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大容量噬菌体抗体库的构建及鉴定 被引量:27
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作者 乔媛媛 王琰 +2 位作者 陈晓穗 王欲晓 化冰 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期194-197,共4页
目的 构建大容量噬菌体单链抗体库 ,从中筛选人源单链抗体 (ScFv)。方法 从正常成人外周血和新生儿脐血分离淋巴细胞 ,用RT PCR扩增轻链可变区基因 (VL)和重链可变区基因(VH) ,通过重叠PCR法将VH 和VL 拼接形成ScFv基因 ,并克隆入噬... 目的 构建大容量噬菌体单链抗体库 ,从中筛选人源单链抗体 (ScFv)。方法 从正常成人外周血和新生儿脐血分离淋巴细胞 ,用RT PCR扩增轻链可变区基因 (VL)和重链可变区基因(VH) ,通过重叠PCR法将VH 和VL 拼接形成ScFv基因 ,并克隆入噬菌体表达载体PDF ,得到ScFv初级噬菌体抗体库。以高MOI超感染cre+ 菌株BS136 5 ,通过loxp cre定位重组系统 ,介导轻重链的组合配对 ,得到大容量抗体库 ,用多种抗原对抗体库进行生物淘筛 ,鉴定抗体库的性能。结果 获得了 6×10 10 的大容量单链噬菌体抗体库。分别用卵清蛋白、胃蛋白酶、铁蛋白、人角蛋白、人TNF α、地高辛等6种抗原进行筛选 ,均得到多样性的特异性噬菌体抗体。结论 经loxp cre定位重组系统在单细胞内重组成功地构建了大容量单链噬菌体抗体库 ,初步尝试对 6种抗原进行筛选均获成功 。 展开更多
关键词 噬菌体抗体库 Loxp-cre重组系统 单链抗体 抗原 大肠杆菌
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四磨汤口服液对胃肠功能影响的实验研究 被引量:23
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作者 邹元宵 陈子渊 吴秀聪 《湖南中医药导报》 1999年第9期36-38,共3页
目的:探讨四磨汤口服液对胃肠功能影响的作用机制。方法:灌胃给药,大鼠给1.9、3.8 和7.6g 生药/kg 剂量,小鼠给2.7、5.4 和10 .8g 生药/kg 剂量。结果:对大鼠胃液量及总酸度有明显的抑制作用,而对胃... 目的:探讨四磨汤口服液对胃肠功能影响的作用机制。方法:灌胃给药,大鼠给1.9、3.8 和7.6g 生药/kg 剂量,小鼠给2.7、5.4 和10 .8g 生药/kg 剂量。结果:对大鼠胃液量及总酸度有明显的抑制作用,而对胃蛋白酶活性无明显影响;对胃排空运动和全胃肠运动均有显著增强作用;对小鼠正常、亢进、缓慢小肠运动有明显增强和提高作用;对小鼠冰点炭末梗阻模型具有较好的治疗作用。结论:从动物实验角度充分支持四磨汤口服液的功能主治,为临床合理用药提供了依据。 展开更多
关键词 四磨汤口服液 胃肠功能 中医药疗法
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肝癌特异性鼠源及人源化单链抗体基因的构建及在大肠杆菌中的表达 被引量:18
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作者 袁清安 俞炜源 黄翠芬 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期86-90,共5页
为探讨一株肝细胞癌特异性鼠源及其人源化单链抗体基因在大肠杆菌中的可溶性表达策略并比较二者对抗原的结合能力,在三种载体中分别以融合、分泌及胞内表达的方式进行了研究,表达产物均以包涵体形式存在;对复性后的单链抗体以细胞ELISA... 为探讨一株肝细胞癌特异性鼠源及其人源化单链抗体基因在大肠杆菌中的可溶性表达策略并比较二者对抗原的结合能力,在三种载体中分别以融合、分泌及胞内表达的方式进行了研究,表达产物均以包涵体形式存在;对复性后的单链抗体以细胞ELISA及竞争抑制流式细胞仪法进行检测,表明人源化单链抗体和鼠源单链抗体有相近的抗原结合能力。结论是:在大肠杆菌中表达的基因工程单链抗体的可溶性可能主要由自身氨基酸一级序列决定;先前的设计所采取的人源化方案没有影响到鼠源抗体的CDR的天然构象。 展开更多
关键词 单链抗体 肝癌 大肠杆菌 免疫原性 可溶性表达
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丙型肝炎病毒非结构蛋白4A人源单链可变区抗体的筛选与鉴定 被引量:19
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作者 钟彦伟 成军 +4 位作者 施双双 夏小兵 王刚 杨继珍 陈菊梅 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期422-424,共3页
目的利用噬菌体表面展示技 术,从半合成人源化单链可变区抗体库中筛选、鉴定丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS4A 的单 链可变区抗体(ScFv)及其编码基因,为抗HCV的细胞内免疫基因治疗研究开辟新途径。方法采用噬菌体表面展示技术,以重组的... 目的利用噬菌体表面展示技 术,从半合成人源化单链可变区抗体库中筛选、鉴定丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS4A 的单 链可变区抗体(ScFv)及其编码基因,为抗HCV的细胞内免疫基因治疗研究开辟新途径。方法采用噬菌体表面展示技术,以重组的HCV非结构蛋白NS4A为包被抗原,从噬菌体单链可变区抗体库中经过3轮“吸附-洗脱-扩增”筛选过 程,获得抗原结合活性较强的HCV NS4A人单链可变区抗体片段阳性克隆,并对其 进行免疫学活性及编码基因序列测定。结果筛选得到 的ScFv片段具有抗HCV NS4A的特异性,编码基因符合人源化单链可变区抗体编码基因的特 点。结论利用噬菌体抗体库技术,成功获得HCV NS4A的特异性人抗体,为进一步研究HCV NS4A的生物学功能及细胞内免疫抗HCV基因治疗方 案奠定基础。 展开更多
关键词 非结构蛋白NS4A 单链抗体 丙型肝炎 HCV
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单链抗体及其在生物医学中的应用 被引量:16
5
作者 马颖 邹全明 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第z1期1-5,共5页
单链抗体是一种小分子基因工程抗体,以其独有的优势在显像定位诊断、靶向治疗和基因治疗等方面展示了乐观的应用前景。本文对单链抗体的构建、表达及在生物医学中的应用作一综述。
关键词 单链抗体(ScFv) 噬菌体抗体库 靶向治疗
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乙肝病毒核心抗原人源单链可变区抗体的筛选 被引量:16
6
作者 钟彦伟 成军 +5 位作者 王刚 田小军 陈新华 李莉 陈菊梅 张玲霞 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期153-154,共2页
目的 筛选、鉴定乙型肝炎病毒 (HBV)核心抗原 (HBcAg)蛋白的人源单链可变区抗体 (ScFv)的编码基因 ,为细胞内表达小分子单链抗体的研究及抗HBV的基因治疗研究奠定基础。方法 采用噬菌体表面展示技术 ,以HBcAg蛋白为固相抗原 ,从噬菌... 目的 筛选、鉴定乙型肝炎病毒 (HBV)核心抗原 (HBcAg)蛋白的人源单链可变区抗体 (ScFv)的编码基因 ,为细胞内表达小分子单链抗体的研究及抗HBV的基因治疗研究奠定基础。方法 采用噬菌体表面展示技术 ,以HBcAg蛋白为固相抗原 ,从噬菌体单链可变区抗体半合成库中经过 5轮“吸附 -洗脱 -扩增”筛选过程 ,获得抗原结合活性较强的HBcAg人源单链可变区抗体阳性克隆 ,并对其进行免疫检测及序列测定。结果 筛选得到的ScFv片段编码基因为 771nt,编码的产物由 2 5 7个氨基酸残基组成 ,具有典型的轻链和重链可变区结构特点以及与HBcAg结合的特异性。结论 利用噬菌体抗体库技术成功地获得了HBcAg人源单链可变区抗体的编码基因 ,并获得了可溶性单链抗体的表达。 展开更多
关键词 噬菌体展示技术 乙型肝炎病毒 核心抗原 亲和筛选 噬菌体抗体
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乙型肝炎病毒表面抗原人源单链可变区抗体基因的克隆与鉴定 被引量:15
7
作者 成军 钟彦伟 +9 位作者 施双双 倪勤 夏小兵 董菁 王刚 刘友昭 王琳 刘妍 杨继珍 陈菊梅 《肝脏》 2000年第3期130-132,共3页
目的 筛选、鉴定抗乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原 (HBsAg)蛋白的人源单链可变区抗体 (ScFv)的编码基因 ,为细胞内表达小分子单链抗体的研究及抗HBV的基因治疗研究奠定基础。方法 采用噬菌体表面展示技术 ,以氯化铯超速离心法纯化的HBsA... 目的 筛选、鉴定抗乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原 (HBsAg)蛋白的人源单链可变区抗体 (ScFv)的编码基因 ,为细胞内表达小分子单链抗体的研究及抗HBV的基因治疗研究奠定基础。方法 采用噬菌体表面展示技术 ,以氯化铯超速离心法纯化的HBsAg蛋白为固相抗原 ,从噬菌体单链可变区抗体半合成库中经过 5轮“吸附 洗脱 扩增”淘洗过程 ,获得抗原结合活性较强的HBsAg人源单链可变区抗体阳性克隆 ,并对其进行免疫检测及序列测定。 结果 筛选得到的ScFv片段编码基因为 789nt,编码的产物由 2 62个氨基酸残基组成 ,具有典型的轻链和重链可变区结构特点以及与HBsAg结合的特异性。结论 利用噬菌体抗体库技术 ,成功地获得了HBsAg人源单链可变区抗体的编码基因 。 展开更多
关键词 乙型肝炎 HBSAG SCFV 编码基因 噬菌体抗体
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导向性纤溶酶原激活剂的研究 被引量:8
8
作者 杨嘉树 茹炳根 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1998年第5期429-433,共5页
溶栓疗法是血栓治疗中的一种重要措施.研制具有高选择性的导向性纤溶酶原激活剂有着重大的理论意义和实用价值.采用血栓特异的单克隆抗体及其片段来介导溶栓剂已展示出较好的应用前景.双功能抗体以及同时具有抗栓,抗凝活性的小肽正... 溶栓疗法是血栓治疗中的一种重要措施.研制具有高选择性的导向性纤溶酶原激活剂有着重大的理论意义和实用价值.采用血栓特异的单克隆抗体及其片段来介导溶栓剂已展示出较好的应用前景.双功能抗体以及同时具有抗栓,抗凝活性的小肽正逐渐拓宽人们有关导向分子研制的视野. 展开更多
关键词 纤溶酶原激活剂 血栓 纤维蛋白 抗体导向 导向性
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单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的制备 被引量:7
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作者 许静 刘俊霞 +1 位作者 李侠 宋增璇 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期704-706,共3页
目的 :制备单链抗体 碱性磷酸酶融合蛋白。方法 :把碱性磷酸酶编码区插入pSTE2 8E5质粒DNA ,用scFvC6 6的重链和轻链可变区DNA取代scFv 8E5的重链和轻链可变区DNA ,构成表达载体pSTE2 C6 6 Ap在大肠杆菌中表达 ,用聚丙烯酰胺凝胶电... 目的 :制备单链抗体 碱性磷酸酶融合蛋白。方法 :把碱性磷酸酶编码区插入pSTE2 8E5质粒DNA ,用scFvC6 6的重链和轻链可变区DNA取代scFv 8E5的重链和轻链可变区DNA ,构成表达载体pSTE2 C6 6 Ap在大肠杆菌中表达 ,用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹法分析产物活性。结果 :获得一个分子量为 75kD的scFvC6 6 Ap融合蛋白 ,可结合来自KG1a细胞裂解物中的一个分子量约 6 0kD的蛋白质带 ,其结合功能可通过其碱性磷酸酶活性直接测定。结论 :建立了一个用大肠杆菌制备单链抗体 碱性磷酸酶融合蛋白的方法 ,它可能取代常规的碱性磷酸酶标记方法而用于免疫检测。 展开更多
关键词 单链抗体 碱性磷酸酶 融合蛋白
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丙型肝炎病毒非结构蛋白 3人源单链可变区抗体的筛选与鉴定(英文) 被引量:10
10
作者 成军 钟彦伟 +3 位作者 刘妍 董菁 杨继珍 张玲霞 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期246-249,共4页
目的筛选、鉴定抗丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白 NS3的人单链可变区抗体 (Sc Fv) ,以解决人体内应用鼠单抗时的免疫原性问题 ,为进行抗 HCV的基因治疗研究开辟新途径。方法采用噬菌体表面展示技术 ,以重组的 HCV非结构蛋白 NS3为固相抗... 目的筛选、鉴定抗丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白 NS3的人单链可变区抗体 (Sc Fv) ,以解决人体内应用鼠单抗时的免疫原性问题 ,为进行抗 HCV的基因治疗研究开辟新途径。方法采用噬菌体表面展示技术 ,以重组的 HCV非结构蛋白 NS3为固相抗原 ,从噬菌体单链可变区抗体库中经过 5轮“吸附 -洗脱 -扩增”筛选过程 ,获得抗原结合活性较强的 HCVNS3人单链可变区抗体的阳性克隆 ,并对其进行免疫检测及序列测定。结果筛选出来的 Sc Fv片段具有抗 NS3的特异性。证实利用噬菌体抗体库技术 ,可以成功地获得 HCV NS3人单链抗体 Sc Fv的编码基因。结论筛选获得了 HCV非结构蛋白 NS3的特异性单链抗体的编码基因。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 噬菌体抗体 SCFV 非结构蛋白NS3
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抗Ⅳ型胶原酶单链抗体的表达及其对肿瘤细胞侵袭的抑制作用 被引量:5
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作者 唐勇 甄永苏 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第8期801-805,共5页
目的:制备抑制肿瘤细胞侵袭转移的单链抗体片段,用于构建小型化的免疫偶联物。方法:应用噬菌体呈现技术,以产生抗Ⅳ型胶原酶单抗的杂交瘤细胞为基础克隆构建单链抗体(scFv)基因。以表达质粒pET30a+为载体在大肠杆菌中进行诱导表达。ELIS... 目的:制备抑制肿瘤细胞侵袭转移的单链抗体片段,用于构建小型化的免疫偶联物。方法:应用噬菌体呈现技术,以产生抗Ⅳ型胶原酶单抗的杂交瘤细胞为基础克隆构建单链抗体(scFv)基因。以表达质粒pET30a+为载体在大肠杆菌中进行诱导表达。ELISA法测定表达产物的免疫反应性,明胶酶谱法测定表达产物对靶酶活性的影响。BoydenChamber测定表达产物对肿瘤细胞侵袭的影响。结果:表达的单链抗体以包涵体形式存在,经变性和复性后,检测表明表达产物保留了对抗原的免疫反应性,对高转移性人肺癌PG细胞分泌的Ⅳ型胶原酶有抑制作用。同时在体外能抑制肿瘤细胞的侵袭,抑制率与表达产物的剂量浓度相关,1mg/ml浓度的片段具有68%的抑制率。结论:运用基因工程手段获得的单链抗体片段保留了亲本抗体的若干特性,对Ⅳ型胶原酶有抑制作用,并能抑制肿瘤细胞的侵袭。 展开更多
关键词 单链抗体 Ⅳ型胶原酶 工程抗体 肿瘤侵袭
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抗松材线虫纤维素酶单链抗体库的构建及筛选 被引量:3
12
作者 田旺 张奇 +1 位作者 杨文博 白钢 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期900-905,共6页
构建鼠源性松材线虫纤维素酶(Bursaphelenchusxylophiluscellulase,BXC)的噬菌体单链抗体库,从中筛选特异性BXC的单链抗体。以BXC为抗原免疫BALBC小鼠,从脾脏提取总RNA,用RTPCR技术扩增小鼠抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因。经重叠PCR... 构建鼠源性松材线虫纤维素酶(Bursaphelenchusxylophiluscellulase,BXC)的噬菌体单链抗体库,从中筛选特异性BXC的单链抗体。以BXC为抗原免疫BALBC小鼠,从脾脏提取总RNA,用RTPCR技术扩增小鼠抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因。经重叠PCR(SOEPCR)在体外将VH和VL连接成单链抗体(scFv)基因,并克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,电转化至大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体超感染,成功构建了库容为5×104的AntiBXC单链抗体库,并从该抗体库中初步筛选到了特异性识别BXC的噬菌体单链抗体scFv。将表面展示单链抗体的单克隆噬菌体转化大肠杆菌HB2151进行可溶性表达,SDSPAGE及Westernblot分析结果显示,可溶性scFv获得表达,且与BXC具有结合活性,为松材线虫的检验检疫以及病理学研究奠定了基础。 展开更多
关键词 松材线虫 纤维素酶 单链抗体 噬菌体抗体库 筛选
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大容量人源单链抗体库构建中轻链重链可变区的连接 被引量:4
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作者 张志超 胡学军 +1 位作者 包永明 安利佳 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期472-474,共3页
目的单链抗体库的构建过程中 ,多采用轻链可变区 (VL)、重链可变区 (VH)、和 linker 3条片段重叠延伸拼接法 (SOE)进行连接。为了优化抗体库的多样性 ,提高效率 ,探讨了新的连接方法。方法通过不对称 PCR制备单链 DNA,再俩俩连接 ,得到... 目的单链抗体库的构建过程中 ,多采用轻链可变区 (VL)、重链可变区 (VH)、和 linker 3条片段重叠延伸拼接法 (SOE)进行连接。为了优化抗体库的多样性 ,提高效率 ,探讨了新的连接方法。方法通过不对称 PCR制备单链 DNA,再俩俩连接 ,得到单链抗体 (Sc Fv)基因。分别将 SOE法及不对称 PCR法连接得到的 Sc Fv基因与载体连接 ,转化 E.coli TG1,构建抗体库。结果后者只需 2 5次连接反应 ,78次电击转化 ,既可达到 1× 10 1 0库容量。结论可以认为新方法具有更高的基因构建效率 ,并有效提高了抗体库的多样性。 展开更多
关键词 单链抗体 抗体库 不对称PCR 多样性
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抗人HBsAg单链抗体基因的构建及其在COS-7细胞中的表达 被引量:5
14
作者 温伟红 赵晶 +4 位作者 于翠娟 许彦鸣 金明 王成济 杨安钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期163-167,共5页
目的 :构建抗人HBsAg单链抗体基因 ,并分析其在COS 7细胞中的表达。方法 :以从噬菌体抗体库中筛选的抗HBsAg的Fab抗体基因为模板 ,分别扩增其轻、重链可变区 (VL、VH)基因 ,通过重组PCR方法将轻、重链可变区基因用连接肽(Gly4Ser) 3的... 目的 :构建抗人HBsAg单链抗体基因 ,并分析其在COS 7细胞中的表达。方法 :以从噬菌体抗体库中筛选的抗HBsAg的Fab抗体基因为模板 ,分别扩增其轻、重链可变区 (VL、VH)基因 ,通过重组PCR方法将轻、重链可变区基因用连接肽(Gly4Ser) 3的编码序列连接 ,并引入前导肽编码序列 ,构建具有L VH Linker VL 结构的单链抗体基因。将所构建的单链抗体基因克隆入绿色荧光蛋白 (GFP)融合表达载体pEGFP N3,并转染COS 7细胞进行表达。结果 :经测序表明 ,前导肽、连接肽、VL 及VH 的序列正确。酶切鉴定证实 ,成功地构建了GFP基因融合表达载体。瞬时转染COS 7细胞后 ,通过荧光显微镜观察证实有ScFv融合蛋白的表达。转染细胞的培养上清浓缩后 ,进行SDS PAGE及Westernblot分析 ,可检出ScFv融合蛋白的分泌性表达。培养上清的间接ELISA检测证实 ,所表达的单链抗体具有与HBsAg结合的特异性。结论 :成功地构建了抗人HBsAg单链抗体基因 ,并可在COS 展开更多
关键词 乙型肝炎 HBSAG 单链抗体基因 COS-7细胞 基因表达
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单链抗体的研究进展及其在妇科肿瘤中的应用 被引量:7
15
作者 杜辉 王健 辛晓燕 《第四军医大学学报》 2000年第3期S031-S033,共3页
单链抗体 (Sc Fv)是用基因工程方法将抗体重链可变区 (VH)和轻链可变区 (VL)通过一段连接肽 (L inker)连接而成的重组蛋白 ,是保持了亲本抗体的抗原亲和活性和特异性的最小功能性抗体片段 .与完整抗体 Ig G及抗体 Fab段相比 ,具有在非... 单链抗体 (Sc Fv)是用基因工程方法将抗体重链可变区 (VH)和轻链可变区 (VL)通过一段连接肽 (L inker)连接而成的重组蛋白 ,是保持了亲本抗体的抗原亲和活性和特异性的最小功能性抗体片段 .与完整抗体 Ig G及抗体 Fab段相比 ,具有在非靶向组织中滞留时间短、免疫原性低、血液清除快、肿瘤穿透力强、可在细菌中很经济地生产并可用基因工程的方法构建与其他效应分子连接的抗肿瘤融合蛋白等优点 .因此 Sc Fv成为将药物、毒素、放射性毒素导向肿瘤的很有价值的分子 。 展开更多
关键词 单链抗体 妇科肿瘤 诊断 治疗
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噬菌体抗体库技术应用中的几个问题及其对策 被引量:5
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作者 侯云霞 董文其 王萍 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第4期366-368,共3页
噬菌体抗体库技术已广泛应用于抗体工程研究领域,但在几个主要环节中(如构建、筛选及表达)仍存在一些尚待解决的具体问题,本文旨在探讨所遇问题及其解决方案。
关键词 噬菌体抗体库 单链抗体 构建 筛选
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Construction and Expression of a Single Chain Antibody Mimicing Human Ovarian Cancer Antigen CA125 被引量:5
17
作者 Aidong Li Zheng Li +2 位作者 Yinghong Wang Yongming Zhang Jie Ma 《Cellular & Molecular Immunology》 SCIE CAS CSCD 2006年第1期59-62,共4页
One concept for immune therapy of cancer involves induction of antigen mimic antibodies to trigger the immune response against tumor cells. Anti-idiotypic antibodies directed against the antigen-binding site of antibo... One concept for immune therapy of cancer involves induction of antigen mimic antibodies to trigger the immune response against tumor cells. Anti-idiotypic antibodies directed against the antigen-binding site of antibodies specific for tumor antigen may functionally and even structurally mimic antigen and induce anti-anti-idiotypic immune response. Monoclonal antibody W J02 is one of such anti-idiotypic antibodies, which contains internal image of CA125. In order to improve the immunospecificity of mAb WJ02, we constructed a single chain of mAb WJ02 in Vl-linker-Vh orientation. The scFv-WJ02, could be expressed and secreted in the recombinant Pichia pastoris system. The secreted scFv protein with a molecular weight of 30 kD retained the biological activity of mAb WJ02, which was proved by a direct binding assay and inhibition experiment. Our results indicated that the scFv-WJ02 could be used as a possible tool for idiotypic therapy against ovarian cancer, which might enhance the possibility of eliminating nonspecific responses induced by mAb WJ02. 展开更多
关键词 ANTI-IDIOTYPE single chain antibody P. pastoris
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抗人卵巢癌×抗人CD3双特异性单链抗体的构建、表达及复性研究 被引量:3
18
作者 方敏 赵瑞 +4 位作者 李骅 蒋欣 尹长城 林晴 黄华 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2002年第11期47-50,共4页
构建了抗人卵巢癌×抗人CD3双特异性单链抗体 (scBsAb) ,在大肠杆菌中得到表达。用稀释复性 ,缓慢透析复性和凝胶过滤层析复性三种方法对scBsAb表达形成的包涵体进行复性研究表明 ,凝胶过滤层析复性能有效抑制蛋白的聚集。ELISA检... 构建了抗人卵巢癌×抗人CD3双特异性单链抗体 (scBsAb) ,在大肠杆菌中得到表达。用稀释复性 ,缓慢透析复性和凝胶过滤层析复性三种方法对scBsAb表达形成的包涵体进行复性研究表明 ,凝胶过滤层析复性能有效抑制蛋白的聚集。ELISA检测显示 ,复性后的scBsAb具有较高活性 ,能与相应抗原特异结合。 展开更多
关键词 抗人卵巢癌 抗人CD3 双特异性单链抗体 包涵体 复性 基因表达 肿瘤免疫治疗
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脑药物转运载体——抗转铁蛋白受体单链抗体的克隆表达及鉴定 被引量:4
19
作者 颜冰 黄培堂 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期303-307,共5页
为构建特异性的脑药物转运载体 ,分段合成了抗大鼠转铁蛋白受体的单链抗体基因 (Ox2 6 scfv) .经重叠PCR拼接成完整片段 ,克隆入pUC19载体中 ,测序正确后克隆到大肠杆菌表达载体pET 15b E .tag上 .IPTG诱导 ,表达产物分子量为 2 9kD ,... 为构建特异性的脑药物转运载体 ,分段合成了抗大鼠转铁蛋白受体的单链抗体基因 (Ox2 6 scfv) .经重叠PCR拼接成完整片段 ,克隆入pUC19载体中 ,测序正确后克隆到大肠杆菌表达载体pET 15b E .tag上 .IPTG诱导 ,表达产物分子量为 2 9kD ,约占菌体总蛋白量的 4 0 % .包涵体经 6mol L盐酸胍变性后 ,过SephacrylS 30 0HR分子筛柱复性蛋白 .免疫酶染色实验表明 ,该单链抗体能与转铁蛋白受体特异性结合 。 展开更多
关键词 药物转运载体 抗转铁蛋白受体 克隆表达 鉴定 单链抗体 血脑屏障
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人抗HBsAg单链抗体/鱼精蛋白截短体融合蛋白基因的构建、表达及活性鉴定 被引量:5
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作者 孟艳玲 温伟红 +7 位作者 薛茜 张勇 张巍 鲍炜 任君琳 贾林涛 王成济 杨安钢 《第四军医大学学报》 北大核心 2006年第15期1349-1352,共4页
目的:构建人抗HBsAg单链抗体(ScFv)/鱼精蛋白截短体(truncated protam ine,tP)融合基因,在大肠杆菌中进行表达纯化并分析ScFv/tP融合蛋白的活性.方法:设计引物扩增人抗HBsAg ScFvHBs15基因,在其3′端引物引入tP的编码基因,PCR扩增获得Sc... 目的:构建人抗HBsAg单链抗体(ScFv)/鱼精蛋白截短体(truncated protam ine,tP)融合基因,在大肠杆菌中进行表达纯化并分析ScFv/tP融合蛋白的活性.方法:设计引物扩增人抗HBsAg ScFvHBs15基因,在其3′端引物引入tP的编码基因,PCR扩增获得ScFv/tP融合基因,将其克隆入原核表达载体pET-32 a后,在大肠杆菌BL2 l(DE3)LysS内诱导表达.表达产物经SDS-PAGE及W estern b lot鉴定后,用N i-NTA螯合层析介质纯化.间接ELISA分析ScFv/tP融合蛋白的亲和活性,凝胶迁移阻滞实验检测ScFv/tP融合蛋白与DNA结合的情况.结果:成功获得人抗HBsAg ScFv/tP融合基因,经IPTG诱导后在大肠杆菌中表达,表达的ScFv/tP融合蛋白不仅保持了与HBsAg结合的能力,同时具有DNA结合活性.结论:ScFv与tP融合后,同时具有与抗原和DNA结合的活性,为该ScFv的进一步应用奠定了基础. 展开更多
关键词 单链抗体 肝炎表面抗原 乙型 鱼精蛋白类
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