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改良CTAB法用于多年生植物组织基因组DNA的大量提取 被引量:183
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作者 陈昆松 李方 +2 位作者 徐昌杰 张上隆 傅承新 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期529-531,共3页
根据多年生植物组织富含多酚、多糖的具体特性,对现有的DNA提取方法进行了改进。通过增加提取缓冲液中β 巯基乙醇用量,简化氯仿/异戊醇抽提液步骤,改用经-20℃预冷异丙醇沉淀DNA等,对CTAB法加以改进。改进后方法具有以下优点:(1)获得的... 根据多年生植物组织富含多酚、多糖的具体特性,对现有的DNA提取方法进行了改进。通过增加提取缓冲液中β 巯基乙醇用量,简化氯仿/异戊醇抽提液步骤,改用经-20℃预冷异丙醇沉淀DNA等,对CTAB法加以改进。改进后方法具有以下优点:(1)获得的DNA质量良好,提取过程无明显的DNA降解,基本上排除了多酚物质的干扰;(2)用获得的DNA进行Southern杂交,可得到理想的杂交信号,可满足相关的分子研究要求;(3)操作简便。 展开更多
关键词 猕猴桃 DNA 提取 southern杂交
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利用大白菜小孢子胚状体获得抗除草剂转基因植株 被引量:25
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作者 刘凡 姚磊 +2 位作者 李岩 曹鸣庆 刘公社 《华北农学报》 CSCD 北大核心 1998年第4期93-98,共6页
大白菜小孢子培养获得的子叶期胚状体,经粉碎的玻璃碴摩擦后,与农杆菌共培养,在加筛选剂Basta(含phosphinothricin5mg/L)的培养基上,再生出数株绿苗。自交留种后,对其后代苗期进行的Basta抗性鉴... 大白菜小孢子培养获得的子叶期胚状体,经粉碎的玻璃碴摩擦后,与农杆菌共培养,在加筛选剂Basta(含phosphinothricin5mg/L)的培养基上,再生出数株绿苗。自交留种后,对其后代苗期进行的Basta抗性鉴定显示,有4株抗此除草剂。Southern杂交结果显示,抗性植株的基因组中各有一个bar基因插入位点。对转化株的小孢子进行再培养,后代小孢子植株对Basta抗性的分离比显示。 展开更多
关键词 大白菜 小孢子胚胎 根癌农杆菌 除草剂抗性
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半夏凝集素基因(pta)导入水稻及其表达的初步研究 被引量:37
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作者 张红宇 吴先军 +3 位作者 唐克轩 汪旭东 孙小芬 周开达 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第11期1013-1019,共7页
半夏凝集素基因是一种有重要价值的抗虫基因。利用RACE PCR技术克隆出半夏凝集素 (pta)基因 ,并将它构建到载体pCAMBIA1 30 5中形成双元载体 (含pta基因和hpt基因 )。利用农杆菌介导法将pta基因转入粳稻品种鄂宜 1 0 5、中花 1 2和籼稻... 半夏凝集素基因是一种有重要价值的抗虫基因。利用RACE PCR技术克隆出半夏凝集素 (pta)基因 ,并将它构建到载体pCAMBIA1 30 5中形成双元载体 (含pta基因和hpt基因 )。利用农杆菌介导法将pta基因转入粳稻品种鄂宜 1 0 5、中花 1 2和籼稻品种E优 5 32成熟胚诱导的愈伤组织中。通过PCR检测 ,从 1 1 7株T0 代再生植株中筛选出 36株 (其中鄂宜 1 0 5、中花 1 2、E优 5 32分别为 1 9株、7株、1 0株 )转基因植株。对这些转基因后代植株进行Southernblot分析和RT PCR分析表明 :pta基因已经整合到受体细胞基因组中 ,并在转录水平上得到了有效表达。通过对转基因后代的遗传分析 ,成功地从T1 代表现为 1∶2∶1孟德尔分离的分离群体中筛选出 7个独立转基因水稻纯系 (其中包括 4个鄂宜 1 0 5、1个中花 1 2和 2个E优 5 32转基因纯系 )。对这 7个独立转基因水稻T2 代纯系进行褐飞虱生物抗性鉴定和田间隔离喂养实验 ,结果显示 ,这些转基因纯系对褐飞虱的存活率和发育进度均有显著的抑制作用。同时 ,实验结果还表明 2~ 5mg L的 2 ,4 D是愈伤组织诱导和生长的必需条件 ,而且受体的基因型对愈伤组织诱导率和转化频率均有显著影响 ,在同等条件下 。 展开更多
关键词 半夏凝集素基因 抗虫 转基因水稻 southern blot RT-PCR
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富含多糖的转基因石斛基因组DNA提取方法(英文) 被引量:25
4
作者 张妙彬 潘丽晶 +2 位作者 范干群 陈继敏 程萍 《分子植物育种》 CAS CSCD 2009年第1期209-214,共6页
在石斛兰转基因研究中,需通过PCR和Southern杂交等手段检测外源基因是否转入并整合到转化植株基因组。由于转化石斛植株生长缓慢,且含有多糖,因此从转化植株中提取高质量的基因组DNA以尽快对转基因苗进行分子检测存在较大困难。本研究... 在石斛兰转基因研究中,需通过PCR和Southern杂交等手段检测外源基因是否转入并整合到转化植株基因组。由于转化石斛植株生长缓慢,且含有多糖,因此从转化植株中提取高质量的基因组DNA以尽快对转基因苗进行分子检测存在较大困难。本研究旨在通过改良现有的DNA提取法(CTAB法或SDS法),克服转化石斛植株基因组DNA提取中碰到的产量低,纯度不高而导致难以进行PCR或酶切等问题。在本研究所用的3种改良法中,方法Ⅱ能从少量的转化石斛苗中提取出高产量和高纯度的基因组DNA。研究结果表明方法Ⅱ提取的基因组DNA完全适用于转基因石斛的外源基因PCR扩增,限制性酶切和Southern杂交分析。 展开更多
关键词 石斛兰 DNA提取 多糖 PCR southern杂交
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银杏苯丙氨酸解氨酶基因的克隆和序列分析 被引量:19
5
作者 程水源 杜何为 +1 位作者 许锋 陈昆松 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2005年第5期573-577,共5页
根据其他植物PAL基因的DNA序列的保守区域,设计了一对简并引物,经PCR扩增,得到一条862 bp的特异性扩增带。将PCR扩增产物构建到T-载体并测序,获得了862 bp DNA序列。通过分析所得的862 bp DNA序列及其编码的氨基酸序列,与其他植物PAL基... 根据其他植物PAL基因的DNA序列的保守区域,设计了一对简并引物,经PCR扩增,得到一条862 bp的特异性扩增带。将PCR扩增产物构建到T-载体并测序,获得了862 bp DNA序列。通过分析所得的862 bp DNA序列及其编码的氨基酸序列,与其他植物PAL基因的DNA序列和蛋白质序列分别进行比较,证实了所得序列为银杏PAL基因的部分序列。Gbpal1已经被Genebank收录,序列号为AY578145。Southern杂交结果表明银杏PAL是一个多基因家族。 展开更多
关键词 银杏 PAL 克隆 southern blot
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利用抑制消减杂交技术筛选猪蛔虫性别差异表达基因 被引量:16
6
作者 吴绍强 邹丰才 +3 位作者 翁亚彪 宋慧群 林瑞庆 朱兴全 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期1040-1045,共6页
为了筛选线虫的性别特异性基因,为线虫乃至寄生虫的性别控制提供新的工具,本研究选择猪蛔虫(Ascarissuum)为模型,分别提取雌性和雄性成虫的mRNA后,采用Clontech公司的PCR-selectTM试剂盒进行反转录合成cDNA并进行抑制消减杂交(SSH),构... 为了筛选线虫的性别特异性基因,为线虫乃至寄生虫的性别控制提供新的工具,本研究选择猪蛔虫(Ascarissuum)为模型,分别提取雌性和雄性成虫的mRNA后,采用Clontech公司的PCR-selectTM试剂盒进行反转录合成cDNA并进行抑制消减杂交(SSH),构建猪蛔虫雌、雄虫性别差异表达的消减cDNA文库,并采用地高辛(DIG)标记的cDNA探针进行Southern杂交检验所构建文库的消减效率。结果表明,雌、雄虫性别差异表达的消减cDNA文库均具有很强的性别特异性。随机从各库中各抽取25个克隆进行测序及在线BLAST分析,发现在25个雄虫ESTs中有20个已知ESTs,5个新的ESTs;25个雌虫ESTs中有11个已知ESTs,还有8个可能为新基因。猪蛔虫性别差异表达的消减cDNA文库的成功构建,为进一步研究性别特异基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 抑制消减杂交技术 筛选 蛔虫 性别差异基因 CDNA文库
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PEG介导原生质体转化获得水稻转基因植株 被引量:8
7
作者 李文彬 孙勇如 +3 位作者 王革娇 SalaF StanchinaE Castiglione 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1995年第5期409-412,共4页
Embryogenic cell suspension cultures were obtained from calli developed from mature rice seeds of a Japonica type Italian cultivar, Roncarolo. Protoplasts were isolated and transformed by PEG treated method with plasm... Embryogenic cell suspension cultures were obtained from calli developed from mature rice seeds of a Japonica type Italian cultivar, Roncarolo. Protoplasts were isolated and transformed by PEG treated method with plasmid pHP23 carrying the NPTⅡ gene which encodes resistance to antibiotic G 418. Protoplast derived colonies were selected in presence of the inhibitor. Plants were regenerated and transplanted into soil in the green house. The presence of foreign gene in the regenerated plants was verified by PCR and Southern analysis. 展开更多
关键词 水稻 原生质体 转化 PEG 转基因植株
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中国水稻条斑病细菌avrBs3/PthA家族基因的克隆和序列分析 被引量:19
8
作者 邹丽芳 陈功友 +1 位作者 武晓敏 王金生 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期929-935,共7页
水稻条斑病细菌(Xanthomonasoryzaepv.oryzicola,Xooc)和水稻白叶枯病菌(X.oryzaepv.oryzae,Xoo)是稻黄单胞菌种下的致病变种,是水稻上的模式病原菌。用Xoo无毒基因avrXa3对应的NLS和AD区域的DNA片段构建探针,筛选Xooc基因文库,再通过... 水稻条斑病细菌(Xanthomonasoryzaepv.oryzicola,Xooc)和水稻白叶枯病菌(X.oryzaepv.oryzae,Xoo)是稻黄单胞菌种下的致病变种,是水稻上的模式病原菌。用Xoo无毒基因avrXa3对应的NLS和AD区域的DNA片段构建探针,筛选Xooc基因文库,再通过酶切归类和Southern杂交分析,从Xooc中获得2个avBs3r/PthA家族基因克隆,分别被命名为avr/Pth13和avr/Pth14。序列测定结果显示,它们与avrBs3PthA家族成员,几乎一样的5′端和3′端、1个亮氨酸拉链(leucinezipper,LZ)、3个核定位信号(nuclearlocalizationsignal,NLS)和1个酸性转录活化域(acidictranscriptionalactivationdomain,AD),不同的只是102bp重复单元的重复次数不等:avr/Pth13基因102bp重复5.5次,avr/Pth14基因为19.5次。蛋白质水平上同列比较发现,AvrBs3/PthA家族成员34aa重复单元的第12和第13位氨基酸为HD的至少需要3个,才可能满足毒性或无毒性功能。将avr/Pth13和avr/Pth14基因分别导入Xoo菌株PXO99A中之后,在抗水稻白叶枯病近等基因系上测定其致病性,发现avr/Pth13基因增强了PXO99A的致病能力,而avr/Pth14基因则减弱了PXO99A的致病力。以上结果提示,Xooc与Xoo一样,都存在avrBs3/PthA基因家族的无毒基因。从Xooc中克隆avr/Pth13和avr/Pth14基因在国内外尚属首次,? 展开更多
关键词 中国 水稻条斑病细菌 avrBs3/PthA基因家族 基因克隆 序列分析 致病性
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农杆菌介导石斛兰遗传转化的研究 被引量:17
9
作者 张妙彬 梁擎中 +3 位作者 肖浩 岑鹏 范干群 潘丽晶 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期565-570,共6页
利用根癌农杆菌介导转化石斛兰类原球茎(PLBs),研究了石斛兰对潮霉素的敏感性,并通过gus瞬时表达率比较不同类型农杆菌、侵染液浓度及乙酰丁香酮(AS)等对石斛兰转化的影响。结果表明:带有pCAMBIA1301的根癌农杆菌(Agrobacterium... 利用根癌农杆菌介导转化石斛兰类原球茎(PLBs),研究了石斛兰对潮霉素的敏感性,并通过gus瞬时表达率比较不同类型农杆菌、侵染液浓度及乙酰丁香酮(AS)等对石斛兰转化的影响。结果表明:带有pCAMBIA1301的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105(简称为E1301)比带有相同表达载体的LBA4404(简称L1301)对石斛兰的转化效率更高,前者约为后者的6倍;较高浓度的侵染液转化效率更高(OD600为1.0或1.2时的转化效率约为OD600为0.6或0.8时的2倍);在农杆菌生长至OD600值为0.8时,添加AS可提高转化效率;而当OD600为0.6、1.0和1.2时,添加AS反而不同程度地降低转化效率;在各种处理中,OD600为1.0时不添加AS的转化效率最高,达44.4%。经过5—6个月选择培养,抗性小苗经GUS染色、PCR和Southern杂交检测证明为转基因植株。 展开更多
关键词 石斛兰 GUS 根癌农杆菌 转化 southern杂交
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不结球白菜抗病基因同源序列的克隆及分析 被引量:14
10
作者 王彦华 侯喜林 +2 位作者 申书兴 陈雪平 王梅 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期2621-2626,共6页
目的利用同源序列法分离不结球白菜抗病基因同源序列。方法根据植物抗病基因TIR-NBS-LRR保守区设计简并引物,对不结球白菜基因组DNA及cDNA进行PCR扩增。结果获得了10个具有通读氨基酸序列的片段。同源性比较发现,该10个片段均属于TIR-NB... 目的利用同源序列法分离不结球白菜抗病基因同源序列。方法根据植物抗病基因TIR-NBS-LRR保守区设计简并引物,对不结球白菜基因组DNA及cDNA进行PCR扩增。结果获得了10个具有通读氨基酸序列的片段。同源性比较发现,该10个片段均属于TIR-NBS-LRR类抗病基因同源序列(RGA),与已知R基因相应区段的氨基酸序列一致性为50%~66%。与已知抗病基因聚类分析结果显示,该10个RGA序列可以分为5大类。利用RGA950作为探针进行Southern杂交,结果表明,其在基因组中存在多拷贝。结论本研究成功获得了不结球白菜RGA序列,为进一步克隆不结球白菜的R基因奠定了基础。 展开更多
关键词 不结球白菜 抗病基因同源序列 TIR—NBS—LRR southern杂交
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绿色荧光蛋白标记荧光假单胞菌P303及其生存能力检测 被引量:12
11
作者 张霞 张杰 +2 位作者 李国勋 黄大昉 陈中义 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期280-286,共7页
构建了含有荧光假单胞菌自身启动子PP303的中间质粒载体pGFP.然后利用mini-Tn5转座子,通过接合转移,将两个带有不同启动子的绿色荧光蛋白基因分别整合到荧光假单胞菌P303染色体上,获得了在488nm波长下发光稳定的P303m1和P303m3菌株.PCR... 构建了含有荧光假单胞菌自身启动子PP303的中间质粒载体pGFP.然后利用mini-Tn5转座子,通过接合转移,将两个带有不同启动子的绿色荧光蛋白基因分别整合到荧光假单胞菌P303染色体上,获得了在488nm波长下发光稳定的P303m1和P303m3菌株.PCR鉴定和Southern印迹结果均证明绿色荧光蛋白已随机插入P303染色体.SDS-PAGE结果表明,含有PA1/04/03启动子的P303m3菌株GFP表达量低于含有PP303启动子的P303m1菌株,染色体标记的GFP表达量低于质粒标记.室内平板抑菌试验结果表明,P303m1与出发菌株P303抑菌活性相当,对九种植物病原真菌有较强的拮抗作用.定殖、生存竞争能力研究表明,荧光假单胞菌在自然土壤中和大白菜根际都具有较强的定殖能力.P303和P303m1在自然土壤中第60天的菌量分别为1.63×104和3.3×102cfu/g土(湿重),大白菜根际第50天的菌量分别为3.29×106和4.1×104cfu/g根(湿重). 展开更多
关键词 荧光假单胞菌 绿色荧光蛋白 接合转移 southern杂交 定殖 绿色荧光蛋白标记 竞争能力 绿色荧光蛋白基因 southern 检测
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肝癌和癌周双份肝组织的HBV DNA整合状况 被引量:14
12
作者 吕凌 彭文伟 何树初 《临床肝胆病杂志》 CAS 1992年第2期63-65,共3页
本文对30例肝癌患者的肝组织进行研究,从其中24例HBsAg(+)病人检出HBVDNA整合者21例,其中癌组织有整合者18例,癌周组织有整合者15例,双份组织均有整合者13例。6例HBsAg(-)者的1例癌周组织也检出HBVDNA整合。杂交带分析发现,不同病例和... 本文对30例肝癌患者的肝组织进行研究,从其中24例HBsAg(+)病人检出HBVDNA整合者21例,其中癌组织有整合者18例,癌周组织有整合者15例,双份组织均有整合者13例。6例HBsAg(-)者的1例癌周组织也检出HBVDNA整合。杂交带分析发现,不同病例和同一例肝内不同组织整合带数目和电泳位置不一致。23例癌周肝组织有明显的碎屑坏死,这可能与整合、癌变有关。 展开更多
关键词 肝细胞肝癌 乙肝病毒 整合杂交
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牛泡沫病毒(BSV)3026毒株的分离及分子生物学鉴定 被引量:13
13
作者 刘淑红 陈荷新 +4 位作者 陈家童 梁栋 陈启民 耿运琪 Wood.C. 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期140-145,共6页
从一头牛免疫缺陷病毒(BIV)检测阳性的3026号牛外周血中,分离到一株病毒,即3026病毒株。体外细胞培养和反转录分析证明,此病毒是一反转录病毒,可在胎牛肺细胞中引起典型的泡沫样病变,形成合胞体。PCR扩增和Sou... 从一头牛免疫缺陷病毒(BIV)检测阳性的3026号牛外周血中,分离到一株病毒,即3026病毒株。体外细胞培养和反转录分析证明,此病毒是一反转录病毒,可在胎牛肺细胞中引起典型的泡沫样病变,形成合胞体。PCR扩增和Southern杂交显示,此病毒的cDNA和PCR产物均可与牛泡沫病毒(BSV)阳性对照的HirtDNA杂交。3′LTR上游一段330bp的PCR产物序列分析表明,3026毒株与BSV阳性对照相比发生了两个碱基的改变。所有这些表明,3026病毒是一株新发现的BSV毒株。 展开更多
关键词 牛病毒 牛泡沫病毒 分离 分子生物学鉴定
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麻疯树(Jatropha curcas)毒蛋白curcin基因家族成员的分离和描述 被引量:10
14
作者 张金平 秦小波 +1 位作者 徐莺 陈放 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期1042-1046,共5页
麻疯树curcin基因家族中4个成员通过PCR扩增被分离.它们都不含有内含子,序列分析表明它们编码Ⅰ型核糖体失活蛋白(Ribosome-Inactivating Proteins,RIPs),证明curcin基因如同大多数RIPs一样由多基因家族编码.四个curcin基因家族成员和... 麻疯树curcin基因家族中4个成员通过PCR扩增被分离.它们都不含有内含子,序列分析表明它们编码Ⅰ型核糖体失活蛋白(Ribosome-Inactivating Proteins,RIPs),证明curcin基因如同大多数RIPs一样由多基因家族编码.四个curcin基因家族成员和另两个已知curcin基因家族成员的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)的序列比对结果显示curcin基因家族成员至少可分为两个亚类群,亚类群之间的氨基酸序列相似性低于88%.分别将这4个curcin基因家族成员命名为curA2、curA3、curB2、curB3.对四条基因启动子区和ORF生物信息学分析推测curB2、curB3可能是被真菌及逆境诱导的curcin基因家族成员全长,而curA2、curA3可能是麻疯树胚乳贮存的curcin基因家族成员全长.Southern杂交结果显示,麻疯树基因组中至少有3个以上curcin基因家族成员. 展开更多
关键词 麻疯树毒蛋白 基因家族 核糖体失活蛋白 southern杂交
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利用卵胞浆精子注射(ICSI)技术生产转基因小鼠 被引量:5
15
作者 李明 严阿勇 +2 位作者 姚慧 安晓荣 苟克勉 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期784-788,共5页
在掌握小鼠ICSI技术的基础上,进行了ICSI技术生产转基因小鼠的研究。来自成年KM小鼠附睾尾的精子,使用未加抗冻剂的HEPES-CZB溶液,在液氮中冻融1次后,用于本实验。解冻精子与DNA混匀1min后,精子头被显微注射到B6D2F1小鼠成熟卵母细胞质... 在掌握小鼠ICSI技术的基础上,进行了ICSI技术生产转基因小鼠的研究。来自成年KM小鼠附睾尾的精子,使用未加抗冻剂的HEPES-CZB溶液,在液氮中冻融1次后,用于本实验。解冻精子与DNA混匀1min后,精子头被显微注射到B6D2F1小鼠成熟卵母细胞质中。精子头与pEGFP-N1环状DNA共注射生产的ICSI受精卵,在CZB溶液中培养至囊胚期时,39.1%(9/23)的囊胚表达GFP基因。精子注射后6h,直接移植ICSI受精卵后,7只妊娠受体一共产仔30只,效率为23.8%(30/126)。Southernblot分析其中16只小鼠发现,3只(18.8%)转基因小鼠同时整合了GFP和Neomycin基因,它们全部来自精子和线性DNA混合的实验组(阳性效率为33.3%,3/9),相反,精子与环状质粒DNA共注射生产的7只ICSI后代中,没有检测到外源基因。转基因小鼠整合的外源基因能够传递给它们后代。结果说明,利用ICSI技术可以高效地生产转基因小鼠,宿主基因组可能更容易整合线性化的外源基因。 展开更多
关键词 ICSI 囊胚 小鼠 转基因 southern blot
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转Hu-IFN-α基因草鱼的分子验证及抗性研究 被引量:9
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作者 苏建明 章怀云 +4 位作者 张学文 肖调义 陈韬 陈立祥 陈开健 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期412-414,共3页
采用显微注射法将人α-干扰素抗病基因转移到草鱼受精卵中 ,获得转基因群体 ,通过 PCR及 Southern杂交对转基因草鱼进行分子水平的检测 ,以进一步验证外源人α-干扰素是否整合入草鱼基因组 .结果表明 ,外源人α-干扰素抗病基因已整合入... 采用显微注射法将人α-干扰素抗病基因转移到草鱼受精卵中 ,获得转基因群体 ,通过 PCR及 Southern杂交对转基因草鱼进行分子水平的检测 ,以进一步验证外源人α-干扰素是否整合入草鱼基因组 .结果表明 ,外源人α-干扰素抗病基因已整合入草鱼基因组中 .采用腹腔注射法 ,对转基因鱼进行草鱼出血病病毒接种攻毒试验 。 展开更多
关键词 草鱼 人α-干扰素基因 PCR分析 southern杂交 抗病性
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一个含有乳链菌肽抗性基因的乳酸乳球菌质粒pTS50的鉴定 被引量:8
17
作者 汤莎 陈秀珠 +2 位作者 杨巍 陈美玲 还连栋 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期536-541,共6页
在添加乳链菌肽、乳糖及溴甲酚紫的M1 7选择培养基上 ,从 1 97个新鲜牛奶样品中筛选到 3株乳链菌肽抗性菌株 ,PCR扩增证实它们都含有乳链菌肽抗性基因。菌种生理生化特性鉴定及特异性 1 6SrDNAPCR扩增产物的序列测定结果表明这 3株菌都... 在添加乳链菌肽、乳糖及溴甲酚紫的M1 7选择培养基上 ,从 1 97个新鲜牛奶样品中筛选到 3株乳链菌肽抗性菌株 ,PCR扩增证实它们都含有乳链菌肽抗性基因。菌种生理生化特性鉴定及特异性 1 6SrDNAPCR扩增产物的序列测定结果表明这 3株菌都属于乳酸乳球菌乳酸亚种。质粒转化实验发现乳酸乳球菌乳酸亚种TS 1 640中的乳链菌肽抗性基因位于一个约47kb的大质粒pTS50上。BamHI、EcoRI、HindⅢ、NcoI、PstⅠ酶切分析和Southern杂交 ,进一步将乳链菌肽抗性基因定位于pTS50的一个约 1 展开更多
关键词 乳酸乳球菌 乳链菌肽抗性 质粒 酶切分析 southern杂交 pTS50 鉴定
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葡萄无核基因的SCAR标记及Southern blot分析 被引量:7
18
作者 杨英军 王跃进 +2 位作者 周鹏 王西平 张剑侠 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2002年第6期77-80,共4页
 根据无核基因特异RAPD标记的序列进行分析,合成1对特异引物P1+P3(序列分别是P1:5′CTCATCTTCTTGATGGTGAT3′;P3:5′AAGTGAAGAACATCATTAAGAAC3′),对30个葡萄材料进行PCR扩增,成功地将RAPD标记转换成SCAR标记。并对含有该标记序列的重...  根据无核基因特异RAPD标记的序列进行分析,合成1对特异引物P1+P3(序列分别是P1:5′CTCATCTTCTTGATGGTGAT3′;P3:5′AAGTGAAGAACATCATTAAGAAC3′),对30个葡萄材料进行PCR扩增,成功地将RAPD标记转换成SCAR标记。并对含有该标记序列的重组质粒进行Hind 和Spe 双酶切,获得的310bp片段回收后制成探测葡萄无核基因存在与否的杂交探针,成功地对7个葡萄品种进行Southernblot分析,实现了分子标记检测葡萄无核基因的目的。 展开更多
关键词 葡萄 无核基因 SCAR标记 southern-blot分析
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肝癌患者手术后外周血AFP mRNA的检测及其与术后复发的关系 被引量:9
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作者 智慧 詹俊 +1 位作者 邓庆丽 黄志明 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期112-115,共4页
目的探讨肝癌患者手术后外周血AFP mRNA的检测及其与术后复发的关系。方法原发性肝癌手术治疗患者29例,对照组为15例非原发性肝癌但须行肝部分切除手术者。分离术后第1,7和14天外周血单个核细胞,提取单个核细胞的总RNA,进行RT—PCR... 目的探讨肝癌患者手术后外周血AFP mRNA的检测及其与术后复发的关系。方法原发性肝癌手术治疗患者29例,对照组为15例非原发性肝癌但须行肝部分切除手术者。分离术后第1,7和14天外周血单个核细胞,提取单个核细胞的总RNA,进行RT—PCR和Southem杂交,检测AFP mRNA,并对肝癌患者进行36个月的随访。结果全组有18例原发性肝癌患者复发。术后3次检测外周血AFP mRNA不全阴性者17例,其中14例复发,复发率为82.4%;3次检测均为阴性者12例,有4例复发,复发率为33.3%,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组手术后外周血AFP mRNA检测均为阴性。结论原发性肝癌患者手术后外周血AFP mRNA的检测可以预测肝癌的复发情况。 展开更多
关键词 肝肿瘤 AFP MRNA 肿瘤复发 RT—PCR Southem杂交
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多重实时PCR对宫颈癌组织及SiHa细胞株HPV-16病毒存在状态的检测 被引量:9
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作者 郑莹 彭芝兰 +1 位作者 楼江燕 王和 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第3期373-377,共5页
背景与目的:人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)感染与宫颈癌发生发展密切相关,高危型HPV病毒整合入宿主细胞是细胞转化及癌变的关键。病毒整合状态的检测对深入探讨宫颈癌发生发展机制及预测宫颈病变的转归有一定的临床意义。然而... 背景与目的:人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)感染与宫颈癌发生发展密切相关,高危型HPV病毒整合入宿主细胞是细胞转化及癌变的关键。病毒整合状态的检测对深入探讨宫颈癌发生发展机制及预测宫颈病变的转归有一定的临床意义。然而目前尚没有一种理想的能够用于各种临床标本的HPV存在状态的检测方法。本研究旨在探讨HPV-16存在状态的理想检测方法。方法:以HPV-16质粒为标准品,利用两种不同的荧光报告基团,采用多重实时PCR同管定量检测HPV-16E2和E6基因,根据E2和E6基因拷贝数的比值(E2/E6)来判定HPV-16的存在状态;对HPV-16阳性的宫颈癌SiHa细胞和27例宫颈鳞癌新鲜标本进行多重实时PCR与Southern杂交检测,将两种检测方法的结果进行比较。结果:(1)多重实时PCR所得到的HPV-16E2、E6标准曲线相关性好,相关系数均为1.00,扩增效率均在95%以上。(2)对系列稀释的HPV-16质粒进行重复检测,确定了E2/E6比值为1时该多重实时PCR检测系统的95%参考值范围为0.81~1.29,以0.81作为区分游离型和混合型HPV-16的界值。(3)多重实时PCR与Southern杂交检测均发现SiHa细胞中HPV-16呈整合型,27例鳞癌中22例获得了一致的检测结果,符合率为81.5%,Kappa值为0.844,P<0.001。结论:多重实时定量PCR是一种可靠的、便于临床应用的检测HPV-16病毒存在状态的方法,具有省时、简便快速、高通量的优点,并且能用于石蜡切片以及病灶较小、DNA含量少的宫颈癌前病变组织或宫颈细胞学标本。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16 多重实时聚合酶链反应 Southem杂交 子宫颈肿瘤
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