Spag6调控运动纤毛结构功能缓解大鼠缺血性脑水肿损伤

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作者 黄瑞松 胡一鸣 +3 位作者 张配 张春艳 张玲 曹晓璐 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期295-301,307,共8页

目的 研究精子相关抗原6(sperm-associated antigen 6,Spag6)对缺血性脑水肿介导的突触损伤的影响。方法 将90只SD大鼠随机分为3组:假手术组、模型组和Spag6组。利用慢病毒感染上调大鼠脑内Spag6蛋白表达后,用大脑中动脉栓塞法构建缺血... 目的 研究精子相关抗原6(sperm-associated antigen 6,Spag6)对缺血性脑水肿介导的突触损伤的影响。方法 将90只SD大鼠随机分为3组:假手术组、模型组和Spag6组。利用慢病毒感染上调大鼠脑内Spag6蛋白表达后,用大脑中动脉栓塞法构建缺血性脑水肿模型。利用Longa评分进行神经功能评价;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色评估脑梗死体积;苏木精-伊红(HE)染色法、扫描电镜观察运动纤毛结构活性;透射电镜观察神经细胞超微结构;Western blot检测Bcl-2、Bax、Survivin、GluN1、GluN2B和GluA2蛋白表达水平。结果 模型组大鼠大脑不同区域神经细胞和组织损伤,Spag6表达异常变化,突触结构功能改变;第三脑室运动纤毛活性紊乱,发生缺血性脑水肿现象。上调Spag6表达后,脑水肿现象缓解,运动纤毛活性恢复;缺血区脑梗死、神经细胞损伤及突触结构异常改变被逆转;Bcl-2、Survivin、GluN1、GluN2B、GluA2的蛋白表达显著升高(P<0.01或P<0.05),Bax表达量均降低(P<0.01)。结论 Spag6通过恢复脑室运动纤毛的活性状态,增强突触的功能,进而减轻缺血性脑水肿介导的神经损伤。 展开更多

关键词 Spag6 脑缺血再灌注损伤 脑水肿 运动纤毛 突触

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溶质载体家族22成员14和精子相关抗原6在特发性弱精子症患者精子中的表达 被引量：5

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作者 侯方圆 李玉山 +5 位作者 杨夕阳 王全先 刘军杰 王琳凯 苏彦华 孙琳 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期703-707,共5页

目的:探讨溶质载体家族22成员14(SLC22A14)和精子相关抗原6(SPAG6),在特发性弱精子症患者精子中的表达情况。方法:收集精子库合格捐精者(正常对照组)和特发性弱精子症患者(弱精子症组)各50例精子样本,采用非连续密度梯度离心纯化精子,... 目的:探讨溶质载体家族22成员14(SLC22A14)和精子相关抗原6(SPAG6),在特发性弱精子症患者精子中的表达情况。方法:收集精子库合格捐精者(正常对照组)和特发性弱精子症患者(弱精子症组)各50例精子样本,采用非连续密度梯度离心纯化精子,分别用RT-PCR和Western印迹检测SLC22A14、SPAG6 mRNA及蛋白的表达。结果:RT-PCR检测结果显示,弱精子症组的SLC22A14、SPAG6 mRNA表达均显著低于正常对照组(SLC22A14:0.53±0.10 vs 0.77±0.08,t=12.834,P<0.01;SPAG6:0.52±0.10 vs 0.77±0.06,t=13.755,P<0.01),Western印迹检测结果显示,弱精子症组的SLC22A14和SPAG6蛋白表达量同样均显著低于正常对照组,分别为(SLC22A14:0.55±0.10 vs 0.80±0.09,t=12.884,P<0.01;SPAG6:0.56±0.09 vs 0.78±0.09,t=12.257,P<0.01)。结论:在特发性弱精子症患者中SLC22A14和SPAG6表达降低可能是导致弱精子症的重要原因之一。 展开更多

关键词 溶质载体家族22成员14 精子相关抗原6 特发性弱精子症 精子 逆转录-聚合酶链反应 蛋白印迹

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精子相关抗原6与速激肽1相互作用关系的探讨 被引量：3

3

作者 闵洁 李梦颖 +4 位作者 柳赟昊 刘晙玭 双超凡 张玲 张志兵 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1059-1064,共6页

目的:构建速激肽1(Tac1)基因真核表达载体并探讨其与精子相关抗原6(SPAG6)之间的相互作用。方法:提取10只昆明雄性小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、睾丸8个组织的RNA,逆转录成c DNA后,用RT-PCR法观察Tac1在各组织中的表达。构建Tac... 目的:构建速激肽1(Tac1)基因真核表达载体并探讨其与精子相关抗原6(SPAG6)之间的相互作用。方法:提取10只昆明雄性小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、睾丸8个组织的RNA,逆转录成c DNA后,用RT-PCR法观察Tac1在各组织中的表达。构建Tac1/p GADT7、Tac1/p EGFP-N2重组质粒,将Tac1/p EGFP-N2转染至CHO和COS-1细胞,采用免疫荧光染色及Western印迹检测TAC1在细胞中的定位和蛋白表达。将Tac1/p GADT7与Spag6/p GBKT7进行酵母双杂交实验,提取酵母蛋白用Western印迹检测TAC1与SPAG6之间是否存在相互作用。结果:Tac1主要在睾丸、脑、心脏中表达。酶切和测序鉴定表明Tac1重组质粒构建成功,酶切鉴定片段390 bp。TAC1单独转染时,定位于CHO细胞的整个胞体,与SPAG6质粒共转染后,TAC1被募集至细胞微管中表达,用Western印迹检测到相对分子质量约为40 000的融合蛋白表达。与SPAG6的酵母双杂交实验显示TACl/SPAG6在缺少3种氨基酸(Leu、Trp、His)的培养板上有菌落生成,经Western印迹证实酵母融合蛋白中含有TAC1和SPAG6。结论:成功构建Tac1重组质粒,并利用该质粒证实了TAC1与SPAG6之间存在相互作用关系。 展开更多

关键词 速激肽1 精子相关抗原6 细胞定位 酵母双杂交 雄性小鼠

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SPAG6的功能及其在肿瘤中作用的研究进展

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作者 牟佼(综述) 罗洁(综述) +1 位作者 袁鹏(审校) 刘林(审校) 《临床与病理杂志》 CAS 2022年第1期196-202,共7页

精子相关抗原6(sperm-associated antigen 6,SPAG6)是通过睾丸表达文库筛选出的一种新的人类精子抗原。SPAG6属于癌/睾丸抗原(cancer/testis antigen,CTA)家族的一员,CTA家族具有特异性组织分布和表达,其家族成员是极具潜力的肿瘤标志... 精子相关抗原6(sperm-associated antigen 6,SPAG6)是通过睾丸表达文库筛选出的一种新的人类精子抗原。SPAG6属于癌/睾丸抗原(cancer/testis antigen,CTA)家族的一员,CTA家族具有特异性组织分布和表达,其家族成员是极具潜力的肿瘤标志物和治疗靶标。目前研究表明SPAG6在部分肿瘤尤其是血液系统肿瘤中表达异常。SPAG6被证实参与调控部分实体肿瘤和血液肿瘤的发生和进展,可能是诊断血液系统肿瘤的有效生物标志物。 展开更多

关键词 精子相关抗原6 功能 肿瘤 标志物

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精子相关抗原6基因以非P53依赖方式促进TRAIL诱导的骨髓增生异常综合征细胞凋亡 被引量：1

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作者 朱春霞 王利 +1 位作者 罗小华 刘林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期198-204,共7页

目的研究精子相关抗原6(sperm-associated antigen 6,SPAG6)基因是否以P53依赖方式促进TRAIL诱导的骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)细胞凋亡。方法通过P53kd RNA慢病毒转染人结肠癌细胞株HCT116筛选P53基因沉默的最... 目的研究精子相关抗原6(sperm-associated antigen 6,SPAG6)基因是否以P53依赖方式促进TRAIL诱导的骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)细胞凋亡。方法通过P53kd RNA慢病毒转染人结肠癌细胞株HCT116筛选P53基因沉默的最佳靶点,利用筛选出来的最佳靶点序列转染SKM-1细胞;加入嘌呤霉素提高转染效率,RT-PCR及Western blot检验P53基因的干扰效果,构建SKM-1 P53kd细胞模型。用SPAG6kdRNA慢病毒载体转染SKM-1和SKM-1 P53kd细胞,RT-PCR及Western blot验证。用CCK-8法检测重组人可溶性TRAIL蛋白(r TRAIL)对SKM-1细胞的适宜作用浓度。Western blot检测r TRAIL处理后SKM-1和SKM-1 P53kd细胞株中Caspase-8、cleaved-PARP、PARP的表达水平。结果构建了SKM-1 P53kd细胞模型,转染率在90%以上,P53基因在mRNA和蛋白表达水平较对照组均显著降低(P<0.01)。SPAG6kdRNA慢病毒载体成功感染SKM-1细胞和SKM-1 P53kd细胞,转染率均在80%以上,SPAG6基因表达较对照组明显降低(P<0.01)。随着r TRAIL浓度的增加,细胞生长逐渐被抑制,30 ng/m L TRAIL诱导的细胞凋亡与对照组差异没有统计学意义,100 ng/m L和300 ng/m L TRAIL显著诱导SPAG6kd细胞凋亡(P<0.05),而P53基因沉默与否并没有影响该结果,r TRAIL处理后细胞凋亡标志分子明显激活或水平升高,细胞中Caspase-8、cleaved-PARP、PARP的表达水平在SKM-1和SKM-1 P53kd细胞中差异无统计学意义(P>0.05)。结论 SPAG6基因以非P53依赖方式促进TRAIL诱导的MDS细胞凋亡。 展开更多

关键词 精子相关抗原6基因 P53基因 TRAIL RNA干扰 骨髓增殖异常综合征

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续断种子方对少精子症大鼠睾丸SPAG6表达的影响

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作者 陈六 郑翼驰 +1 位作者 陈露 王权胜 《现代中西医结合杂志》 CAS 2022年第11期1466-1471,1496,共7页

目的研究续断种子方对少精子症模型大鼠睾丸精子相关抗原6(SPAG6)表达的影响,探讨续断种子方对睾丸的生精作用。方法取45只SD雄性大鼠,随机选择11只作为空白组,其余大鼠用环磷酰胺腹腔注射制备少精子症模型。将造模成功大鼠随机分为模... 目的研究续断种子方对少精子症模型大鼠睾丸精子相关抗原6(SPAG6)表达的影响,探讨续断种子方对睾丸的生精作用。方法取45只SD雄性大鼠,随机选择11只作为空白组,其余大鼠用环磷酰胺腹腔注射制备少精子症模型。将造模成功大鼠随机分为模型组、续断种子方组、左卡尼汀组,每组10只。续断种子方组予以续断种子方颗粒溶液10 g/kg灌胃,左卡尼汀组予以左卡尼汀溶液100 mg/kg灌胃,空白组与模型组均予等量生理盐水灌胃。连续灌胃8周后,取各组大鼠附睾,检测精液质量;取部分睾丸组织,HE染色观察病理变化,采用免疫组化和Western blot法检测SPAG6蛋白表达情况,采用荧光定量PCR法检测SPAG6 mRNA表达情况。结果模型组精子浓度及活力均明显低于空白组(P均<0.05),续断种子方组、左卡尼汀组均明显高于模型组(P均<0.05),续断种子方组均明显高于左卡尼汀组(P均<0.05)。HE染色显示,模型组生精上皮严重变形,厚度变薄;生精小管杂乱干瘪,且数量减少,腔内仅见少量成型精子细胞;续断种子方组和左卡尼汀组较模型组明显改善,且续断种子方组与左卡尼汀组比较生精上皮更加规则有序,生精小管相对密集,精子细胞及间质细胞更加丰富。免疫组化染色显示,续断种子方组与左卡尼汀组睾丸组织中SPAG6蛋白表达少于空白组,但均明显多于模型组。模型组睾丸组织中SPAG6蛋白及mRNA表达量均明显低于空白组(P均<0.05);续断种子方组、左卡尼汀组睾丸组织中SPAG6蛋白及mRNA表达量均明显高于模型组(P均<0.05),且续断种子方组SPAG6蛋白表达量明显高于左卡尼汀组(P<0.05),2组SPAG6 mRNA表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论续断种子方能明显改善精子浓度及活力,其可能是通过调控SPAG6表达从而有利于精子的发生发育。 展开更多

关键词 续断种子方 左卡尼汀 少精子症 精子相关抗原6 睾丸

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SPAG6/SPINK2蛋白复合物在小鼠精子顶体形成中的作用初探

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作者 张宏伟 张玲 +4 位作者 陈雅梦 申鑫 王恒琦 柳赟昊 张志兵 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期202-208,共7页

目的:初步探讨精子相关抗原6(SPAG6)在小鼠精子发生过程中顶体形成阶段的表达及其调控作用。方法:采用Western印迹检测出生后小鼠睾丸发育不同阶段(第8、12、16、20、24、28、30、35天)中SPAG6的表达;免疫荧光观察SPAG6在生精细胞中的定... 目的:初步探讨精子相关抗原6(SPAG6)在小鼠精子发生过程中顶体形成阶段的表达及其调控作用。方法:采用Western印迹检测出生后小鼠睾丸发育不同阶段(第8、12、16、20、24、28、30、35天)中SPAG6的表达;免疫荧光观察SPAG6在生精细胞中的定位;分别构建SPAG6和SPINK2蛋白表达质粒,以AH109和CHO细胞为对象,采用酵母双杂交及细胞内共定位实验检测SPAG6与SPINK2蛋白间相互作用;免疫荧光检测SPINK2在SPAG6基因敲除(KO)小鼠的睾丸生精细胞中的表达与定位。结果:小鼠出生后第16～28天,SPAG6表达显著升高,且定位于圆形精子细胞的顶体;酵母双杂交实验显示SPAG6/SPINK2组能在选择性培养基(SD/-Leu/-Trp/-His)中生长;CHO细胞共转染SPAG6和SPINK2表达质粒时,SPAG6与SPINK2共定位在细胞核周围;SPAG6 KO小鼠睾丸生精细胞中未检测到SPINK2表达及定位于精子顶体。结论:SPAG6与SPINK2形成蛋白复合体,并可能通过调控SPINK2的稳定表达参与精子顶体形成。 展开更多

关键词 精子相关抗原6 丝氨酸蛋白酶抑制剂2 小鼠 精子顶体 雄性不育

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ARM结构的缺失对SPAG6在哺乳细胞中定位的影响

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作者 汪智琼 张玲 +2 位作者 石玉琴 李红飞 张志兵 《中国男科学杂志》 CAS CSCD 2015年第1期3-8,共6页

目的：本研究构建精子相关抗原6（SPAG6）基因全长及6个不同长短ARM序列的真核表达载体pEGFP-N2-SPAG6-△ARM，并使其在CHO细胞中表达，观察全长及6个ARM结构缺失后对真核细胞CHO细胞中SPAG6蛋白定位的影响。方法利用NCBI数据库，寻找小... 目的：本研究构建精子相关抗原6（SPAG6）基因全长及6个不同长短ARM序列的真核表达载体pEGFP-N2-SPAG6-△ARM，并使其在CHO细胞中表达，观察全长及6个ARM结构缺失后对真核细胞CHO细胞中SPAG6蛋白定位的影响。方法利用NCBI数据库，寻找小鼠SPAG6蛋白的保守功能区，分析全长蛋白序列，检索出SPAG6有7个ARM区域。利用PCR技术扩增出6个缺失不同ARM结构的SPAG6 cDNA，测序后亚克隆至携带绿色荧光蛋白基因的pEGFP-N2真核表达载体中，对阳性克隆进行酶切和测序鉴定，将构建的重组质粒转染到CHO细胞中，分别提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察7个不同SPAG6/GFP融合蛋白在CHO细胞内的定位。结果酶切和测序鉴定表明，全长及6个缺失不同长短ARM结构的真核表达质粒构建成功，转染实验发现重组质粒均能够在CHO细胞中表达，但仅全长表达产物定位于微管，缺失任何一个ARM区域都可影响在细胞中的微管定位。结论SPAG6在哺乳动物细胞内的正确定位依赖于全长。该研究为进一步研究SPAG6蛋白的结构与功能奠定基础。 展开更多

关键词 精子相关抗原6基因 ARM结构域 不育 男性

原文传递

精子相关抗原6在肝癌组织中的表达及意义

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作者 谷君明 曹毅 魏鹏 《临床肝胆病杂志》 CAS 2017年第10期1955-1960,共6页

目的检测精子相关抗原6（Spag6）在肝癌组织中的表达情况及其与肝癌患者临床病理特征和预后的关系,探讨Spag6对肝癌细胞HCCLM3增殖和迁移的影响。方法选取2006年8月-2009年11月来自中南大学湘雅医院的102例肝癌患者组织样本进行研究,应... 目的检测精子相关抗原6（Spag6）在肝癌组织中的表达情况及其与肝癌患者临床病理特征和预后的关系,探讨Spag6对肝癌细胞HCCLM3增殖和迁移的影响。方法选取2006年8月-2009年11月来自中南大学湘雅医院的102例肝癌患者组织样本进行研究,应用Western Blot检测肝癌细胞系、正常肝组织、肿瘤组织及对应的癌旁组织中Spag6表达水平。利用免疫组化法检测102例肝癌组织中Spag6的表达,并根据肿瘤组织免疫组化评分标准分成Spag6高表达组和低表达组。用慢病毒介导的RNAi干扰技术沉默Spag6基因在HCCLM3细胞中的表达,Western Blot检测沉默效果;利用细胞划痕愈合实验检测沉默Spag6基因后对HCCLM3细胞迁移的影响,集落形成实验观察对细胞增殖的影响。采用χ2检验分析Spag6表达水平与肝癌患者临床病理特征的关系;利用Kaplan-Meier生存分析、log-rank检验分析Spag6表达水平与肝癌患者预后的关系。结果 Spag6在肝癌细胞系和肝癌组织中表达高于正常LO2细胞以及正常肝组织。免疫组化结果显示102例标本中肝癌组织的Spag6的表达率为58.8%（60/102）,癌旁组织中Spag6的表达率为12.7%（13/102）,差异有统计学意义（χ2=47.123,P〈0.001）。Spag6的表达水平与肿瘤结节数目、有无包膜、血管侵犯、Edmondson-Steiner分级有关（χ2值分别为8.360、6.761、4.344、7.172,P值分别为0.004、0.009、0.037、0.007）。进一步研究显示Spag6高表达组的1、3、5年生存率明显低于低表达组（71.5%vs 90.5%,43.7%vs 68.8%,19.79%vs48.7%;χ2=11.228,P=0.001）。细胞实验证实沉默Spag6基因后HCCLM3细胞增殖和迁移能力明显减弱（P值均〈0.01）。结论Spag6在肝癌细胞及肝癌组织中均呈高表达,且其高表达与肝癌不良临床病理特征以及术后生存有关;Spag6能够促进肝癌细胞增殖和迁移运动,提示Spag6参与了肝癌的发生发展,可作为判断肝癌患者预后的参考指标以及治� 展开更多

关键词 肝肿瘤 精子相关抗原6

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SPAG6在骨髓增生异常综合征患者中的表达及其基因启动子甲基化状态 被引量：1

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作者 陈亚 蒋梅 +2 位作者 罗小华 王利 刘林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第18期1776-1781,共6页

目的探讨SPAG6在骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者中的表达水平与临床参数相关性以及基因启动子甲基化状态对SPAG6转录调控的影响。方法采用RT-qPCR及Western blot检测18例MDS及MDS-AML患者和20例健康对照者骨髓细... 目的探讨SPAG6在骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者中的表达水平与临床参数相关性以及基因启动子甲基化状态对SPAG6转录调控的影响。方法采用RT-qPCR及Western blot检测18例MDS及MDS-AML患者和20例健康对照者骨髓细胞SPAG6表达水平;甲基化特异性PCR(MS-PCR)法检测MDS患者和对照组(包括初诊缺铁性贫血患者和健康体检人群)SPAG6启动子甲基化状态;分析SPAG6启动子甲基化状态及表达水平与患者临床参数相关性。结果与健康对照组比较,MDS患者SPAG6表达水平明显升高,且SPAG6启动子区域呈现异常低甲基化(P<0.01)。SPAG6表达水平与患者年龄、骨髓原始细胞比例、危险分层有相关性(P<0.05),与患者性别无相关性(P>0.05)。SPAG6基因启动子异常低甲基化状态与患者年龄、疾病危险分层有相关性(P<0.05),与患者性别、骨髓原始细胞比例无相关性(P>0.05)。结论 SPAG6在MDS患者中高表达,并且与疾病发生、进展以及不良预后相关,表观遗传调控可能是SPAG6转录调控的重要机制之一。 展开更多

关键词 SPAG6基因 启动子甲基化 骨髓增生异常综合征

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精子相关抗原6(SPAG6)与TCTE3蛋白间相互作用探讨 被引量：2

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作者 双超凡 柳赟昊 +6 位作者 刘晙玭 闵洁 李梦颖 桂媛 黄金宇 张玲 张志兵 《重庆医科大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第8期948-952,共5页

目的:探讨精子相关抗原6(sperm associated antigen 6,Spag6)和T复合体相关睾丸表达3(T-complex associated testis expressed 3,TCTE3)之间的相互作用。方法:PCR法观察Tcte3在雄性小鼠各组织中的表达;以小鼠睾丸c DNA为模板,扩增Tcte3... 目的:探讨精子相关抗原6(sperm associated antigen 6,Spag6)和T复合体相关睾丸表达3(T-complex associated testis expressed 3,TCTE3)之间的相互作用。方法:PCR法观察Tcte3在雄性小鼠各组织中的表达;以小鼠睾丸c DNA为模板,扩增Tcte3序列,构建Tcte3/p GADT7、Tcte3/p EGFPN2重组质粒;以Tcte3/p EGFPN2转染CHO细胞和COS-1细胞,免疫荧光染色及Western blot检测TCTE3在细胞中的定位和表达;以Spag6/p GBKT7和Tcte3/p GADT7进行酵母双杂交实验,提取酵母蛋白后采用Western blot检测TCTE3与SPAG6之间是否存在直接的相互作用。结果:Tcte3在睾丸、脑、肝、肾、肺、脾、肌肉中均有表达;酶切和测序鉴定证实Tcte3/p GADT7和Tcte3/p EGFPN2重组质粒均构建成功;体外实验发现TCTE3主要在CHO和COS-1细胞质中表达,当与SPAG6质粒共转染后,TCTE3被募集至细胞微管中表达;酵母双杂交实验显示TCTE3/SPAG6组合后,在缺少SD/-Leu/-Trp/-His的培养板上有菌落生成,Western blot显示菌落中TCTE3、SPAG6蛋白表达显著,分子量正确。结论:精子相关抗原SPAG6与TCTE3之间存在直接的相互作用,SPAG6可募集TCTE3至细胞微管中表达。 展开更多

关键词 男性不育 精子相关抗原6 T复合体相关睾丸表达3 酵母双杂交 蛋白表达

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SPAG6基因沉默和地西他滨对SKM-1细胞凋亡和PTEN甲基化的影响

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作者 罗洁 牟佼 刘林 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1005-1010,共6页

目的探讨SPAG6基因沉默和地西他滨在体内外对SKM-1细胞凋亡和PTEN启动子甲基化的作用。方法慢病毒载体转染SKM-1细胞沉默SPAG6基因的表达,地西他滨处理细胞后CCK-8检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot和甲基化特异性PC... 目的探讨SPAG6基因沉默和地西他滨在体内外对SKM-1细胞凋亡和PTEN启动子甲基化的作用。方法慢病毒载体转染SKM-1细胞沉默SPAG6基因的表达,地西他滨处理细胞后CCK-8检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot和甲基化特异性PCR检测PTEN的蛋白表达和甲基化情况,并构建非肥胖糖尿病/重度联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠异体移植瘤模型,TUNEL法观察肿瘤组织凋亡,免疫组化检测PTEN在组织中表达情况。结果慢病毒转染后SPAG6干扰组SPAG6基因被成功沉默;CCK-8检测结果提示地西他滨处理能够降低SKM-1细胞的存活率,同时流式细胞术检测显示地西他滨处理组的细胞凋亡率[(17.35±3.37)%]高于未处理组[(5.09±2.06)%],且SPAG6基因沉默联合地西他滨处理组的凋亡率最高[(36.34±4.00)%];地西他滨处理后DNMT1的表达降低而PTEN表达升高,同时PTEN启动子甲基化程度降低,而经地西他滨处理后的SPAG6干扰组的PTEN去甲基化引起的蛋白表达升高效果最明显;NOD/SCID小鼠异体瘤移植模型中地西他滨组的肿瘤体积明显小于生理盐水组,而地西他滨处理SPAG6干扰组的小鼠肿瘤体积最小,且经TUNEL检测发现其凋亡程度最高(阳性比值为3.57±0.48)。结论SPAG6基因沉默在SKM-1细胞中能增强地西他滨诱导的凋亡和PTEN去甲基化作用,并且在NOD/SCID异体瘤移植模型小鼠中能够增强地西他滨的抗肿瘤特性。 展开更多

关键词 骨髓增生异常综合征 精子相关抗原6 PTEN基因 地西他滨

原文传递

Prestin在Spag6基因敲除小鼠外毛细胞中的表达

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作者 王镜涵 李霄飞 +2 位作者 张志兵 王海波 李建峰 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2015年第8期16-22,共7页

目的探究prestin在精子相关抗原6(Spag6)基因敲除小鼠中的表达及其与SPAG6之间的关系。方法获取小鼠耳蜗基底膜组织,进行免疫染色,采用共聚焦显微镜观察prestin与SPAG6在毛细胞中的共同分布。比较野生小鼠(Spag6+/+)、杂合型小鼠(Spag6+... 目的探究prestin在精子相关抗原6(Spag6)基因敲除小鼠中的表达及其与SPAG6之间的关系。方法获取小鼠耳蜗基底膜组织,进行免疫染色,采用共聚焦显微镜观察prestin与SPAG6在毛细胞中的共同分布。比较野生小鼠(Spag6+/+)、杂合型小鼠(Spag6+/-)和同窝基因敲除小鼠(Spag6-/-)外毛细胞prestin的荧光强度差异和毛细胞的形态改变,并以蛋白印记实验和实时定量聚合酶链反应检测3种基因型小鼠的prestin表达水平。结果SPAG6存在于野生型和杂合型成年小鼠的外毛细胞中,在表皮板处呈阳性表达,与prestin共同分布于外毛细胞的外侧壁处。基因敲除小鼠prestin的荧光强度较野生小鼠更弱,并且外毛细胞出现形态异常。蛋白印迹实验和实时定量聚合酶链反应均显示,基因敲除小鼠prestin表达量显著降低。结论SPAG6参与外毛细胞的构成,且影响外毛细胞prestin表达,提示两种蛋白之间存在相互作用。 展开更多

关键词 精子相关抗原6 PRESTIN 外毛细胞 基因敲除小鼠 听觉障碍

原文传递

鸽SPAG6基因多态性与精子活力、体尺性状的相关性研究 被引量：1

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作者 胡平 李国勤 +5 位作者 刘雅丽 陈圆圆 赵婉秋 杨颖 陶争荣 卢立志 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2017年第5期42-46,共5页

为探讨鸽精子相关抗原6蛋白(SPAG6)基因单核苷酸多态性(SNPs)及其与鸽精子活力和体尺性状之间的关系,选择98只12月龄银王鸽,采用DNA直接测序法对SPAG6基因部分片段进行SNPs筛选。结果表明:在SPAG6基因编码区和非编码区分别发现2个和7个... 为探讨鸽精子相关抗原6蛋白(SPAG6)基因单核苷酸多态性(SNPs)及其与鸽精子活力和体尺性状之间的关系,选择98只12月龄银王鸽,采用DNA直接测序法对SPAG6基因部分片段进行SNPs筛选。结果表明:在SPAG6基因编码区和非编码区分别发现2个和7个突变位点,其中G26789T位点BB基因型个体精子活力显著高于AB基因型(P<0.05),AA基因型个体胫长均值显著高于BB基因型(P<0.05);C16181G和C16336T位点与胫围显著相关(P<0.05),BB基因型为优势基因型;T27507C位点AA基因型个体胫围均值显著高于AB基因型(P<0.05);T30364C位点3种基因型个体胸宽差异显著,其中BB基因型为优势基因型(P<0.05)。由此可见,SPAG6基因与精子活力和体尺性状密切相关,可以作为银王鸽精子活力与体尺性状分子标记的候选基因。 展开更多

关键词 鸽:精子相关抗原6蛋白(SPAG6) 单核苷酸多态性(SNPs) 精子活力 体尺性状

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