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新型悬浮细胞连续培养法分离小鼠Lewis肺癌干细胞及鉴定 被引量：2
1
作者 刘永利 孔亮盛 +2 位作者 孙志卫 王健宇 邢若曦 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2017年第1期35-43,共9页
该文主要探索从小鼠Lewis肺癌亲代细胞系(Lewis lung carcinoma parental cell line,LLC-Parental)中分离能够在体外长期培养的肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)的方法。在体外贴壁条件下培养LLC-Parental细胞,通过连续富集悬浮生长... 该文主要探索从小鼠Lewis肺癌亲代细胞系(Lewis lung carcinoma parental cell line,LLC-Parental)中分离能够在体外长期培养的肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)的方法。在体外贴壁条件下培养LLC-Parental细胞,通过连续富集悬浮生长的细胞,经过8代后,成功富集出可悬浮成球的小鼠Lewis肺癌干细胞样细胞株(LLC-spheroid enrichment,LLC-SE)。为了验证其干细胞特性,我们使用荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测表示干细胞特性的基因Bmi1(B-cell-specifi c moloney murine leukemia virus insertion site 1)、Cd133(cluster of differentiation-133)、Aldh1a1(aldehyde dehydrogenase family 1,subfamily A1)、Oct4(octamer-binding transcription factor 4)、Sox2(sexdetermining region Y box 2)、Nanog和Klf4(Kruppel-like factor 4)的表达。6孔板琼脂成球实验检测其增殖和悬浮成球能力。96孔板单细胞克隆形成实验检测单个细胞的克隆形成能力。裸鼠皮下移植这一干细胞特性检测的经典模型检测其体内致瘤能力以及C57同源小鼠左肺原位种植模型检测其肿瘤转移能力。Real-time PCR结果显示,LLC-SE细胞中Bmi1的表达水平显著高于LLC-Parental细胞。6孔板琼脂成球实验、96孔板单细胞克隆形成实验表明,LLC-SE细胞的悬浮成球能力和单细胞克隆能力显著高于LLC-Parental细胞。动物实验表明,LLC-SE细胞的体内致瘤能力、肿瘤转移能力强于LLC-Parental细胞。该文首次运用连续8次悬浮聚球法分离获得大量的可稳定传代的具有干细胞特性的LLC-SE细胞,为建立肿瘤干细胞细胞模型提供了新的方法,为进一步研究肿瘤干细胞的生物学特性奠定了基础。 展开更多
关键词 小鼠肺癌干细胞 悬浮聚球 BMI1
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Sec23a基因对人乳腺癌类肿瘤干细胞的干性抑制作用研究
2
作者 周仕霞 孙志卫 +1 位作者 王健宇 邢若曦 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2018年第5期648-657,共10页
该文使用新型悬浮细胞连续培养法从人乳腺癌细胞MDA-MB-435中分离出类肿瘤干细胞株(MDA-435-spheroid enrichment,MDA-435-SE),并通过流式细胞术检测细胞表面标志物以及裸鼠皮下成瘤实验,对MDA-435-SE细胞的类肿瘤干细胞特性进行了验证... 该文使用新型悬浮细胞连续培养法从人乳腺癌细胞MDA-MB-435中分离出类肿瘤干细胞株(MDA-435-spheroid enrichment,MDA-435-SE),并通过流式细胞术检测细胞表面标志物以及裸鼠皮下成瘤实验,对MDA-435-SE细胞的类肿瘤干细胞特性进行了验证。然后对MDA-435-SE细胞进行慢病毒感染,建立了稳定敲低Sec23a基因表达的细胞株MDA-435-SE-sh Sec23a和阴性对照细胞株MDA-435-SE-LV3NC,通过Cell Counting Kit-8增殖实验、96孔板单克隆成球实验和裸鼠皮下成瘤实验探索Sec23a基因对乳腺癌类肿瘤干细胞MDA-435-SE的干性调控作用。在乳腺癌类肿瘤干细胞MDA-435-SE中敲低Sec23a基因后,细胞的增殖曲线和倍增时间并没有明显改变,但细胞的体外成球直径和单细胞克隆效率均显著增强。动物实验表明,Sec23a基因的敲低可以显著提高乳腺癌类肿瘤干细胞MDA-435-SE的体内成瘤能力。该研究使用新型悬浮细胞连续培养的方法获得来源于人乳腺癌的类肿瘤干细胞株,并使用体内和体外干性相关实验验证了敲低Sec23a基因后,可以显著提高乳腺癌类肿瘤干细胞MDA-435-SE的干性,对肿瘤干细胞的研究具有重要的参考意义。 展开更多
关键词 人乳腺癌类肿瘤干细胞 悬浮聚球 Sec23a
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