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脂肪干细胞与骨髓间充质干细胞成软骨能力的比较 被引量：20
1
作者 安荣泽 赵俊延 王兆杰 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第32期5793-5798,共6页
背景:脂肪干细胞与骨髓间充质干细胞是软骨组织工程中应用较多细胞,二者在生物学特性上有诸多相似之处。目的:比较脂肪来源和骨髓来源的2种间充质干细胞的成软骨分化能力。方法:选取3月龄新西兰大白兔,取腹部脂肪,分离提取脂肪干细胞。... 背景:脂肪干细胞与骨髓间充质干细胞是软骨组织工程中应用较多细胞,二者在生物学特性上有诸多相似之处。目的:比较脂肪来源和骨髓来源的2种间充质干细胞的成软骨分化能力。方法:选取3月龄新西兰大白兔,取腹部脂肪,分离提取脂肪干细胞。取兔双侧股骨,采用贴壁筛选法分离提取骨髓间充质干细胞。绘制第3代脂肪干细胞和骨髓间充质干细胞的生长曲线,比较2种细胞的倍增时间。对第3代脂肪干细胞和骨髓间充质干细胞进行成软骨诱导,分别对诱导14d的2种细胞行甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色。结果与结论:骨髓间充质干细胞原代细胞呈聚集样生长,而脂肪干细胞原代细胞呈单个、散在生长。脂肪干细胞增殖速度要快于骨髓间充质干细胞,倍增时间短于骨髓间充质干细胞h。2种细胞成软骨诱导14d后,均表达糖胺聚糖和Ⅱ型胶原,且骨髓间充质干细胞成软骨诱导后表达Ⅱ型胶原水平高于脂肪干细胞。说明脂肪干细胞与骨髓间充质干细胞体外增殖皆迅速且稳定,但是脂肪干细胞的生长增殖速度更快。单层培养时,特定条件下,脂肪干细胞与骨髓间充质干细胞均能向软骨细胞转化,但是骨髓间充质干细胞比脂肪干细胞具有更高的潜能。 展开更多
关键词 干细胞 脂肪干细胞 骨髓间充质干细胞 骨髓 脂肪组织 成软骨分化 Ⅱ型胶原 间充质干细胞 省级基金 干细胞图片文章
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神经干细胞培养及其影响因素 被引量：17
2
作者 徐富翠 邹礼乐 +1 位作者 梅欣明 郭勇 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第10期1835-1840,共6页
背景:神经干细胞移植治疗是中枢神经系统损伤性、难治性疾病研究的热点。如何有效提高神经干细胞存活率、克隆形成率将是其应用的重要基础和前提。目的:探讨影响神经干细胞培养质量的可能因素,为神经干细胞的基础和临床应用研究提供参... 背景:神经干细胞移植治疗是中枢神经系统损伤性、难治性疾病研究的热点。如何有效提高神经干细胞存活率、克隆形成率将是其应用的重要基础和前提。目的:探讨影响神经干细胞培养质量的可能因素,为神经干细胞的基础和临床应用研究提供参考。方法:①神经干细胞分离和培养:分离出生24h内SD大鼠的大脑,剪碎离心后以1×108L-1的浓度接种,经含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基预培养4h后改用无血清条件培养基(DMEM/F12,碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、B27)培养,2d或3d换液1次,6d时传代。②神经干细胞鉴定:倒置显微镜下观察细胞形态及生物学特性;免疫组化检测第3代细胞神经巢蛋白表达和诱导分化后神经元特异性烯醇化酶和神经胶质酸性蛋白的表达。结果与结论:出生24h的新生大鼠可获得足量的神经干细胞;血清预培养可提高神经干细胞的增殖和存活率;免疫组化结合血清诱导分化可对培养的神经干细胞进行定性鉴定。取材时间、细胞接种密度、传代时间、细胞因子、血清等多种因素都将影响神经干细胞的培养质量。 展开更多
关键词 干细胞 干细胞培养与分化 神经干细胞 培养 取材时间 细胞密度 血清 传代 细胞因子 影响因素 其他基金 干细胞图片文章
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丹酚酸B及丹参酮ⅡA诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞 被引量：16
3
作者 李旭 王亚玲 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第10期1849-1855,共7页
背景:目前大多数研究者采用5-氮胞苷诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞,存在着一定的不良反应,难以应用于临床。中药丹参本身在临床上广泛用于治疗心血管系统疾病,其主要化学成分为丹酚酸B和丹参酮ⅡA。目的:观察丹酚酸B及丹参酮ⅡA... 背景:目前大多数研究者采用5-氮胞苷诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞,存在着一定的不良反应,难以应用于临床。中药丹参本身在临床上广泛用于治疗心血管系统疾病,其主要化学成分为丹酚酸B和丹参酮ⅡA。目的:观察丹酚酸B及丹参酮ⅡA联合诱导骨髓间充质干细胞定向分化为心肌样细胞的效果。方法:取SD大鼠四肢骨骨髓,分离培养骨髓间充质干细胞,应用丹酚酸B、丹参酮ⅡA及二者联合分别对第2代骨髓间充质干细胞定向诱导,不加诱导剂为空白对照组。3d后各实验组去除诱导培养基,用正常培养基继续培养4周。结果与结论:空白对照组细胞结蛋白、α-横纹肌肌动蛋白、肌钙蛋白T及缝隙连接蛋白43均为弱阳性或阴性表达。与空白对照组相比,丹酚酸B组,丹参酮ⅡA组,丹酚酸B+丹参酮ⅡA组骨髓间充质干细胞各标记物阳性表达均明显升高,且差异有显著性意义(P<0.01)。其中,二者联合诱导组各标记物的阳性率均最高。荧光免疫细胞化学鉴定可见诱导组细胞质内结蛋白的表达呈红色,肌钙蛋白T的表达呈绿色,当两者同时被观察时可见其重叠的部位变成黄色。结果显示丹酚酸B及丹参酮ⅡA均可分别诱导骨髓间充质干细胞获得心肌分化表型,且二者联合诱导效果最好。 展开更多
关键词 干细胞 干细胞与中医药 丹酚酸B 丹参酮ⅡA 骨髓间充质干细胞 心肌细胞 诱导分化 结蛋白 肌动蛋白 肌钙蛋白 缝隙连接蛋白43 干细胞图片文章
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全骨髓贴壁法培养兔骨髓间充质干细胞体外定向成骨诱导分化及鉴定 被引量：13
4
作者 肖仕辉 韦庆军 +3 位作者 赵劲民 薄占东 韦积华 李伟岸 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第6期1069-1074,共6页
背景:流式细胞仪分离法和免疫磁珠分离法对细胞活性影响较大,密度梯度离心法虽然能够获得纯度高的单核细胞,但由于多次离心可造成细胞的大量流失且对细胞活性有一定的影响使其应用值得商榷。目的:采用全骨髓贴壁法分离兔骨髓间充质干细... 背景:流式细胞仪分离法和免疫磁珠分离法对细胞活性影响较大,密度梯度离心法虽然能够获得纯度高的单核细胞,但由于多次离心可造成细胞的大量流失且对细胞活性有一定的影响使其应用值得商榷。目的:采用全骨髓贴壁法分离兔骨髓间充质干细胞进行成骨诱导分化及鉴定。方法:采用全骨髓贴壁法体外分离培养兔骨髓间充质干细胞,倒置显微镜下观察细胞形态学特征。在成骨诱导剂作用下,通过碱性磷酸酶染色试剂盒行碱性磷酸酶染色,Ⅰ型胶原免疫细胞化学染色,VonKossa法及茜素红进行矿化结节染色以及电镜下检测兔骨髓间充质干细胞成骨诱导后的形态结构。结果与结论:经诱导后细胞出现与成骨细胞相似的形态学特征,碱性磷酸酶染色阳性,Ⅰ型胶原免疫细胞化学染色,Von-Kossa法及茜素红矿化结节染色阳性。表明经成骨诱导剂诱导后全骨髓贴壁法体外分离纯化培养的兔骨髓间充质干细胞能向成骨细胞方向分化增殖。 展开更多
关键词 干细胞 干细胞培养与分化 全骨髓贴壁法分离法 骨髓间充质干细胞 细胞培养 成骨分化 组织工 程骨 省级基金 干细胞图片文章
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自体激活富血小板血浆干预兔骨髓间充质干细胞体外成软骨分化的研究 被引量：13
5
作者 王善正 王宸 芮云峰 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第1期1-8,共8页
背景:自体富血小板血浆激活后可释放多种生长因子,可以促进骨髓间充质干细胞的增殖与分化。目的:观察自体激活富血小板血浆对体外培养的兔骨髓间充质干细胞向成软骨细胞分化的影响。方法:取兔股骨骨髓,全骨髓贴壁法分离培养骨髓间充质... 背景:自体富血小板血浆激活后可释放多种生长因子,可以促进骨髓间充质干细胞的增殖与分化。目的:观察自体激活富血小板血浆对体外培养的兔骨髓间充质干细胞向成软骨细胞分化的影响。方法:取兔股骨骨髓,全骨髓贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞;取第3代骨髓间充质干细胞,分别应用体积分数10%自体激活富血小板血浆和体积分数10%胎牛血清培养液进行体外培养,观察其向成软骨细胞分化情况。结果与结论:分离培养的兔骨髓间充质干细胞呈长梭形,传代后细胞生长迅速。流式细胞仪检测发现第3代细胞高表达CD29、CD44,而低表达CD45。免疫荧光细胞化学染色显示经自体激活富血小板血浆诱导的骨髓间充质干细胞表达Ⅱ型胶原;实时荧光定量PCR检测发现经自体激活富血小板血浆诱导的骨髓间充质干细胞Ⅱ型胶原α1链基因和聚集蛋白聚糖基因表达明显高于经胎牛血清诱导的骨髓间充质干细胞(P<0.01)。可见自体激活富血小板血浆具有促进兔骨髓间充质干细胞向软骨细胞方向分化的潜能。 展开更多
关键词 干细胞 骨髓干细胞 富血小板血浆 骨髓间充质干细胞 软骨细胞 分化 Ⅱ型胶原 Ⅱ型胶原α1链 聚集蛋白聚糖 兔 关节软骨损伤 省级基金 干细胞图片文章
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信号通路对胃癌干细胞及胃癌发生的影响 被引量：13
6
作者 陈浩 许浪 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第14期2532-2537,共6页
背景:Hedgehog与Wnt/β-catenin信号通路对胃癌干细胞的影响及在胃癌发生发展中的作用机制少见报道。目的:探讨Hedgehog与Wnt/β-catenin信号通路在胃癌发生发展中的作用机制。方法:采用肿瘤球悬浮分选法从胃癌组织标本中分选胃癌干细... 背景:Hedgehog与Wnt/β-catenin信号通路对胃癌干细胞的影响及在胃癌发生发展中的作用机制少见报道。目的:探讨Hedgehog与Wnt/β-catenin信号通路在胃癌发生发展中的作用机制。方法:采用肿瘤球悬浮分选法从胃癌组织标本中分选胃癌干细胞。采用免疫组化SP法检测Hedgehog及Wnt/β-catenin信号通路主要分子SHH、GLI1、Wnt2及β-catenin在胃癌干细胞中的表达。Spearman相关分析各细胞因子间的相关性分析。结果与结论:SHH、GLI1、Wnt2及β-catenin在胃癌干细胞中的阳性表达率分别为74.7%,78.3%,85.5%和83.3%,均显著高于癌旁组织的阳性表达率(P<0.05)。各细胞因子间在胃癌干细胞中的表达均呈正相关(P<0.05)。说明在胃癌干细胞中Hedgehog及Wnt/β-catenin信号通路均被激活,二者互相作用可能参与了胃癌的发生发展,为胃癌的干细胞治疗提供了新的研究方向。 展开更多
关键词 干细胞 肿瘤干细胞 胃癌 胃癌干细胞 HEDGEHOG信号通路 Wnt/β-catenin信号通路 SHH GLI1 Wnt2 β-catenin 克隆球细胞 免疫组化 阳性细胞 干细胞图片文章
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不同部位脂肪源性干细胞的生物学特性比较 被引量：13
7
作者 林立新 黄勇 +4 位作者 王玉婷 王鹏 王学明 姜蕾 林冠妤 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第27期4992-4997,共6页
背景: 大鼠不同部位来源的脂肪源性干细胞在体外培养时的特性是否存在差异目前尚无定论。目的: 比较同一只大鼠不同部位来源的脂肪源性干细胞在体外培养时的生长特性和成脂诱导分化能力的差异。方法: 无菌操作下取F344大鼠腹股沟及腹腔... 背景: 大鼠不同部位来源的脂肪源性干细胞在体外培养时的特性是否存在差异目前尚无定论。目的: 比较同一只大鼠不同部位来源的脂肪源性干细胞在体外培养时的生长特性和成脂诱导分化能力的差异。方法: 无菌操作下取F344大鼠腹股沟及腹腔大网膜脂肪组织各5mL,Ⅰ型胶原酶酶解法分离出脂肪源性干细胞,细胞计数后进行体外培养,观察其形态特征和生长状态,MTT法测定不同部位细胞的倍增时间。取不同部位来源的第2代脂肪源性干细胞进行成脂诱导,诱导14d进行油红O染色,观察不同部位来源的脂肪源性干细胞的成脂分化能力。结果与结论: 在同一只大鼠内脏大网膜脂肪获得的脂肪源性干细胞数目为(281±10)×107L-1,明显多于腹股沟皮下脂肪的(85±5)×107L-1(P<0.01)。从内脏大网膜脂肪与腹股沟皮下脂肪获得的脂肪源性干细胞分别于第5,6天进入指数增长期;第9,10天到达平台期;倍增时间为50h和60h左右。传代后的细胞生长分化活跃,呈成纤维细胞样,成脂诱导后,大网膜组织来源的脂肪源性干细胞的成脂诱导分化率明显高于腹股沟组织来源的脂肪源性干细胞[(38.90±2.86)%,(35.30±3.29)%,P<0.01]。可见同一只大鼠不同部位脂肪组织分离得到的脂肪源性干细胞数目不同,体外成脂诱导分化能力亦存在差异。 展开更多
关键词 干细胞 脂肪干细胞 腹股沟 腹腔大网膜 脂肪组织 不同部位 差异 生物学特性 大鼠 细胞分化 种子细胞 干细胞图片文章
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低频电磁场促进骨髓间充质干细胞移植修复大鼠脊髓损伤的实验研究 被引量：11
8
作者 冯玉 白文芳 +5 位作者 许伟成 李新平 白利明 梁玲 王鑫 张鸣生 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第32期5819-5826,共8页
背景:骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤被视为一种有前途的治疗方法,如何更有效地促进骨髓间充质干细胞在脊髓损伤区存活,加速脊髓损伤肢体运动功能的恢复是目前研究的重点。前期研究发现,低频电磁场能够促进骨髓间充质干细胞的增殖分... 背景:骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤被视为一种有前途的治疗方法,如何更有效地促进骨髓间充质干细胞在脊髓损伤区存活,加速脊髓损伤肢体运动功能的恢复是目前研究的重点。前期研究发现,低频电磁场能够促进骨髓间充质干细胞的增殖分化,低频电磁场是否可应用于骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤还需进一步研究。目的:探讨低频电磁场对移植骨髓间充质干细胞脊髓损伤大鼠后肢运动功能恢复的影响。方法:采用脊髓压迫法制备64只T10不完全性脊髓损伤大鼠模型,随机等分为对照组、骨髓间充质干细胞组、电磁场组和电磁场+骨髓间充质干细胞组。造模成功后,骨髓间充质干细胞组和电磁场+骨髓间充质干细胞组大鼠脊髓损伤原部位注射大鼠全贴壁法分离培养BrdU标记的骨髓间充质干细胞,对照组和电磁场组注射a-MEM培养液。造模术后24h,电磁场组和电磁场+骨髓间充质干细胞组予60min/d的低频电磁场刺激(频率50Hz、强度5mT)。结果与结论:骨髓间充质干细胞移植后第21天,电磁场+骨髓间充质干细胞组BBB评分与其他组相比,差异有显著性意义(P<0.05),与其他各组比较,电磁场+骨髓间充质干细胞组移植细胞后,大鼠BrdU阳性细胞在脊髓损伤区域生长并与脊髓组织融合,存活细胞数量较其他组多;空洞面积小;损伤区胶质纤维酸性蛋白表达更少,而基质金属蛋白2表达更多;脊髓损伤大鼠下肢运动功能恢复最快(P<0.05)。提示低频电磁场促进了移植骨髓间充质干细胞脊髓损伤大鼠后肢运动功能的恢复,可能与低频电磁场有利于损伤区移植骨髓间充质干细胞的存活,上调基质金属蛋白2的表达并减少胶质瘢痕的形成有关。 展开更多
关键词 干细胞 干细胞移植 低频电磁场 脊髓损伤 骨髓间充质干细胞 细胞移植 省级基金 干细胞图片文章
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神经干细胞移植治疗帕金森病的有效性与安全性 被引量：11
9
作者 张晓英 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第27期5033-5040,共8页
背景: 目前临床应用扩增的神经干细胞治疗神经系统疾病仍在探索阶段。目的: 探讨神经干细胞移植治疗帕金森病的有效性以及安全性。方法: 取12周人胚胎脑组织体外培养扩增,计数5×106-2×107制作成混悬液4-6mL,通过腰穿、颈动脉... 背景: 目前临床应用扩增的神经干细胞治疗神经系统疾病仍在探索阶段。目的: 探讨神经干细胞移植治疗帕金森病的有效性以及安全性。方法: 取12周人胚胎脑组织体外培养扩增,计数5×106-2×107制作成混悬液4-6mL,通过腰穿、颈动脉注射途径植入30例帕金森病患者体内,1次/周,共3次。移植前后进行统一帕金森病评定量表(UPDRS)、修正Hoehn-Yahr分级量表、帕金森病Schwab&England日常活动分级量表评分。移植前后检测和评估血尿常规、肝功、肾功、不良反应。结果与结论: 12周龄胚胎培养的神经干细胞可在体外稳定扩增,并且具有分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的能力。通过随访发现神经干细胞移植能有效控制帕金森病病理进程、恢复受损脑功能,改善患者的神经功能,无明显并发症。可见应用体外长期扩增的人类神经干细胞移植治疗帕金森病是可行和有效的。 展开更多
关键词 干细胞 干细胞移植 神经干细胞 帕金森病 神经系统疾病 细胞移植 酪氨酸羟化酶 巢蛋白 日常生活活动能力 扩增 有效性 安全性 干细胞图片文章
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兔骨髓间充质干细胞的分离培养及成骨诱导 被引量：10
10
作者 庾佳佳 汪新柱 +5 位作者 赵琳 孙瑞 闫雪萍 张苍宇 任广铁 拓振合 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第6期974-979,共6页
背景:骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能,且可大量体外扩增培养,是重要的组织工程种子细胞。但尚无统一的体外培养及定向诱导方法。目的:探讨体外定向诱导兔骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞的可行性。方法:应用密度梯度离心法从兔四肢... 背景:骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能,且可大量体外扩增培养,是重要的组织工程种子细胞。但尚无统一的体外培养及定向诱导方法。目的:探讨体外定向诱导兔骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞的可行性。方法:应用密度梯度离心法从兔四肢骨中分离纯化间充质干细胞,应用密度为1.073g/mL的Percoll分离液,3000r/min×30min离心,区别于相关报道的Ficoll分离液,2000-2500r/min×(20-30)min离心以及全骨髓培养法体外扩增至第3代,分别在普通培养基(对照组)和成骨诱导培养基(实验组)中培养。结果与结论:成功获得大量高纯度骨髓间充质干细胞。经成骨诱导后,实验组骨钙素含量明显高于对照组(P<0.05)。实验组碱性磷酸酶和钙结节染色阳性,对照组均阴性。结果表明使用密度梯度离心法可成功建立兔骨髓间充质干细胞的分离培养体系,骨髓间充质干细胞可定向诱导为成骨细胞。 展开更多
关键词 干细胞 骨髓干细胞 骨髓间充质干细胞 密度梯度离心法 分离培养 成骨诱导 骨组织工程 兔 国家自然科学基金 干细胞图片文章
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柚皮甙诱导兔骨髓间充质干细胞的成骨特征 被引量：9
11
作者 杨渊 李小峰 +1 位作者 罗道明 温超海 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第14期2603-2608,共6页
背景:骨碎补能在促进骨生长且取得了良好的临床疗效,其主要成分柚皮甙能否诱导骨髓间充质干细胞向成骨方向分化?目的:用柚皮甙诱导兔骨髓间充质干细胞向成骨方向分化。并观察柚皮甙诱导兔骨髓间充质干细胞向成骨方向分化的能力。方法:... 背景:骨碎补能在促进骨生长且取得了良好的临床疗效,其主要成分柚皮甙能否诱导骨髓间充质干细胞向成骨方向分化?目的:用柚皮甙诱导兔骨髓间充质干细胞向成骨方向分化。并观察柚皮甙诱导兔骨髓间充质干细胞向成骨方向分化的能力。方法:用贴壁筛选法对兔骨髓间充质干细胞进行分离培养。对生长良好的第3代骨髓间充质干细胞分别用50μg/L的柚皮甙和经典成骨诱导剂向成骨方向进行诱导,分别进行成骨鉴定。结果与结论:经典成骨诱导液、柚皮甙诱导液都能使骨髓间充质干细胞向成骨方向分化,基质分泌增多,形成钙结节。用酶联免疫检测仪检测柚皮甙诱导组和经典成骨诱导组细胞吸光度值未见明显的差异。同时检测柚皮甙诱导液和L-DMEN细胞培养液的吸光度值发现两者差异无显著性意义(P>0.05)。证实柚皮甙可成功诱导骨髓间充质干细胞向成骨方向分化,无明显毒性作用。 展开更多
关键词 干细胞 干细胞培养与分化 柚皮甙 骨髓间充质干细胞 成骨细胞 细胞分化 成骨诱导 细胞培养 碱性磷酸酶 Ⅰ型胶原 省级基金 干细胞图片文章
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骨髓间充质干细胞向软骨细胞的分化 被引量：9
12
作者 陈亮 何少茹 +6 位作者 庄建 郑曼利 孙云霞 梁穗新 刘玉梅 孙新 陈晓博 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第27期4951-4957,共7页
背景: 以骨髓间充质干细胞构建组织工程气管尚缺乏理想的特异性表面标志物,对其鉴定主要依赖细胞形态学、细胞表型及诱导分化的功能进行分析。目的: 体外分离培养、鉴定兔骨髓间充质干细胞,观察在特定条件下向气管软骨细胞分化的潜能。... 背景: 以骨髓间充质干细胞构建组织工程气管尚缺乏理想的特异性表面标志物,对其鉴定主要依赖细胞形态学、细胞表型及诱导分化的功能进行分析。目的: 体外分离培养、鉴定兔骨髓间充质干细胞,观察在特定条件下向气管软骨细胞分化的潜能。方法: 无菌环境取兔骨髓,经全骨髓贴壁筛选法分离培养细胞至第2代,流式细胞术鉴定第1、第2代细胞表面抗原CD44、CD45的表达。无菌环境取气管,经酶消化法分离培养气管软骨细胞,甲苯胺蓝染色鉴定软骨细胞蛋白聚糖的合成。在使用转化生长因子β1的基础上,将骨髓间充质干细胞与气管软骨细胞通过Transwell小室非接触式共培养,倒置显微镜观察细胞形态,甲苯胺蓝染色鉴定蛋白聚糖的合成,荧光实时定量PCR鉴定Ⅱ型胶原和蛋白聚糖mRNA的表达。结果与结论: 分离、培养的细胞呈长梭形、不规则形聚集生长,传代后细胞生长速度明显增快,呈鱼群状聚集生长。第1代有96.97%的细胞表达CD44、13.72%的细胞表达CD45,第2代有99.11%的细胞表达CD44、8.54%的细胞表达CD45。气管软骨细胞甲苯胺蓝染色阳性。在诱导后,骨髓间充质干细胞形态逐渐由长梭形变为三角形或不规则形,表达软骨细胞特异性Ⅱ型胶原和蛋白聚糖mRNA基因,甲苯胺蓝染色示阳性。结果表明全骨髓贴壁筛选法可成功分离培养骨髓间充质干细胞,第2代纯度较高,且在特定诱导条件下具有分化为气管软骨细胞的潜能。 展开更多
关键词 干细胞 骨髓干细胞 骨髓间充质干细胞 流式细胞术 气管软骨细胞 分离 培养 诱导分化 鉴定 部级基金 干细胞图片文章
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人脐带间充质干细胞诱导分化为心肌细胞的特异性基因表达 被引量：8
13
作者 唐欣 王岩 +1 位作者 易海波 庞天舒 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第27期4988-4991,共4页
背景: 脐带来源的间充质干细胞进行自体心肌内移植,修复损伤心肌组织,是心血管研究领域的热点。目的: 应用5-氮胞苷诱导人脐带间充质干细胞转化为心肌样细胞后进行鉴定,以确定心肌样细胞的结构、形态和功能。方法: 分离培养人脐带间充... 背景: 脐带来源的间充质干细胞进行自体心肌内移植,修复损伤心肌组织,是心血管研究领域的热点。目的: 应用5-氮胞苷诱导人脐带间充质干细胞转化为心肌样细胞后进行鉴定,以确定心肌样细胞的结构、形态和功能。方法: 分离培养人脐带间充质干细胞,在第2代细胞中分别加入浓度为2.5,5,10,20,40,80μmol/L的5-氮胞苷,作用24h后除去,继续培养4周。结果与结论: 5-氮胞苷诱导前,无细丝样结构、无颗粒,胞浆量均匀且少,核/浆比例高,细胞形态呈现典型的梭形,细胞呈漩祸样或同心圆生长,核内会见到较为明显的核仁;在5-氮胞苷处理24h之后,各组细胞都会出现部分死亡,失去典型的梭形形态,成为棍状或者柱状,40,80μmol/L组细胞形态变化明显。反转录-聚合酶反应检测2.5,40μmol/L组诱导4周,5,10,20μmol/L组诱导1,2,3,4周时人脐带间充质干细胞心钠素、α-骨骼肌动蛋白基因表达呈阳性。提示经5-氮胞苷诱导的人脐带间充质干细胞表达心肌细胞的特定基因。 展开更多
关键词 干细胞 脐带脐血干细胞 脐带间充质干细胞 干细胞培养与分化 心肌细胞 基因表达 5-氮胞苷 反转录-聚合酶链反应 干细胞图片文章
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甲钴胺体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化 被引量：8
14
作者 羊明智 彭立军 胡文凯 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第32期5741-5748,共8页
背景:目前骨髓间充质干细胞移植到脊髓损伤动物体内后对脊髓损伤的恢复效果非常有限。甲钴胺是治疗神经系统疾病及损伤的常见药物,其对骨髓间充质干细胞的影响尚不清楚。目的:探讨甲钴胺体外定向诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分... 背景:目前骨髓间充质干细胞移植到脊髓损伤动物体内后对脊髓损伤的恢复效果非常有限。甲钴胺是治疗神经系统疾病及损伤的常见药物,其对骨髓间充质干细胞的影响尚不清楚。目的:探讨甲钴胺体外定向诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的可行性,观察分化后的细胞增殖和生长情况。方法:取大鼠胫腓骨骨髓,采用密度梯度离心贴壁细胞培养法分离、培养骨髓间充质干细胞,取第四五代骨髓间充质干细胞,分别以25,50,100mg/L的甲钴胺进行诱导分化24,48和72h。倒置相差显微镜下连续观察细胞形态学变化,MTT法检测细胞活性,RT-PCR和Western blot法检测特异性标志物Nestin和NSE的表达。结果与结论:甲钴胺诱导骨髓间充质干细胞后大部分细胞变成神经元样细胞。与对照组比较,甲钴胺诱导后细胞活性无明显变化。不同剂量甲钴胺诱导48h后,Nestin和NSE在mRNA和蛋白水平表达均上调,其中100mg/L组表达上调最明显;100mg/L甲钴胺诱导24,48和72h后,Nestin和NSE在mRNA和蛋白水平表达均上调,其中72h表达上调最明显。说明甲钴胺可定向诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化,100mg/L为甲钴胺的较佳诱导浓度。 展开更多
关键词 干细胞 骨髓干细胞 骨髓间充质干细胞 神经元样细胞 甲钴胺 诱导 分化 神经巢蛋白 神经元特异性烯醇化酶 干细胞图片文章
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评价脐带间充质干细胞移植前细胞活性的指标 被引量：7
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作者 雷鑫 陈彦 +3 位作者 张建林 崔蕾 牛玉虎 牛勃 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第32期5847-5854,共8页
背景:脐带间充质干细胞已在临床多种疾病中展开研究,作为一种动态的活细胞,移植前的细胞活性将直接影响治疗效果,锥虫蓝染色虽然是目前评价细胞活性的常用指标,但由于其易受主观因素的影响,并不能准确反映细胞功能状态。目的:探寻可准... 背景:脐带间充质干细胞已在临床多种疾病中展开研究,作为一种动态的活细胞,移植前的细胞活性将直接影响治疗效果,锥虫蓝染色虽然是目前评价细胞活性的常用指标,但由于其易受主观因素的影响,并不能准确反映细胞功能状态。目的:探寻可准确反映脐带间充质干细胞功能状态的活性指标。方法:体外分离培养人脐带间充质干细胞,生理盐水4℃条件下保存0,2,4,6h,采用多种具有代表性的细胞活性测定方法(锥虫蓝染色法、Annexin V-PI、TUNEL、CCK-8、Live-Dead Assay、贴壁实验)检测保存后细胞存活率,进一步观察它们与反映细胞功能状态指标克隆形成率之间的关联程度。结果与结论:人脐带来源的间充质干细胞体外培养呈梭形贴壁生长,第3代细胞表面标记CD29、CD44与CD105表达呈现阳性,CD34与CD45表达呈现阴性,成脂及成骨诱导均表达阳性。锥虫蓝染色法得到的细胞活力与相应的克隆形成率相关性不大,而其他检测方法较锥虫蓝染色法而言相关性较好,其中以贴壁实验最为明显。证明了贴壁实验是目前反映细胞活性状态相对最为精确的指标。 展开更多
关键词 干细胞 脐带脐血干细胞 脐带间充质干细胞 细胞移植 体外 细胞保存 保存效果 细胞活性 细胞功能 克隆形成 干细胞图片文章
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土鳖虫含药血清干预骨髓间充质干细胞的成脂分化 被引量：7
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作者 齐振熙 李树强 于涛 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第14期2597-2602,共6页
背景:实验拟通过土鳖虫对激素诱导骨髓间充质干细胞向脂肪细胞分化的影响,解释中药土鳖虫治疗股骨头缺血性坏死的作用机制。目的:观察土鳖虫对地塞米松诱导骨髓间充质干细胞成脂分化的干预作用。方法:通过大剂量地塞米松诱导体外培养的... 背景:实验拟通过土鳖虫对激素诱导骨髓间充质干细胞向脂肪细胞分化的影响,解释中药土鳖虫治疗股骨头缺血性坏死的作用机制。目的:观察土鳖虫对地塞米松诱导骨髓间充质干细胞成脂分化的干预作用。方法:通过大剂量地塞米松诱导体外培养的骨髓间充质干细胞成脂分化,在诱导成脂的同时给予土鳖虫含药血清干预。检测干预6d后细胞内成脂标志物三酰甘油、氧化物酶增殖物激活受体mRNA和脂肪酸相关蛋白mRNA的表达。结果与结论:土鳖虫可抑制骨髓间充质干细胞分化过程中氧化物酶增殖物激活受体基因和脂肪酸相关蛋白基因的表达,降低三酰甘油水平,说明土鳖虫药物可以逆转因大量激素导致的骨髓间充质干细胞成脂分化增加。 展开更多
关键词 干细胞 干细胞与中医药 骨髓间充质干细胞 股骨头坏死 成脂分化 中药 含药血清 土鳖虫 地塞米松 激素 省级基金 干细胞图片文章
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骨髓间充质干细胞移植治疗矽肺小鼠肺炎及肺纤维化 被引量：7
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作者 潘雍 杨昆 刘永哲 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第6期1049-1055,共7页
背景：矽肺对职业人群健康的影响日益严峻，目前没有有效治疗的方法。目的：观察骨髓间充质干细胞移植对矽肺的治疗作用。方法：36只C57BL／6小鼠随机摸球法均分为3组。对照组小鼠气管内注入生理盐水；矽肺模型组和骨髓问充质干细胞移... 背景：矽肺对职业人群健康的影响日益严峻，目前没有有效治疗的方法。目的：观察骨髓间充质干细胞移植对矽肺的治疗作用。方法：36只C57BL／6小鼠随机摸球法均分为3组。对照组小鼠气管内注入生理盐水；矽肺模型组和骨髓问充质干细胞移植组小鼠气管内注入二氧化硅混悬液建立矽肺模型；骨髓间充质干细胞移植组于造模后6h尾静脉输注骨髓间充质干细胞。结果与结论：肺组织羟脯氨酸的含量矽肺模型组和骨髓间充质干细胞移植组高于对照组，差异均有显著性意义（P〈0．01）；骨髓间充质干细胞移植组含量明显低于矽肺模型组，差异有显著性意义（P〈0．01）。矽肺模型组和骨髓间充质干细胞移植组小鼠的肺系数均高于对照组（P〈0．01），其中骨髓间充质干细胞移植组低于矽肺模型组，差异有显著性意义（P〈0．01）。白细胞介素1β的表达矽肺模型组和骨髓问充质干细胞移植组高于对照组（P〈0．01）；骨髓间充质干细胞移植组低于矽肺模型组，差异均有显著性意义（P〈0．01）。转化生长因子β1在肺组织中的表达同样为矽肺模型组（P〈0．01）和骨髓间充质干细胞移植组（P〈0．05）高于对照组；骨髓间充质干细胞移植组低于矽肺模型组，差异有显著性意义（P〈0．01）。说明骨髓间充质干细胞移植可以减轻肺部炎症反应和纤维化程度。 展开更多
关键词 干细胞 干细胞移植 骨髓间充质干细胞 移植 矽肺 肺炎 肺纤维化 小鼠 绿色荧光蛋白 二氧化硅 白细胞介素 转化生长因子 羟脯氨酸 其他基金 干细胞图片文章
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改良酶消化法分离培养人乳牙牙髓干细胞 被引量：7
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作者 别利克孜.卡德尔 刘奕杉 +4 位作者 王璇 李伯琦 马艳 毕晓娟 努斯来提.哈里克 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第10期1793-1800,共8页
背景:乳牙牙髓干细胞具有极强的增殖活力,可以在短期内获得组织工程需要的细胞量。目的:比较传统酶消化法和改良酶消化法获取人乳牙牙髓干细胞的成功率及生物学特性。方法:取无龋滞留乳切牙12颗,随机数字表法均分为两组,分别应用传统酶... 背景:乳牙牙髓干细胞具有极强的增殖活力,可以在短期内获得组织工程需要的细胞量。目的:比较传统酶消化法和改良酶消化法获取人乳牙牙髓干细胞的成功率及生物学特性。方法:取无龋滞留乳切牙12颗,随机数字表法均分为两组,分别应用传统酶消化法和改良酶消化法分离获取乳牙牙髓细胞,在不同代次细胞中检测细胞扩增天数、收获量、生长曲线、倍增时间、克隆形成率、细胞表面特异标记物STRO-1、CD146、CD34和CD45的表达。细胞成骨、成脂诱导分化能力及通过检测碱性磷酸酶和牙本质涎蛋白表达水平,判定细胞牙向分化潜能。结果与结论:两组细胞生长曲线,扩增天数、细胞收获量及细胞倍增时间相比,差异有显著性意义(P<0.05);牙向分化实验结果显示,改良酶消化法碱性磷酸酶和牙本质涎蛋白较传统酶消化法和对照组而言呈强阳性表达。然而,两组在克隆形成率、细胞表面特异标记物及多项诱导分化等方面差异无显著性意义(P>0.05)。说明改良酶消化法与传统酶消法相比,可在较短时间内完成同源乳牙牙髓干细胞体外扩增培养,可为牙齿再生治疗提供高质量种子细胞,是乳牙牙髓干细胞体外培养的可靠方法。 展开更多
关键词 干细胞 干细胞培养与分化 乳牙牙髓细胞 改良酶消化法 牙本质涎蛋白 体外培养 细胞鉴定 牙向分化 省级基金 干细胞图片文章
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体外诱导骨髓间充质干细胞向胆管上皮样细胞分化 被引量：7
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作者 张诚 杨玉龙 +3 位作者 林美举 史力军 张洪威 李婧伊 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第1期17-22,共6页
背景:肝外胆管和胆囊上皮细胞的分离、纯化相对比较容易,但是胆管上皮细胞在体外易失去增殖能力,难以提供基础研究所需的细胞量,限制了胆管修复等基础研究的进程。虽然骨髓间充质干细胞可以转化为肝细胞,但是尚无体外培养骨髓间充质干... 背景:肝外胆管和胆囊上皮细胞的分离、纯化相对比较容易,但是胆管上皮细胞在体外易失去增殖能力,难以提供基础研究所需的细胞量,限制了胆管修复等基础研究的进程。虽然骨髓间充质干细胞可以转化为肝细胞,但是尚无体外培养骨髓间充质干细胞分化为胆管上皮细胞的报道。目的:探讨体外诱导骨髓间充质干细胞分化为胆管上皮细胞的可行性。方法:采取全骨髓贴壁筛选法体外分离并纯化大鼠骨髓间充质干细胞后,在第3代骨髓间充质干细胞培养基中加入肝细胞生长因子和表皮生长因子,倒置显微镜下观察骨髓间充质干细胞的形态学变化,免疫荧光检测不同时间CK19的表达情况。结果与结论:在肝细胞生长因子和表皮生长因子的诱导下,骨髓间充质干细胞由梭形逐渐变为多边形、三角形;免疫荧光检查显示诱导第4周细胞膜开始表达CK19,诱导第6周CK19表达率明显提高。结果表明在两种细胞因子联合诱导下骨髓间充质干细胞能够转化为胆管上皮样细胞,从而为骨髓间充质干细胞修复损伤胆管提供了一个新思路。 展开更多
关键词 干细胞 骨髓干细胞 骨髓间充质干细胞 肝细胞生长因子 表皮生长因子 胆管上皮细胞 CK19 干细胞图片文章
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RhoA基因沉默联合脐带间充质干细胞移植脑损伤大鼠功能的恢复 被引量：7
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作者 冯士军 韩建国 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第1期23-30,共8页
背景:研究认为Rho激酶可致使神经生长锥塌陷,对神经修复具有抑制作用。目的:脐带间充质干细胞移植同时联合RNAi介导的RhoA基因沉默,观察两者对脑损伤大鼠恢复的影响。方法:健康Wistar大鼠84只,采用液压颅脑损伤仪,给予253.3125-303.975... 背景:研究认为Rho激酶可致使神经生长锥塌陷,对神经修复具有抑制作用。目的:脐带间充质干细胞移植同时联合RNAi介导的RhoA基因沉默,观察两者对脑损伤大鼠恢复的影响。方法:健康Wistar大鼠84只,采用液压颅脑损伤仪,给予253.3125-303.975kPa液压冲击力,制成重型液压颅脑损伤模型,随机分成为对照组,脐带间充质干细胞移植组,联合组(脐带间充质干细胞移植联合RhoA基因沉默)。CM-Dil标记的脐带间充质干细胞移植后采用改良神经功能损伤评分系统(mNSS)评价大鼠神经功能恢复情况,在创伤性脑损伤后21-28d进行Morris水迷宫试验。4周后处死并行全脑冷冻切片苏木精-伊红染色及荧光显微镜观察CM-Dil标记的脐带间充质干细胞的存活和分布情况,采用RT-PCR检测各组损伤区脑组织RhoA基因的表达量。结果与结论:移植后1,2,3,4周,大鼠神经学缺损评分脐带间充质干细胞移植组低于对照组(P<0.05),联合组明显低于对照组(P<0.01)。Morris水迷宫试验各组平均逃避潜伏期均逐渐缩短,联合组3-5d时平均潜伏时间较脐带间充质干细胞移植组缩短(P<0.05),较对照组明显缩短(P<0.01);联合组穿越平台次数及在目标象限游泳距离与总距离百分比均高于对照组和脐带间充质干细胞移植组(P<0.05)。移植4周后,脑组织冰冻切片和苏木精-伊红染色切片中的神经元数量和CM-Dil阳性细胞数联合组多于脐带间充质干细胞移植组,脐带间充质干细胞移植组多于对照组(P<0.05);联合组RhoAmRNA表达水平较对照组和脐带间充质干细胞移植组显著降低(P<0.05)。提示脐带间充质干细胞移植可明显改善重型颅脑损伤后大鼠的神经学功能,联合应用RhoA基因沉默有协同效果。 展开更多
关键词 干细胞 脐带脐血干细胞 RHOA 基因沉默 脐带间充质干细胞 间充质干细胞 移植 脑损伤 Morris水迷宫试验 神经功能 CM-Dil标记 干细胞图片文章
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