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RNA干扰作用(RNAi)研究进展 被引量：35
1
作者 陈忠斌 于乐成 王升启 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期525-528,共4页
RNA干扰作用 (RNAi)是生物界一种古老而且进化上高度保守的现象 ,是基因转录后沉默作用 (PTGS)的重要机制之一 .RNAi主要通过dsRNA被核酸酶切割成 2 1～ 2 5nt的干扰性小RNA即siRNA ,由siRNA介导识别并靶向切割同源性靶mRNA分子而实现 .... RNA干扰作用 (RNAi)是生物界一种古老而且进化上高度保守的现象 ,是基因转录后沉默作用 (PTGS)的重要机制之一 .RNAi主要通过dsRNA被核酸酶切割成 2 1～ 2 5nt的干扰性小RNA即siRNA ,由siRNA介导识别并靶向切割同源性靶mRNA分子而实现 .RNAi要有多种蛋白因子以及ATP参与 ,而且具有生物催化反应特征 .RNAi是新发现的一种通过dsRNA介导的特异性高效抑制基因表达途径 。 展开更多
关键词 rna干扰作用 rnaI 研究进展 基因转录后沉默 干扰性小rna 沉默复合体 反义药物
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植物微小RNA(microRNA)研究进展 被引量：16
2
作者 王磊 范云六 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2007年第3期18-23,共6页
真核细胞中存在大量的非编码RNA,～22nt的小RNA是其中一类非常重要的调控RNA,主要包括siRNA和miRNA两种类型,二者均由类似RNaseⅢ的核酸内切酶-Dicer加工产生,随后进入沉默复合体抑制靶基因表达。miRNA分子与siRNA类似,但miRNA的前体在... 真核细胞中存在大量的非编码RNA,～22nt的小RNA是其中一类非常重要的调控RNA,主要包括siRNA和miRNA两种类型,二者均由类似RNaseⅢ的核酸内切酶-Dicer加工产生,随后进入沉默复合体抑制靶基因表达。miRNA分子与siRNA类似,但miRNA的前体在基因组上具有独立的转录单位,可自身折叠成发卡结构,其靶基因主要是与器官发生及生长发育相关的转录因子以及调控蛋白。miRNA在生物生长发育的各个时期都扮演着重要的角色,调控许多重要的生物途径,处于基因调控网络的核心位置。 展开更多
关键词 小rna 干扰小rna(sirna) 微小rna(mirna) 发育
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Ad-VEGF-siRNA抑制荷人骨肉瘤裸鼠血管生成的形态学研究 被引量：11
3
作者 王家骐 高悠水 +3 位作者 梅炯 薛华明 王树青 蔡宣松 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第6期581-586,共6页
背景与目的:血管内皮生长因子是骨肉瘤血管形成重要的促进因子,本研究通过抗血管生成方法,观察其抑制荷人骨肉瘤裸鼠血管生成的形态学表现。方法:取4～8周龄的Balb/c裸鼠作为实验动物,人骨肉瘤细胞株MG63皮下接种法构建骨肉瘤的动物模... 背景与目的:血管内皮生长因子是骨肉瘤血管形成重要的促进因子,本研究通过抗血管生成方法,观察其抑制荷人骨肉瘤裸鼠血管生成的形态学表现。方法:取4～8周龄的Balb/c裸鼠作为实验动物,人骨肉瘤细胞株MG63皮下接种法构建骨肉瘤的动物模型。建模成功后将荷人骨肉瘤的裸鼠随机分为3组,每组15只。A组使用自行构建的Ad-VEGF-siRNA干扰新生血管形成;B、C组分别使用等剂量的Ad-EGFP或PBS作为对照。实验维持19d,药物使用后隔日测量肿瘤体积和体重,绘制肿瘤生长曲线;采用常规HE染色、VEGF和CD31相关抗原免疫组化染色观察各组肿瘤标本;各组随机抽取一个标本在透射电镜下观察仿血管发生的超微结构。结果:实验结束时,A组裸鼠瘤体体积为(0.31±0.18)cm3,重量为(0.75±0.21)g,微血管密度(microvessed density,MVD)为5.79±0.34,VEGF表达为235228.09±123244.41,B、C照组裸鼠瘤体积分别为(1.21±0.29)cm3、(1.43±0.95)cm3;瘤重分别为(1.19±0.27)g、(1.19±0.35)g;MVD分别为11.00±0.68、10.42±0.10;VEGF表达分别为9641992.40±90479.62、981298.00±213590.50。A组肿瘤体积、重量、MVD和VEGF表达均显著低于B、C组。MVD和VEGF呈正相关关系,相关系数为0.9989。Ad-VEGF-siRNA组仿血管发生数量1.4000±0.5477,明显小于Ad-EGFP和PBS对照组。透射电镜可见肿瘤细胞形成的仿血管。结论:通过宏观和微观的形态学观察,证实Ad-VEGF-siRNA介导的以VEGF为靶向的抗血管生成能够抑制荷人骨肉瘤裸鼠的血管生成。 展开更多
关键词 骨肉瘤 血管内皮生长因子 腺病毒 小干扰rna 血管生成抑制
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MicroRNA特征与功能 被引量：9
4
作者 石夏荣 俞吉安 《上海交通大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第5期829-833,共5页
通过分析总结现代分子生物学国际前沿microRNA(miRNA)领域的研究文献,整理出miRNA研究的基本脉络和走向.miRNA是一类长度～22nt的非编码小分子RNA,在包括线虫、果绳、家鼠、人体以及拟南芥等生物中普遍存在;它在调节基因转录与表达,调... 通过分析总结现代分子生物学国际前沿microRNA(miRNA)领域的研究文献,整理出miRNA研究的基本脉络和走向.miRNA是一类长度～22nt的非编码小分子RNA,在包括线虫、果绳、家鼠、人体以及拟南芥等生物中普遍存在;它在调节基因转录与表达,调控生物体正常发育等生理过程中扮演重要角色.从比较的角度出发,揭示了miRNA与小干扰RNA在其代谢与功能方面共用某些途径,相互交叉与替代,可能同属一个更广范围的小分子RNA介导的生理调控机制.miRNA的研究可能对新一代基因药物的开发具有深远意义. 展开更多
关键词 MICROrna 小干扰rna DICER 基因表达调控
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核酸药物的研究进展 被引量：7
5
作者 何军林 《国际药学研究杂志》 CSCD 北大核心 2017年第11期1028-1051,共24页
从基因组的双链DNA(ds DNA),到编码和非编码RNA(m RNA、lnc RNA和mi RNA等),只要与疾病发生相关,都可能作为基因治疗的靶标。这些靶标可被替换、修复、补充、抑制或消除,取决于所采取的具体基因治疗方法。基因编辑技术是将致病基因裁剪... 从基因组的双链DNA(ds DNA),到编码和非编码RNA(m RNA、lnc RNA和mi RNA等),只要与疾病发生相关,都可能作为基因治疗的靶标。这些靶标可被替换、修复、补充、抑制或消除,取决于所采取的具体基因治疗方法。基因编辑技术是将致病基因裁剪缝补为正常的基因,而化学合成的和体内表达的核酸药物则主要靶向致病性RNA。与此同时,转运核酸药物的方法也在大力研发中,包括病毒或质粒表达载体和各种聚合物材料。核酸药物的成药性、转运载体的安全性和效率是基因治疗方法面临的挑战性问题。本文简要综述近年来基因治疗药物,特别是反义核酸、核酶、脱氧核酶、小干扰RNA(si RNA)和微小RNA(mi RNA)等化学合成的核酸药物,以及化学修饰在提高核酸药物的效价、抗酶解稳定性和有效转运等关键技术方面的进展。随着对基因调控在疾病发生过程中认识的逐步深入和核酸药物优化技术的进步,核酸药物的研发步伐将会越来越快,期待包括si RNA药物在内的更多核酸药物在不久的将来应用于临床治疗。 展开更多
关键词 反义核酸 核酶 脱氧核酶 小干扰rna(sirna) 微小rna(mirna) 核酸药物 化学修饰
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小分子干扰RNA抑制Cyclin D1表达诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡研究 被引量：6
6
作者 梁大宁 高建华 鲁峰 《中华整形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期307-310,共4页
目的 探讨RNA干扰阻断细胞周期蛋白D1（CyclinD1）基因表达后，对瘢痕疙瘩成纤维细胞细胞周期和细胞增殖、凋亡的影响。方法针对CyclinD1基因设计并合成特定的小分子干扰RNA（small interferingRNA，siRNA）转染人瘢痕疙瘩成纤维细胞，... 目的 探讨RNA干扰阻断细胞周期蛋白D1（CyclinD1）基因表达后，对瘢痕疙瘩成纤维细胞细胞周期和细胞增殖、凋亡的影响。方法针对CyclinD1基因设计并合成特定的小分子干扰RNA（small interferingRNA，siRNA）转染人瘢痕疙瘩成纤维细胞，测定Cyclin D1mRNA水平，流式细胞术分析细胞周期，F1TC-Annexin V／PI细胞平均百分率为凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况，DNA梯型观察凋亡细胞DNA变化。结果特异性siRNA能在mRNA水平下调成纤维细胞的Cyclin D1基因的表达，转染特异性siRNA24、48、72h后，G1期细胞平均百分率分别为（59．80±3．06）％、（66．01±4．03）％和（67．43±5．35）％，高于对照组（54．50±5．35）％；S期细胞平均百分率为（18．40±1．42）％、（17．21±1．76）％和（11．07±1．00）％，低于对照组（22．33±1．49）％。细胞凋亡率分别为（7．82±0．45）％、（15．71±1．06）％、（18．32±1．08）％，均显著高于对照组（0．68±0．12）％，细胞DNA断裂成片段状。结论特异性siRNA分子能够抑制细胞CvclinD1基因的表达，使细胞阻滞于G1期，并诱导细胞凋亡，为应用RNA干扰技术治疗瘢痕疙瘩提供了初步实验依据。 展开更多
关键词 瘢痕疙瘩 小分子干扰rna 细胞周期蛋白D1 细胞周期
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植物表观遗传中的RNA介导的DNA甲基化 被引量：5
7
作者 焦晓明 范云六 王磊 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2009年第6期7-13,共7页
植物基因组对基因的表达调控不仅表现在转录水平上,也表现在染色质结构的变化上。在植物中存在着特有的RNA聚合酶Ⅳ(RNA PolⅣ)和RNA聚合酶Ⅴ(RNA PolⅤ),它们与RNA聚合酶Ⅱ(RNA PolⅡ)相似。RNAPolⅣ和RNAPolⅤ的转录产物包括参与表观... 植物基因组对基因的表达调控不仅表现在转录水平上,也表现在染色质结构的变化上。在植物中存在着特有的RNA聚合酶Ⅳ(RNA PolⅣ)和RNA聚合酶Ⅴ(RNA PolⅤ),它们与RNA聚合酶Ⅱ(RNA PolⅡ)相似。RNAPolⅣ和RNAPolⅤ的转录产物包括参与表观遗传调控的长链非编码RNA(lncRNAs)和干扰小RNA(siRNAs)。这类非编码RNA广泛地参与了基因组上发生的胞嘧啶甲基化,去甲基化以及甲基化扩散。近年来,研究已经发现RNA介导的染色质水平的基因沉默涉及植物的生长发育、胁迫应答、表观遗传多态性,并对植物的表型多样化、生理适应性以及植物进化具有显著影响。 展开更多
关键词 表观遗传 rna聚合酶 干扰小rna(sirna) rna介导的DNA甲基化(RdDM) DNA甲基化
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黄芩苷对人牙周膜细胞RANKL-OPG表达的影响及其作用机制 被引量：4
8
作者 陈悦 吴织芬 杨连甲 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期492-497,共6页
目的研究黄芩苷对人牙周膜细胞核因子-κB受体激活物配基和骨保护素(RANKL-OPG)表达的影响及其作用机制。方法首先构建转化生长因子βⅡ型受体(TGF-βⅡR)靶向siRNA真核表达载体,转染正常人外周血T细胞,使T细胞表面的TGF-βⅡR基因沉默... 目的研究黄芩苷对人牙周膜细胞核因子-κB受体激活物配基和骨保护素(RANKL-OPG)表达的影响及其作用机制。方法首先构建转化生长因子βⅡ型受体(TGF-βⅡR)靶向siRNA真核表达载体,转染正常人外周血T细胞,使T细胞表面的TGF-βⅡR基因沉默,继而将转染与未转染靶向性TGF-βⅡR基因沉默的T细胞和正常人牙周膜成纤维细胞置于加有黄芩苷和内毒素的培养基中,分为6组:①正常牙周膜成纤维细胞+内毒素+转染siRNA1的T细胞+黄芩苷;②正常牙周膜成纤维细胞+内毒素+转染siRNA1的T细胞;③正常牙周膜成纤维细胞+内毒素+正常T细胞+黄芩苷;④正常牙周膜成纤维细胞+内毒素+正常T细胞;⑤正常牙周膜成纤维细胞+黄芩苷;⑥正常牙周膜成纤维细胞。共培养48h,RT-PCR检测牙周膜细胞RANKL和OPG的表达,计算RANKL/OPG比值。结果①酶切鉴定正确的克隆测序结果与设计的目的序列完全一致;②转染siRNA1的T细胞组的TGF-βⅡRmRNA的表达被明显抑制;③RANKL/OPG的比值在各组间的差异有统计学意义(P<0.01)。结论成功构建了TGF-βⅡR靶向siRNA真核表达载体并成功转染T细胞;黄芩苷可以降低牙周膜细胞表面RANKL/OPG比值;TGF-β的信号传导在黄芩苷影响牙周膜成纤维细胞表面的RANKL/OPG表达过程中起着重要作用;黄芩苷并非只通过TGF-β信号传导通路,而是亦通过其他通路对牙周膜成纤维细胞表面的RANKL/OPG进行调控。 展开更多
关键词 转化生长因子βⅡ型受体 小干扰rna 核因子-κB受体激活物配基 骨保护素 牙周膜成纤维细胞
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小分子干扰RNA沉默结缔组织生长因子对鼠肝星状细胞培养激活的影响 被引量：3
9
作者 李光明 谢青 +3 位作者 李定国 刘海防 徐芹芳 金由辛 《肝脏》 2005年第4期281-283,共3页
目的研究化学合成小分子干扰RNA(siRNA)对大鼠原代肝星状细胞(HSC)结缔组织生长因子(CTGF)基因表达的阻抑作用及对HSC培养激活的影响。方法以胶原酶原位灌注消化加密度梯度离心法分离大鼠原代HSC,将siRNA以脂质体包裹,转染培养72h的原代... 目的研究化学合成小分子干扰RNA(siRNA)对大鼠原代肝星状细胞(HSC)结缔组织生长因子(CTGF)基因表达的阻抑作用及对HSC培养激活的影响。方法以胶原酶原位灌注消化加密度梯度离心法分离大鼠原代HSC,将siRNA以脂质体包裹,转染培养72h的原代HSC,设空白对照,收集孵育96h细胞,以Westernblot和免疫细胞化学染色法检测原代HSCCTGF及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)基因表达。结果转染siRNA的原代HSCCTGF及α-SMA基因表达显著下调,与对照相比,CTGF蛋白下调(92±5)%(P<0.01);α-SMA蛋白表达分别下调(62±9)%(P<0.01,Westemblot方法)和(58±6)%(P<0.01,免疫细胞化学染色法)。结论siRNA能显著下调大鼠原代HSCCTGF基因表达,明显阻抑原代HSC培养激活,提示针对CTGF基因化学合成的siRNA具有防治肝纤维化的潜力。 展开更多
关键词 小分子干扰rna 结缔组织生长因子 肝纤维化 肝星状细胞
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小干扰RNA沉默CXCR4和CXCR7对人子宫内膜癌Ishikawa细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用 被引量：4
10
作者 叶园英 黄煜 +2 位作者 颜莉莉 赵淑萍 张磊 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期389-394,共6页
目的:探讨针对趋化因子受体基因CXCR4和CXCR7的小干扰RNA(siRNA)对人子宫内膜癌Ishikawa细胞裸鼠移植瘤生长的影响。方法:将子宫内膜癌Ishikawa细胞株注射于裸鼠肩胛背部皮下建立动物模型,待肿瘤最长径达5~7mm后,将所有荷瘤裸鼠随机分组... 目的:探讨针对趋化因子受体基因CXCR4和CXCR7的小干扰RNA(siRNA)对人子宫内膜癌Ishikawa细胞裸鼠移植瘤生长的影响。方法:将子宫内膜癌Ishikawa细胞株注射于裸鼠肩胛背部皮下建立动物模型,待肿瘤最长径达5~7mm后,将所有荷瘤裸鼠随机分组,分别给予CXCR4-siRNA和CXCR7-siRNA单独或联合瘤体内注射,并以阴性对照siRNA和生理盐水作为对照组,每3 d治疗一次,共6个治疗周期。观察各组裸鼠移植瘤的生长,比较各组移植瘤的体积和质量的差异,并以实时荧光定量RT-PCR、Western blotting和免疫组化技术验证CXCR4和CXCR7的基因沉默效果。结果:成功建立Ishikawa细胞裸鼠移植瘤模型,与阴性对照siRNA组和空白对照组相比,CXCR4 siRNA治疗组、CXCR-siRNA治疗组和CXCR4-siRNA+CXCR7-siRNA治疗组的肿瘤的生长均明显受到抑制(均P<0.05);CXCR4-siRNA和/或CXCR7-siRNA瘤体内直接注射能显著下调CXCR4、CXCR7 mRNA(均P<0.05)和蛋白(均P<0.01)的表达。结论:siRNA干扰CXCR4和CXCR7表达能够有效抑制人子宫内膜癌Ishikawa细胞裸鼠移植瘤的生长。 展开更多
关键词 sirna CXCR4 CXCR7 子宫内膜癌 裸鼠
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采用GFP标记筛选抑制多血清型口蹄疫病毒3C基因表达的siRNA
11
作者 张志彬 张健 +3 位作者 贺明 高倍瑶 贾琪 张立春 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第8期1-5,共5页
为筛选出可抑制多种血清型口蹄疫病毒(FMDV)的小干扰RNA(siRNA),本试验通过多血清型口蹄疫病毒序列比对与siRNA设计分析,筛选出潜在抗多血清型siRNA位点;通过体外合成A型、O型和Asia I型病毒部分基因序列,制备绿色荧光蛋白(GPF)基因融... 为筛选出可抑制多种血清型口蹄疫病毒(FMDV)的小干扰RNA(siRNA),本试验通过多血清型口蹄疫病毒序列比对与siRNA设计分析,筛选出潜在抗多血清型siRNA位点;通过体外合成A型、O型和Asia I型病毒部分基因序列,制备绿色荧光蛋白(GPF)基因融合表达载体;将化学合成的siRNA与融合表达载体共转染,通过GFP观察、Western blot和实时荧光定量反转录PCR(qRT-PCR)方法检验目标siRNA对融合基因的抑制效率。生物信息分析发现,多血清型口蹄疫病毒3C基因高度保守并存在潜在siRNA作用靶位,GFP-3C融合表达载体成功构建,与化学合成的siRNA1-3C共转染293T细胞,GFP观察发现,siRNA1-3C可有效抑制来源于A型、O型和Asia I型3C基因的GFP-3C荧光信号且持续时间达72 h,Western blot检测证实此结果。qRT-PCR检测发现,siRNA1-3C对3个GFP-3C融合基因转录水平抑制效率超85%,且作用可维持72 h。本试验利用GFP作为筛选标记成功筛选出1个作用于FMDV 3C基因的siRNA,为开发多血清型口蹄疫抑制剂提供参考依据。 展开更多
关键词 小干扰rna(sirna) 口蹄疫(FMD) 绿色荧光蛋白(GFP) 多血清型 3C基因
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针对SARS冠状病毒重要蛋白的siRNA设计(英文) 被引量：3
12
作者 张勇 徐静怡 +5 位作者 邓巍 张楠 蔡伦 赵义 卜东波 陈润生 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第3期335-338,共4页
NA干涉 (RNAinterference ,RNAi)是一种特异性地导致转录后基因沉默的现象 ,在哺乳动物细胞中小分子干扰RNA双链体 (smallinterferingRNAduplexes ,siRNAduplexes)可以有效地诱导RNAi现象 ,为一些疾病的治疗开辟了新的途径 .针对SARS冠... NA干涉 (RNAinterference ,RNAi)是一种特异性地导致转录后基因沉默的现象 ,在哺乳动物细胞中小分子干扰RNA双链体 (smallinterferingRNAduplexes ,siRNAduplexes)可以有效地诱导RNAi现象 ,为一些疾病的治疗开辟了新的途径 .针对SARS冠状病毒 (SARScoronavirus ,SARS CoV)中编码 5个主要蛋白质的基因 ,用生物信息学的方法设计了3 48条候选siRNA靶标 .在理论上 ,相应的siRNA双链体能特异地抑制SARS CoV靶基因的表达 ,同时不会影响人体细胞基因的正常表达 。 展开更多
关键词 SARS冠状病毒 蛋白 sirna 生物信息学 rna干涉
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小干扰RNA特异性抑制淋巴细胞共刺激分子CD28基因表达的研究 被引量：4
13
作者 张颖 徐开林 +1 位作者 潘秀英 鹿群先 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期25-29,共5页
目的 :为了探讨体外转录法合成的小干扰RNA(smallinterferingRNA ,siRNA)对人淋巴细胞共刺激分子CD2 8基因表达和功能的影响。方法 :设计并合成 3条siRNA(siRNA 1、siRNA 2、siRNA 3) ,在阳离子脂质体的介导下转染淋巴细胞。于转染后 2 ... 目的 :为了探讨体外转录法合成的小干扰RNA(smallinterferingRNA ,siRNA)对人淋巴细胞共刺激分子CD2 8基因表达和功能的影响。方法 :设计并合成 3条siRNA(siRNA 1、siRNA 2、siRNA 3) ,在阳离子脂质体的介导下转染淋巴细胞。于转染后 2 4、4 8、72小时收集细胞 ,用半定量RT PCR方法检测CD2 8mRNA的变化 ;流式细胞仪检测CD2 8表达的变化。结果 :体外合成的 3条siRNA通过脂质体转染淋巴细胞后 ,均能不同程度地抑制共刺激分子CD2 8的表达。转染后 4 8小时的流式细胞仪检测显示siRNA 1、siRNA 2和siRNA 3组的CD2 8表达抑制率分别为 2 2 10 %± 1 6 3%、73 5 0 %± 1 0 2 %和 4 2 90 %± 0 89% ,以siRNA 2的CD2 8抑制作用最强。半定量RT PCR检测显示siRNA 1、siRNA 2、siRNA 3转染后淋巴细胞的CD2 8mRNA均受到不同程度的抑制 ,其中siRNA 2组的抑制作用最明显 (74 10 %± 1 6 5 % )。结论 :siRNA可特异性抑制淋巴细胞共刺激分子CD2 8基因的转录和表达 ,从而为进一步研究siRNA在移植免疫耐受及防治GVHD方面的应用提供了理论和实验基础。 展开更多
关键词 rna干扰 小干扰rna 淋巴细胞 CD28共刺激分子
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脂质体介导RNAi的研究 被引量：4
14
作者 张旭 丁会芹 +5 位作者 王冰 崔韶晖 赵轶男 金文实 张树彪 金梅 《生物医学工程学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期722-726,共5页
本文选用阳离子脂质体Lipofectamine 2000为基因载体,使用沉默荧光素酶基因的小干扰RNA(siRNA)进行体外RNA干扰(RNAi),对阳离子脂质体转运siRNA的效率进行研究。首先以阳离子脂质体运载质粒DNA转染细胞,并以延滞实验对阳离子脂质体与si... 本文选用阳离子脂质体Lipofectamine 2000为基因载体,使用沉默荧光素酶基因的小干扰RNA(siRNA)进行体外RNA干扰(RNAi),对阳离子脂质体转运siRNA的效率进行研究。首先以阳离子脂质体运载质粒DNA转染细胞,并以延滞实验对阳离子脂质体与siRNA的结合能力进行检测;然后通过基因载体将荧光素酶基因载入细胞,转运不同浓度的siRNA对其进行沉默,应用酶标仪对荧光素酶基因的表达进行分析,并用MTT法对转染后细胞存活率进行检测。结果表明:阳离子脂质体Lipofectamine 2000可以高效转运质粒DNA,并可与siRNA很好地结合。在较低的siRNA浓度下,对荧光素酶基因的沉默率达到较高的水平,转运siRNA转染细胞对细胞活性的影响很小,但细胞存活率随着siRNA浓度的增加而逐渐降低。通过优化实验条件,阳离子脂质体转运较低浓度的siRNA即可高效沉默目的基因。 展开更多
关键词 基因治疗 rna干扰 阳离子脂质体 小干扰rna LIPOFECTAMINE 2000
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siRNA抑制人舌癌细胞VEGF表达对MMP-2、MMP-9及TIMP-1蛋白表达的影响 被引量：4
15
作者 陈凤强 郝洁 +2 位作者 于大海 李晶 罗婷婷 《广西医科大学学报》 CAS 2012年第4期493-495,共3页
目的:探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制人舌癌Tca8113细胞血管内皮生长因子(vascular endo-thelial growth factor,VEGF)表达对移植瘤基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)-2、MMP-9及基质金属蛋白酶抑制剂-1(... 目的:探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制人舌癌Tca8113细胞血管内皮生长因子(vascular endo-thelial growth factor,VEGF)表达对移植瘤基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)-2、MMP-9及基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitors of metalloproteinase-1,TIMP-1)蛋白表达的影响。方法:以稳定转染携带针对VEGF的siRNA真核表达载体的人舌癌Tca8113细胞(VEGF-siRNA1、VEGF-siRNA2)为实验组,以转染空载体的人舌癌Tca8113细胞及未转染的人舌癌Tca8113细胞为实验对照组和空白对照组,将各组细胞分别接种于裸鼠皮下,用明胶酶谱实验及蛋白免疫印迹法分别测定各组移植瘤TIMP-2、TIMP-9及TIMP-1的蛋白表达。结果:各组明胶酶谱实验结果均有较明显MMP-9蛋白表达,活性MMP-9蛋白含量较少,MMP-2蛋白表达量明显少于MMP-9蛋白表达,而活性MMP-2几乎完全没有可见条带出现。各组中MMP-2、MMP-9及活性-MMP-9条带酶量差异均尚不具统计学意义(P>0.05)。以scion图像分析系统分别读取各样本TIMP-1条带灰度值及β-actin条带灰度值,各组中TIMP-1蛋白相对含量差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论:以siRNA干扰人舌癌Tca8113细胞VEGF基因,可明显抑制肿瘤内VEGF的蛋白表达,但是对MMP-2、MMP-9及TIMP-1蛋白的表达无明显影响。 展开更多
关键词 小干扰rna 舌癌 血管内皮生长因子 基质金属蛋白酶 基质金属蛋白酶抑制剂
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PUMA介导大鼠缺氧/复氧心肌细胞凋亡的研究 被引量：4
16
作者 付晶晶 段荣 +1 位作者 李红 万福生 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期312-316,共5页
目的研究促凋亡蛋白p53上调凋亡调制物(PUMA)在大鼠缺氧/复氧(H/R)心肌细胞凋亡中的作用及意义。方法原代培养的大鼠心肌细胞缺氧5 h后复氧2～12 h以制备缺氧/复氧损伤模型,靶向PUMA的siRNA转染大鼠心肌细胞以建立PUMA沉默表达模型。采... 目的研究促凋亡蛋白p53上调凋亡调制物(PUMA)在大鼠缺氧/复氧(H/R)心肌细胞凋亡中的作用及意义。方法原代培养的大鼠心肌细胞缺氧5 h后复氧2～12 h以制备缺氧/复氧损伤模型,靶向PUMA的siRNA转染大鼠心肌细胞以建立PUMA沉默表达模型。采用Annexin V-FITC联合PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;分光光度法检测Caspase-3活性变化;RT-PCR、Western blot等方法分析PUMA及凋亡相关基因Bax、Bcl-2的mRNA及蛋白表达变化。结果与正常对照组相比,H/R处理后心肌细胞凋亡率及Caspase-3活性迅速上升;PUMA mRNA及蛋白表达上调,凋亡相关蛋白Bax表达上调及Bcl-2的表达下调。靶向PUMA的siRNA转染后,Bax上调表达及Bcl-2下调表达的程度明显被抑制。结论在大鼠心肌细胞缺氧/复氧过程中,PU-MA表达明显升高,其可能通过下调Bcl-2表达及上调Bax表达导致Caspase-3活性增加以介导心肌细胞凋亡。 展开更多
关键词 p53上调凋亡调制物 BH3-only蛋白 缺血/再灌注损伤 缺氧/复氧 心肌细胞 凋亡 小干扰rna
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小干扰RNA抑制宫颈癌Hela细胞株HPV18 E6、E7基因的表达 被引量：4
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作者 王雪莲 逯晓波 +2 位作者 安春丽 姜晶 尹香菊 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第6期545-549,共5页
目的:以人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)18型E6基因为靶点,研究小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对宫颈癌Hela细胞株HPV18基因组中恶性转化基因E6、E7的抑制作用及对细胞内P53蛋白表达的影响。方法:实验分细胞培养液阴... 目的:以人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)18型E6基因为靶点,研究小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对宫颈癌Hela细胞株HPV18基因组中恶性转化基因E6、E7的抑制作用及对细胞内P53蛋白表达的影响。方法:实验分细胞培养液阴性对照组(阴性对照组),无关序列siRNA对照组(无关序列对照组)及转染HPV18 E6-siRNA实验组(siRNA实验组)。设计并合成HPV18 E6-siRNA及无关序列siRNA,转染Hela细胞后,RT-PCR检测转染后48、120 h细胞内HPV18E6、E7mRNA的变化,Western blotting检测转染后48 h细胞内HPV18 E7和P53蛋白的变化。结果:siRNA转染Hela细胞的效率约为85%。siRNA转染后48 h,实验组细胞内HPV18E6、E7mRNA及E7蛋白含量降低,其含量分别为阴性对照组的33.33%、36.78%及33.84%;实验组细胞内P53蛋白含量增加,其含量为阴性对照组的2.194倍。siRNA转染后120 h,实验组细胞HPV18E6、E7mRNA含量恢复为阴性对照组的90.91%、101.60%。结论:HPV18 E6-siRNA体外能明显抑制宫颈癌Hela细胞HPV18E6、E7基因的表达,增加细胞内肿瘤抑制因子P53蛋白的水平。 展开更多
关键词 小干扰rna 宫颈癌细胞 人乳头瘤病毒 E6基因 E7基因 P53
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Txnip基因siRNA慢病毒表达质粒构建及促进猪前体脂肪细胞分化 被引量：4
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作者 岳小婧 于淇 +5 位作者 张晶 窦晓宁 谢晶宇 郭鹏辉 卢建雄 张国华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期457-464,共8页
硫氧还蛋白互作蛋白(thioredoxin interacting protein, Txnip)是一种氧化还原调节蛋白质,与硫氧还蛋白结合并抑制其活性,调节细胞氧化还原状态,影响细胞多种生理过程,然而其在猪脂肪细胞分化中的作用尚不明确。本文设计合成3对靶向猪Tx... 硫氧还蛋白互作蛋白(thioredoxin interacting protein, Txnip)是一种氧化还原调节蛋白质,与硫氧还蛋白结合并抑制其活性,调节细胞氧化还原状态,影响细胞多种生理过程,然而其在猪脂肪细胞分化中的作用尚不明确。本文设计合成3对靶向猪Txnip基因的shRNA寡核苷酸,分别连接于重组慢病毒载体pGLV_3/H_1/GFP+Puro构建siRNA表达质粒。测序验证后,与包装质粒共转染293T细胞,获得滴度1×10~8 pfu/mL的慢病毒干扰质粒。以MOI值100转染原代培养猪前体脂肪细胞,转染率均达80%以上,其中Txnip-shRNA-2转染细胞Txnip基因沉默率达75%。转染Txnip-shRNA-2的猪前体脂肪细胞用成脂分化培养液诱导后,每隔1 d检测细胞成脂分化及相关基因表达。结果发现,其分化比阴性对照质粒转染或未转染细胞显著增强(P<0.05),PPARγ和FAS mRNA表达水平显著提高(P<0.05)。本文构建siRNA慢病毒表达质粒能有效干扰猪Txnip基因表达,Txnip表达沉默可通过上调PPARγ表达促进猪前体脂肪细胞分化。本研究提示,Txnip可能是猪脂肪细胞分化的抑制因子。 展开更多
关键词 硫氧还蛋白互作蛋白 干扰小rna 猪 前体脂肪细胞 分化
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siRNA对胆管癌细胞自分泌运动因子表达的影响 被引量：3
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作者 刘斌 寇昌华 +4 位作者 谢应海 王人颢 李文美 任泽强 李向农 《肝胆胰外科杂志》 CAS 2006年第5期291-293,共3页
目的研究针对自分泌运动因子(autotaxin,ATX)的小干扰RNA(siRNA)对人胆管癌细胞ATX基因表达的影响,探讨RNA干扰技术治疗胆管癌的前景。方法参考人黑色素瘤ENPP2基因序列,设计合成ATX-siRNA及随机阴性对照。在阳离子脂质体的介导下转染... 目的研究针对自分泌运动因子(autotaxin,ATX)的小干扰RNA(siRNA)对人胆管癌细胞ATX基因表达的影响,探讨RNA干扰技术治疗胆管癌的前景。方法参考人黑色素瘤ENPP2基因序列,设计合成ATX-siRNA及随机阴性对照。在阳离子脂质体的介导下转染人胆管癌细胞HCCC-9810。分别于转染后24,48,72h收集细胞,用半定量RT-PCR方法检测转染后ATXmRNA表达的变化,并与对照组及ATX表达抑制剂IL-1β的作用进行比较。结果体外合成的siRNA在转染胆管癌细胞24h后ATXmRNA的表达降低,48h抑制作用最为明显,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.01),并明显强于IL-1β(P<0.01)。结论siRNA可有效地抑制胆管癌细胞ATX的表达,从而有可能阻断ATX对肿瘤细胞运动的促进作用。 展开更多
关键词 sirna 人HCCC-9810胆管癌细胞 ATX 胆管肿瘤
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多靶向RNA干扰技术在基因治疗中的应用与前景 被引量：3
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作者 薛玉文 李铁军 +1 位作者 周家名 陈莉 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期75-81,共7页
RNA干扰(RNA interference,RNAi)通过转录后基因沉默效应特异性抑制靶基因的表达,其沉默机制的高效性、特异性及稳定性使这项技术成为生物医学领域研究基因治疗的重要工具。阐述RNAi技术的特点和RNAi疗法的现状,特别是多靶小干扰RNA(sma... RNA干扰(RNA interference,RNAi)通过转录后基因沉默效应特异性抑制靶基因的表达,其沉默机制的高效性、特异性及稳定性使这项技术成为生物医学领域研究基因治疗的重要工具。阐述RNAi技术的特点和RNAi疗法的现状,特别是多靶小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)目前的发展态势及其各种结构性修饰,通过使用这些结构修饰的siRNA提高基因沉默的效率,将有助于提高疗效。但该技术在广泛应用于临床之前,仍存在一些亟待解决的问题与面临的挑战,需进一步研究。 展开更多
关键词 多靶向 sirna rna干扰(rnaI) 修饰 基因治疗
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