目的构建具有免疫学活性的抗人甲胎蛋白单链抗体ScFv(single chain fragment of variety region,ScFv),为进一步的研究奠定实验基础。方法采用RT-PCR技术,从分泌抗人AFP单克隆抗体的杂交瘤细胞中扩增mAb的VH、VL基因,并进一步将其组装成...目的构建具有免疫学活性的抗人甲胎蛋白单链抗体ScFv(single chain fragment of variety region,ScFv),为进一步的研究奠定实验基础。方法采用RT-PCR技术,从分泌抗人AFP单克隆抗体的杂交瘤细胞中扩增mAb的VH、VL基因,并进一步将其组装成VH-Linker-VL型的ScFv片段。将ScFv片段亚克隆至原核分泌型表达载体pUC19,将pUC19-ScFv纯化质粒转染大肠杆菌BL21并用IPTG诱导表达ScFv蛋白。用SDS-PAGE方法检测ScFv的表达,采用ELISA检测ScFv的亲和活性。结果大肠杆菌BL21可被诱导表达ScFv蛋白。SDS-PAGE法证实ScFv蛋白在细胞包涵体有表达,大小约24 kD。ELISA检测表明,ScFv蛋白经能与重组人AFP纯化抗原结合,并具有抑制亲本单抗与其结合的能力。结论成功构建抗人AFP的ScFv表达载体,并能有效表达出具有免疫学活性的ScFv蛋白。展开更多
文摘目的构建具有免疫学活性的抗人甲胎蛋白单链抗体ScFv(single chain fragment of variety region,ScFv),为进一步的研究奠定实验基础。方法采用RT-PCR技术,从分泌抗人AFP单克隆抗体的杂交瘤细胞中扩增mAb的VH、VL基因,并进一步将其组装成VH-Linker-VL型的ScFv片段。将ScFv片段亚克隆至原核分泌型表达载体pUC19,将pUC19-ScFv纯化质粒转染大肠杆菌BL21并用IPTG诱导表达ScFv蛋白。用SDS-PAGE方法检测ScFv的表达,采用ELISA检测ScFv的亲和活性。结果大肠杆菌BL21可被诱导表达ScFv蛋白。SDS-PAGE法证实ScFv蛋白在细胞包涵体有表达,大小约24 kD。ELISA检测表明,ScFv蛋白经能与重组人AFP纯化抗原结合,并具有抑制亲本单抗与其结合的能力。结论成功构建抗人AFP的ScFv表达载体,并能有效表达出具有免疫学活性的ScFv蛋白。
