＴＴ３６染色体ＤＮＡ和双元载体ｐＢＩ１２１组成，且农杆菌ＬＢＡ４４０４转化子含有来自大肠杆菌亚克隆转化子的ｐＬＧＣ质粒。 展开更多
关键词 嗜碱芽孢杆菌 农杆菌 亚克隆 植物表达载体
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