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粗糙脉孢菌蛋白表达系统构建研究
被引量：
1
1
作者
高染染
刘倩
+3 位作者
孙文良
孙志勇
刘浩
田朝光
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第7期160-169,共10页
旨在将模式丝状真菌粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)构建为蛋白质表达系统。通过真菌杂交技术构建出粗糙脉孢菌六突变缺失菌株LQ-1(Δ3βG∷Δ2cbh∷Δhis3)作为蛋白表达宿主菌株。该宿主菌株可以用纤维二糖作为诱导物诱导纤维素酶启动...
旨在将模式丝状真菌粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)构建为蛋白质表达系统。通过真菌杂交技术构建出粗糙脉孢菌六突变缺失菌株LQ-1(Δ3βG∷Δ2cbh∷Δhis3)作为蛋白表达宿主菌株。该宿主菌株可以用纤维二糖作为诱导物诱导纤维素酶启动子表达,同时又消除了葡萄糖苷酶蛋白的背景条带,有利于目标蛋白表达纯化。构建了分别含有粗糙脉孢菌自身强启动子(Pcbh-1、Pcbh-2和Ptef-1)的3个新的高效表达载体,该载体带有融合标签蛋白tev-6×his-gfp,能高效方便的筛选阳性转化子,有利于后续目标蛋白纯化。以纤维素酶GH3-4和CBH-1为例,通过重组表达菌株纤维二糖诱导发酵液进行酶活测定、SDS-PAGE电泳分析和Western blotting检测显示,重组蛋白GH3-4-GFP和CBH-1-GFP成功进行了表达和分泌,分泌水平分别为2.77和2.83 mg/L。Pcbh-1启动子重组蛋白表达水平最高,说明在纤维二糖诱导体系中启动子Pcbh-1的启动效率最高,初步建立了粗糙脉孢菌纤维二糖诱导的蛋白质表达体系。
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关键词
丝状真菌
粗糙脉孢菌
蛋白表达系统
纤维二糖
强启动子
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职称材料
玉米低磷胁迫诱导型强启动子P_(1502)-ZmPHR1的克隆与表达分析
被引量：
2
2
作者
杨瑞娟
白建荣
+4 位作者
闫蕾
苏亮
王秀红
李锐
张丛卓
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第7期1000-1009,共10页
玉米ZmPHR1基因是转录因子MYB-CC家族成员,过量表达该基因可促进低磷环境中植物对磷的吸收并改善植物的生长。本研究从磷高效利用型玉米自交系478中获得了ZmPHR1基因的5'上游序列P_(2205)-ZmPHR1,序列长度2205 bp。将P_(2205)-ZmPHR...
玉米ZmPHR1基因是转录因子MYB-CC家族成员,过量表达该基因可促进低磷环境中植物对磷的吸收并改善植物的生长。本研究从磷高效利用型玉米自交系478中获得了ZmPHR1基因的5'上游序列P_(2205)-ZmPHR1,序列长度2205 bp。将P_(2205)-ZmPHR1及它的4种5'端缺失启动子片段与报告基因GUS连接后转化拟南芥。GUS组织化学染色与GUS定量分析结果表明,在0~1502 bp的片段范围内,随着片段长度的增加,它对外界低磷环境的响应逐步增加,在-1502 bp时,响应时间短,表达活性高,持续时间长;超过1502 bp其活性不但没有增高,反而变为下降或无变化。推测0至-972 bp为启动子功能区段,-972 bp至-1502 bp为启动功能增强区段。转P_(1502)-ZmPHR1拟南芥的实时定量PCR结果显示,P_(1502)-ZmPHR1既受外界信号的刺激,也受体内基因产物的影响,有反馈调节的作用,是一个受低磷胁迫诱导的强诱导型启动子,它诱导基因表达的功能受体内外磷浓度的调节。该研究为在低磷环境改良作物提供了理想的启动子和应用依据。
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关键词
玉米
低磷胁迫
强诱导型启动子
P1502-ZmPHR1
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职称材料
题名
粗糙脉孢菌蛋白表达系统构建研究
被引量：
1
1
作者
高染染
刘倩
孙文良
孙志勇
刘浩
田朝光
机构
天津科技大学生物工程学院教育部工业发酵微生物重点实验室
中国科学院天津工业生物技术研究所系统微生物工程重点实验室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第7期160-169,共10页
基金
国家高技术研究发展计划("863"计划)(SS2012AA023303)
文摘
旨在将模式丝状真菌粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)构建为蛋白质表达系统。通过真菌杂交技术构建出粗糙脉孢菌六突变缺失菌株LQ-1(Δ3βG∷Δ2cbh∷Δhis3)作为蛋白表达宿主菌株。该宿主菌株可以用纤维二糖作为诱导物诱导纤维素酶启动子表达,同时又消除了葡萄糖苷酶蛋白的背景条带,有利于目标蛋白表达纯化。构建了分别含有粗糙脉孢菌自身强启动子(Pcbh-1、Pcbh-2和Ptef-1)的3个新的高效表达载体,该载体带有融合标签蛋白tev-6×his-gfp,能高效方便的筛选阳性转化子,有利于后续目标蛋白纯化。以纤维素酶GH3-4和CBH-1为例,通过重组表达菌株纤维二糖诱导发酵液进行酶活测定、SDS-PAGE电泳分析和Western blotting检测显示,重组蛋白GH3-4-GFP和CBH-1-GFP成功进行了表达和分泌,分泌水平分别为2.77和2.83 mg/L。Pcbh-1启动子重组蛋白表达水平最高,说明在纤维二糖诱导体系中启动子Pcbh-1的启动效率最高,初步建立了粗糙脉孢菌纤维二糖诱导的蛋白质表达体系。
关键词
丝状真菌
粗糙脉孢菌
蛋白表达系统
纤维二糖
强启动子
Keywords
filamentous
fungi
Neurospora
crassa
recombinant
protein
expression
system
cellobiose
strong
inducible
promoters
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
玉米低磷胁迫诱导型强启动子P_(1502)-ZmPHR1的克隆与表达分析
被引量：
2
2
作者
杨瑞娟
白建荣
闫蕾
苏亮
王秀红
李锐
张丛卓
机构
山西大学生物工程学院
山西省农业科学院作物科学研究所
山西省农业科学院现代农业研究中心
出处
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第7期1000-1009,共10页
基金
山西省农业科学院农业科技创新项目(ZDSYS1507)资助~~
文摘
玉米ZmPHR1基因是转录因子MYB-CC家族成员,过量表达该基因可促进低磷环境中植物对磷的吸收并改善植物的生长。本研究从磷高效利用型玉米自交系478中获得了ZmPHR1基因的5'上游序列P_(2205)-ZmPHR1,序列长度2205 bp。将P_(2205)-ZmPHR1及它的4种5'端缺失启动子片段与报告基因GUS连接后转化拟南芥。GUS组织化学染色与GUS定量分析结果表明,在0~1502 bp的片段范围内,随着片段长度的增加,它对外界低磷环境的响应逐步增加,在-1502 bp时,响应时间短,表达活性高,持续时间长;超过1502 bp其活性不但没有增高,反而变为下降或无变化。推测0至-972 bp为启动子功能区段,-972 bp至-1502 bp为启动功能增强区段。转P_(1502)-ZmPHR1拟南芥的实时定量PCR结果显示,P_(1502)-ZmPHR1既受外界信号的刺激,也受体内基因产物的影响,有反馈调节的作用,是一个受低磷胁迫诱导的强诱导型启动子,它诱导基因表达的功能受体内外磷浓度的调节。该研究为在低磷环境改良作物提供了理想的启动子和应用依据。
关键词
玉米
低磷胁迫
强诱导型启动子
P1502-ZmPHR1
Keywords
maize
low
phosphorus
stress
strong
inducible
promot
er
P1502-ZmPHR1
分类号
Q943.2 [生物学—植物学]
S513 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
粗糙脉孢菌蛋白表达系统构建研究
高染染
刘倩
孙文良
孙志勇
刘浩
田朝光
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
1
下载PDF
职称材料
2
玉米低磷胁迫诱导型强启动子P_(1502)-ZmPHR1的克隆与表达分析
杨瑞娟
白建荣
闫蕾
苏亮
王秀红
李锐
张丛卓
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
2
下载PDF
职称材料
已选择
0
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统计分析
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