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一种新颖简便的荧光实时RT-PCR相对定量方法的建立 被引量：129
1
作者 张驰宇 徐顺高 黄新祥 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第9期883-888,共6页
为建立一种新颖、简便的荧光实时RT-PCR相对定量方法,根据实时定量标准曲线,推导出相对定量基因表达的公式.公式显示相对表达指数只与CT值和标准曲线的斜率相关.构建标准曲线的标准品需要通过克隆和体外转录获得,实验过程繁琐.当人为成... 为建立一种新颖、简便的荧光实时RT-PCR相对定量方法,根据实时定量标准曲线,推导出相对定量基因表达的公式.公式显示相对表达指数只与CT值和标准曲线的斜率相关.构建标准曲线的标准品需要通过克隆和体外转录获得,实验过程繁琐.当人为成比例增减标准品各个稀释度的具体拷贝数时,标准曲线的斜率并不改变,说明标准曲线斜率与标准品的具体拷贝数无关.因此,新的相对定量方法可以用任何一个待测样品的总RNA(或cDNA),经系列稀释后作为标准品,来构建相对定量标准曲线,获得斜率.与绝对定量法比较,新方法获得了基本相同的斜率和非常一致的定量结果(差异小于4%),而传统的2-#$CT法却表现出较大的定量误差.这些结果表明,新的相对定量方法是一种简便、准确和高效的定量基因表达的方法. 展开更多
关键词 荧光实时定量RT-PCR 相对定量 绝对定量 标准曲线 mRNA定量 斜率
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绵羊肺腺瘤病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量：3
2
作者 王金良 于新友 +2 位作者 沈志强 孙翠平 唐娜 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1657-1661,1678,共6页
根据GenBank登录的绵羊肺腺瘤病毒gag基因序列设计1对特异性引物,经RT-PCR扩增出了276bp的片段。产物经回收与pMD18-T Vector连接后转化到基因工程菌DH5a中,提取重组质粒,经PCR及测序鉴定后,作为阳性模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标... 根据GenBank登录的绵羊肺腺瘤病毒gag基因序列设计1对特异性引物,经RT-PCR扩增出了276bp的片段。产物经回收与pMD18-T Vector连接后转化到基因工程菌DH5a中,提取重组质粒,经PCR及测序鉴定后,作为阳性模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线,并做敏感性试验、特异性试验、重复性试验和临床检测应用。结果表明,标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,产物Tm在82～82.5℃之间,灵敏度为2.22个拷贝/μL,特异性和重复性较好,较常规RT-PCR方法提前1h出检测结果。本试验建立了检测JSRV的SYBRGreenⅠ荧光定量PCR方法,为该病的早期快速诊断,并定量分析JSRV感染程度奠定了基础。 展开更多
关键词 绵羊肺腺瘤病毒 SYBR Green I 实时荧光定量PCR 标准曲线
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X射线荧光光谱法用于催化剂中贵金属含量分析
3
作者 吴丽威 赵飒 王长发 《工业催化》 CAS 2013年第10期63-65,共3页
通过对X射线荧光光谱法测定催化剂中贵金属含量的研究,模拟样品组分含量和制备条件自制一系列标样,绘制工作曲线。对催化剂中Pt和Pd含量进行测定,结果与国标法分析值相符,精密度良好。
关键词 催化剂工程 X射线荧光光谱法 PT催化剂 PD催化剂 工作曲线
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基于FID的机动车尾气THC测量模块设计与对比实验 被引量：4
4
作者 尤坤 张玉钧 +7 位作者 刘国华 陈晨 高彦伟 何莹 张恺 贺春贵 鲁一冰 刘文清 《大气与环境光学学报》 CAS CSCD 2017年第1期43-49,共7页
机动车排放的总碳氢化合物(total hydrocarbons,THC)是造成雾霾、光化学烟雾的重要原因之一,在城市大气污染的调查和影响人类健康的研究中,THC是必须的监测目标之一。着重开展了基于氢火焰离子化检测(hydrogen flame ionization detecto... 机动车排放的总碳氢化合物(total hydrocarbons,THC)是造成雾霾、光化学烟雾的重要原因之一,在城市大气污染的调查和影响人类健康的研究中,THC是必须的监测目标之一。着重开展了基于氢火焰离子化检测(hydrogen flame ionization detector,FID)的机动车尾气THC测量系统的设计和对比实验。主要介绍了FID测量THC的工作原理,根据FID的测量原理设计了机动车尾气THC测量模块。并根据离子化信号检测需求设计了微电流放大电路,满足大范围、高精度微电流信号检测的要求,获得了检测器对THC的响应峰信号。还对测量得到的THC色谱峰信号进行定性和定量的分析,通过标准曲线法计算了THC的浓度。最后结合美国的SENSORS-FIDTHC分析仪开展了对比实验,结果表明研发的THC测量模块检测的浓度偏高,测量偏差约为4.44%~8.43%,判断此系统误差主要因为O_2峰干扰。 展开更多
关键词 氢火焰离子化检测 总碳氢化合物 微电流放大电路 标准曲线法
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HCl标准曲线与倍标曲线一致性验证
5
作者 穆梅兰 陈黎军 范剑 《干旱环境监测》 1996年第2期105-107,共3页
经实验分析了ＨＣｌ标准曲线与信标曲线的一致性。从理论上论证了ＨＣｌ倍标曲线是标准曲线的重合延伸线，为ＨＣｌ的实际监测工作提供可靠方法。
关键词 标准曲线 倍标曲线 环境监测
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