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题名植物蛋白融合HA标签通用载体构建与应用
被引量：2
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作者
孔佑宾
王冰
张华
刘渊
李喜焕
张彩英
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机构
河北农业大学农学院教育部华北作物种质资源研究与利用重点实验室
河北农业大学生命科学学院植物资源开发与利用实验室
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出处
《中国农业科技导报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第6期131-137,共7页
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基金
国家自然科学基金项目(31401405)
国家转基因生物新品种培育重大专项(2014ZX0800404B)
河北省自然科学基金项目(2014204065)资助
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文摘
以植物表达载体pCamE(GenBank No.:JX841315)为基本骨架,HA蛋白YPYDVPDYA为标签序列,构建可分别融合目标蛋白N端与C端表达载体pCHAN与pCHAC,并增加有利外源基因插入的酶切位点,使之成为含有7个常见限制性内切酶(PstⅠ、SpeⅠ、XbaⅠ、Bam HⅠ、KpnⅠ、SmaⅠ、ApaⅠ或SalⅠ)单一识别位点的通用型标签载体;为验证该载体实用性,将项目组自主克隆的大豆紫色酸性磷酸酶GmPAP14(GenBank No.:JN967626)连接至上述载体,并转入拟南芥;经PCR检测与测序分析获得T2转基因株系,HA标签抗体Western blotting结果发现转pCHAN-GmPAP14、pCHAC-GmPAP14拟南芥可获得目的蛋白融合HA标签杂交条带,而对照无该条带出现,证明2个HA标签载体能够稳定融合外源基因编码蛋白N端与C端,且可在转基因植物中正常翻译表达,为植物蛋白分离纯化及相关领域研究提供了稳定可靠的通用型融合标签载体资源。
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关键词
植物蛋白
通用表达载体
HA标签
大豆gmpap14
蛋白分离纯化
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Keywords
plant protein
universal expression vector
HA tag
soybean gmpap14
protein purification
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分类号
Q782
[生物学—分子生物学]
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