半定量RT-PCR检测细胞因子表达的研究 被引量：11

1

作者 林仁勇 丁剑冰 +5 位作者 温浩 熊海波 王笑峰 陈新华 张琰 陈志芳 《新疆医科大学学报》 CAS 2003年第5期427-429,共3页

目的 :建立一种客观、敏感的检测IL 2 /IL 4细胞因子基因表达变化的方法。 方法 :采用TRIzol试剂提取免疫排斥 /免疫耐受大鼠脾脏组织总RNA ,分光光度计法定量。取 2 μg总RNA ,采用RT PCR法逆转录 扩增IL 2、IL 4和内参照 β actincDN... 目的 :建立一种客观、敏感的检测IL 2 /IL 4细胞因子基因表达变化的方法。 方法 :采用TRIzol试剂提取免疫排斥 /免疫耐受大鼠脾脏组织总RNA ,分光光度计法定量。取 2 μg总RNA ,采用RT PCR法逆转录 扩增IL 2、IL 4和内参照 β actincDNA ,扩增产物经电泳分离后 ,用凝胶图像分析仪照相和扫描分析 ,检测其相对表达量。 结果 :RT PCR产物经电泳后 ,β actin、IL 2和IL 4分别在 2 2 6bp、342bp和 332bp处出现明显条带 ,与预定条带大小相一致 ;免疫耐受组IL 4与免疫排斥组IL 2的表达有明显差异 ,在免疫耐受组中IL 4表达增高 ,而在免疫排斥组中IL 2表达增高 ,内参照 β actin扩增条带亮度在两组中相同 ,PCR产物量与扩增初始模板量之间存在良好的对应关系。 结论 :半定量RT PCR检测是一种从少量细胞中快速、简便。 展开更多

关键词 半定量RT-PCR 检测 细胞因子 基因表达 IL-2 IL-4

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CDC4及c-Myc在胃癌中的表达及临床意义 被引量：8

2

作者 黄国全 黎晖 +2 位作者 张才全 吴泉峰 孙建华 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期933-939,共7页

背景与目的:胃癌是全世界多发恶性肿瘤之一,其死亡率及术后复发率高。目前治疗胃癌的手段主要是手术及放化疗,但总体效果欠佳。随着经济及分子生物学的飞速发展,胃癌的早期诊断及分子靶向治疗成为全世界研究的热点。胃癌的发生、发展与... 背景与目的:胃癌是全世界多发恶性肿瘤之一,其死亡率及术后复发率高。目前治疗胃癌的手段主要是手术及放化疗,但总体效果欠佳。随着经济及分子生物学的飞速发展,胃癌的早期诊断及分子靶向治疗成为全世界研究的热点。胃癌的发生、发展与抑癌基因的失活和癌基因的过表达相关。CDC4/Fbxw7为重要的抑癌基因。本实验通过研究CDC4(F框/WD-40域蛋白7,也称为FBXW7、Sel-10、Ago)及c-Myc蛋白在人胃癌组织中的表达,分析两者与胃癌临床病理特征的关系。方法:应用半定量逆转录聚合酶链反应(semiquantitative reverse transcription polymerase chain reaction,sRT-PCR)、免疫组化及蛋白[质]印迹法(Western blot)检测40例胃癌组织、癌旁组织及正常胃黏膜组织中CDC4、c-Myc的mRNA及蛋白的表达,并分析两者之间的相关性及与患者病理特征之间的关系。结果:胃癌中CDC4蛋白的表达明显低于癌旁组织及正常组织(P<0.05)。而c-Myc蛋白的表达在胃癌中显著增高,阳性率同癌旁组织及正常组织比较,差异有统计学意义(P<0.05)。CDC4、c-Myc蛋白及其mRNA的表达与胃癌患者的性别、年龄、肿瘤部位无关,而与肿瘤浸润深度、分化程度、TNM分期、有无淋巴结转移及有无远处转移有关(P<0.05)。CDC4和c-Myc在mRNA水平和蛋白水平的表达均呈负相关(P<0.05)。结论:CDC4在胃癌中表达量显著下降,可能与胃癌的浸润、分化及转移相关,其表达缺失可能导致c-Myc的过度表达。CDC4可能成为早期诊断、判断胃癌预后及浸润转移的生物学指标。 展开更多

关键词 CDC4 C-MYC 免疫组化 半定量逆转录聚合酶链反应 蛋白[质]印迹法

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瘢痕疙瘩和增生性瘢痕中胸腺素β4基因表达变化及其意 被引量：7

3

作者 聂芳菲 吴江群 秦泽莲 《中国危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期80-83,共4页

目的　观察病理性瘢痕中胸腺素β4 (TMSB4 ) m RNA的表达水平 ,探讨其表达水平与病理性瘢痕形成的关系。方法　以组织块培养法于体外培养原代成纤维细胞。采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)技术 ,比较瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮... 目的　观察病理性瘢痕中胸腺素β4 (TMSB4 ) m RNA的表达水平 ,探讨其表达水平与病理性瘢痕形成的关系。方法　以组织块培养法于体外培养原代成纤维细胞。采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)技术 ,比较瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮肤组织及其培养的 3组成纤维细胞中 TMSB4 m RNA表达水平的变化。结果　在上述 3种组织中 ,TMSB4 m RNA在瘢痕疙瘩中的表达量显著少于在增生性瘢痕和正常皮肤中的表达 (P均 <0 .0 1) ,瘢痕疙瘩 TMSB4 m RNA表达的平均值比增生性瘢痕减少 6 6 .98% ,比正常皮肤减少 6 2 .4 8%。在上述 3种组织培养的成纤维细胞中 ,TMSB4 m RNA在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达量显著少于增生性瘢痕 ,平均减少 2 7.13% (P<0 .0 1) ;比在正常皮肤成纤维细胞中的表达平均减少 16 .0 7% ,但差异无显著性。结论　 TMSB4 m RNA在瘢痕疙瘩组织及其培养的成纤维细胞中的表达说明其与瘢痕疙瘩形成密切相关 ;TMSB4 m RNA在瘢痕疙瘩中表达减少可能是瘢痕疙瘩发病的重要致病因素之一。 展开更多

关键词 瘢痕疙瘩 增生性瘢痕 胸腺素Β4 基因表达 TMSB4 皮肤组织

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钙化血管平滑肌细胞肾上腺髓质素及其受体系统的基因表达上调 被引量：5

4

作者 潘春水 齐永芬 +4 位作者 王述姮 赵晶 卜定方 李桂忠 唐朝枢 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 2004年第3期254-258,共5页

探讨钙化的血管平滑肌细胞肾上腺髓质素生成和肾上腺髓质素受体系统一降钙素受体样受体和受体活性修饰蛋白基因表达的改变及其病理意义。采用β-甘油磷酸盐诱导培养的大鼠血管平滑肌细胞钙化;放射免疫法测定血管平滑肌细胞分泌的肾上腺... 探讨钙化的血管平滑肌细胞肾上腺髓质素生成和肾上腺髓质素受体系统一降钙素受体样受体和受体活性修饰蛋白基因表达的改变及其病理意义。采用β-甘油磷酸盐诱导培养的大鼠血管平滑肌细胞钙化;放射免疫法测定血管平滑肌细胞分泌的肾上腺髓质素含量;半定量逆转录聚合酶链反应测定细胞肾上腺髓质素、降钙素受体样受体和受体活性修饰蛋白的mRNA水平;原子吸收分光光度计测定细胞钙含量;碱性磷酸酶试剂盒测定血管平滑肌细胞碱性磷酸酶活性;β液体闪烁计数仪测定45Ca2+放射活性。结果发现,与非钙化血管平滑肌细胞比较,钙化血管平滑肌细胞内钙含量、45Ca2+摄入及碱性磷酸酶活性分别增加118％、174％和7倍(P<0.01);钙化细胞肾上腺髓质素分泌量增高99％(P<0.01),肾上腺髓质素、降钙素受体样受体、受体活性修饰蛋白2和3的mRNA水平分别增加78％、93.7％、91.8％和109.5％(P均<0.01)。肾上腺髓质素与降钙素受体样受体、受体活性修饰蛋白2和3的mRNA水平呈正相关,其相关系数分别为0.83、0.92和0.93(P均<0.01)。结果提示,血管平滑肌细胞肾上腺髓质素 旁/自分泌功能改变可能参与血管钙化的调节过程。 展开更多

关键词 病理学与病理生理学 血管钙化与活性肽 半定量逆转录聚合酶链反应 血管平滑肌细胞 肾 上腺髓质素 降钙素受体样受体 受体活性修饰蛋白

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XIAP在成人急性淋巴细胞白血病中的表达及其意义 被引量：3

5

作者 汪清铭 李鸿鹏 +1 位作者 杨桂玲 王东宁 《南昌大学学报（医学版）》 CAS 2010年第1期47-49,共3页

目的探讨X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在成人急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及其临床意义。方法选取63例ALL患者,初治者37例[B-ALL29例,T-ALL8例;ph(+)-ALL12例,ph(-)-ALL25例]为初治组,血液学完全缓解(CR)者15例(CR组),复发者11例(复发组... 目的探讨X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在成人急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及其临床意义。方法选取63例ALL患者,初治者37例[B-ALL29例,T-ALL8例;ph(+)-ALL12例,ph(-)-ALL25例]为初治组,血液学完全缓解(CR)者15例(CR组),复发者11例(复发组)。应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测ALL骨髓标本XIAP基因表达水平,以20例非恶性血液病患者骨髓标本为对照组。结果初治组XIAP基因表达水平高于CR组和对照组(P<0.05),与复发组相比差异无统计学意义(P>0.05);B-ALL患者XIAP表达水平与T-ALL比较差异无统计学意义(P>0.05);ph(+)-ALL患者XIAP表达水平高于ph(-)-ALL(P<0.05);初治组XIAP高表达者较低表达者CR率明显下降(P<0.05)。结论ALL患者XIAP基因高表达,提示XIAP可能通过抑制白血病细胞凋亡参与了ALL的发生发展,为ALL的治疗提供了新思路。XIAP高表达可能是急性淋巴细胞白血病预后不良的指标之一。 展开更多

关键词 急性淋巴细胞白血病 X连锁凋亡抑制蛋白 半定量逆转录-聚合酶链反应

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四株人结肠腺癌细胞CEA表达水平的检测及其意义 被引量：3

6

作者 王立峰 刘宝瑞 +3 位作者 钱晓萍 殷海涛 禹立霞 魏嘉 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2006年第30期2933-2937,共5页

目的:检测四株结肠癌细胞株中癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)的表达,并探讨其意义．方法:四株人结肠腺癌细胞(LS174T,LoVo, SW480及HCT-8)分别应用ELISA法测定细胞培养上清中CEA含量;免疫组化检测细胞CEA蛋白表达;半定量RT-PC... 目的:检测四株结肠癌细胞株中癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)的表达,并探讨其意义．方法:四株人结肠腺癌细胞(LS174T,LoVo, SW480及HCT-8)分别应用ELISA法测定细胞培养上清中CEA含量;免疫组化检测细胞CEA蛋白表达;半定量RT-PCR检测细胞CEA mRNA表达丰度．结果:LS174T和SW480细胞在蛋白和mRNA水平均可检测到CEA的表达且前者表达量高于后者(细胞培养上清中CEA含量:1050±25．0 ng／107 cells vs 66±5．6 ng／107 cells,P<0．0001;半定量检测CEA mRNA表达丰度:1．137±0．155 vs 0．399±0．135,P=0．003);而LoVo细胞在蛋白和和mRNA水平均未检测到CEA的表达:HCT-8细胞免疫组化有弱阳性染色．结论:四株结肠癌细胞株的实际CEA表达情况与既往文献报道不尽相同．这种细胞株CEA表达特性的改变有可能影响其体外生物学行为从而导致实验结果的不确定性． 展开更多

关键词 癌胚抗原 人结肠癌细胞 半定量RT—PCR 免疫组化

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乳腺癌耐药蛋白基因在乳腺癌中的表达及其与化疗疗效的关系 被引量：2

7

作者 杨海燕 童彩玲 纪太芳 《广州中医药大学学报》 CAS 2009年第6期523-525,共3页

【目的】探讨乳腺癌患者的乳腺癌耐药蛋白(BCRP)基因表达及其与化疗疗效的关系。【方法】采用半定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测60例行新辅助化疗CEF方案的女性乳腺癌患者乳腺癌组织的BCRP基因,根据化疗前BCRP基因表达情况,... 【目的】探讨乳腺癌患者的乳腺癌耐药蛋白(BCRP)基因表达及其与化疗疗效的关系。【方法】采用半定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测60例行新辅助化疗CEF方案的女性乳腺癌患者乳腺癌组织的BCRP基因,根据化疗前BCRP基因表达情况,将60例患者分为阳性组及阴性组,比较2组间的疗效,观察BCRP基因表达与化疗疗效的关系。【结果】60例乳腺癌患者中BCRP基因阳性表达17例,阳性表达率为28.3%(17/60)。BCRP基因阳性组患者总缓解11例,缓解率(64.7%)明显低于阴性组(93.0%),两组比较差异有显著性意义(P<0.05)。【结论】BCRP基因高表达患者采用CEF方案化疗效果较差,BCRP基因的表达水平可以作为预测化疗效果的一个重要参考指标。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤/药物疗法 乳腺癌耐药蛋白基因 半定量逆转录一聚合酶链反应

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扁蓿豆MrERF1的转录激活活性、亚细胞定位及表达分析 被引量：2

8

作者 雷雨晴 张业猛 王海庆 《草业科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1119-1127,共9页

乙烯应答因子(ethylene responsive factor,ERF)广泛存在于植物中,在植物生长、发育和逆境胁迫响应的调节中具有重要作用。本研究根据扁蓿豆(Medicago ruthenica)低温胁迫转录组测序信息,设计特异性引物,利用反转录聚合酶链式反应(rever... 乙烯应答因子(ethylene responsive factor,ERF)广泛存在于植物中,在植物生长、发育和逆境胁迫响应的调节中具有重要作用。本研究根据扁蓿豆(Medicago ruthenica)低温胁迫转录组测序信息,设计特异性引物,利用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术克隆了一个受低温胁迫诱导表达的ERF转录因子基因MrERF1。序列分析表明,MrERF1基因包含了一个948 bp的开放阅读框,编码由316个氨基酸组成的序列中含有一个高度保守的AP2结构域,具有典型的ERF转录因子特征。遗传进化分析表明其与蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)MtABR1蛋白的同源性最高。构建表达MrERF1融合增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的载体,本氏烟草(Nicotiana benthamiana)叶片下表皮细胞瞬时表达结果证明Mr ERF1蛋白定位于细胞核。结果表明,构建pGBKT7-MrERF1载体转化AH109酵母感受态细胞具有转录激活活性。对MrERF1在不同组织中的表达分析发现,该基因在扁蓿豆的茎、叶、芽和花序中均有表达,但在根中不表达。进一步分析发现,MrERF1基因的转录与光周期和生物节律无关。此外,MrERF1的表达受高盐、干旱、水淹、低温和脱落酸(abscisic acid,ABA)诱导。本研究表明,MrERF1能够响应多种非生物胁迫,为进一步分析MrERF1的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 扁蓿豆 ERF转录因子 亚细胞定位 转录激活 表达分析 半定量反转录聚合酶链式反应 非生物胁迫

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水稻OsNHO1基因cDNA序列分离及表达分析 被引量：1

9

作者 高志亮 肖晓蓉 +4 位作者 陈艳 黎秀琼 符秀梅 林道哲 陈银华 《热带生物学报》 2014年第1期30-35,共6页

OsNHO1是一种甘油激酶,受多种因素的诱导,在植物先天免疫反应中起着重要的作用。笔者采用同源序列法,根据已报道的拟南芥NHO1基因序列结合水稻基因组测序结果,筛选水稻OsNHO1基因,采用RT-PCR获得水稻OsNHO1基因全长cDNA(1 590 bp,529AA)... OsNHO1是一种甘油激酶,受多种因素的诱导,在植物先天免疫反应中起着重要的作用。笔者采用同源序列法,根据已报道的拟南芥NHO1基因序列结合水稻基因组测序结果,筛选水稻OsNHO1基因,采用RT-PCR获得水稻OsNHO1基因全长cDNA(1 590 bp,529AA),并通过半定量RT-PCR方法分析OsNHO1基因在SA,PXO99刺激下的表达模式,结果显示OsNHO1基因的表达受SA,PXO99的诱导,为进一步研究OsNHO1的具体功能和作用机理奠定了基础。 展开更多

关键词 白叶枯病 植物先天免疫反应 非寄主抗性 OsNHO1基因 半定量RT-PCR

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大鼠急性肺栓塞后hnRNP-E1的表达及胶原代谢的变化 被引量：1

10

作者 李圣青 欧阳海峰 +4 位作者 刘阿茹 简文 遆新宇 任新玲 赵峰 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第20期1968-1971,共4页

目的研究大鼠急性肺栓塞模型肺组织中异源性核糖核蛋白E1(heterogeneous nuclear ribonucleoprote E1,hnRNP-E1)的表达变化及其对胶原代谢的影响。方法建立大鼠急性肺栓塞模型,分别在急性肺栓塞后1、2、7和21d开胸取出肺组织,然后提取... 目的研究大鼠急性肺栓塞模型肺组织中异源性核糖核蛋白E1(heterogeneous nuclear ribonucleoprote E1,hnRNP-E1)的表达变化及其对胶原代谢的影响。方法建立大鼠急性肺栓塞模型,分别在急性肺栓塞后1、2、7和21d开胸取出肺组织,然后提取肺组织的总RNA和总蛋白,以正常大鼠为对照组,采取半定量RT-PCR的方法研究hnRNP-E1在mRNA水平表达的变化;采用Western blot方法进一步验证hnRNP-E1在蛋白水平表达的变化。采用Northern blot法分析大鼠肺组织中Collagen α1(Ⅰ)(COL1A1)和Collagen α1(Ⅲ)(COL3A1)在肺栓塞后mRNA水平的表达变化;采用羟脯氨酸(HYP)和Masson染色观察急性肺栓塞3周后肺组织内的胶原沉积状况。结果在大鼠急性肺栓塞后的不同时间点,hnRNP-E1的mRNA水平和蛋白水平的表达均有显著升高。大鼠急性肺栓塞后肺组织中COL1A1的mRNA表达水平有明显升高,但是COL3A1的mRNA表达水平无显著变化。HYP分析和Masson染色均显示急性肺栓塞3周后肺组织内的胶原沉积明显增加。结论大鼠急性肺栓塞后肺组织内hnRNP-E1的表达升高,可能促进了COL1A1的蛋白表达和胶原在肺部的沉积。 展开更多

关键词 肺栓塞 急性 蛋白印迹 半定量逆转录-多聚酶链式反应 hnRNP—E1

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RASSF1-A基因和RASSF1-C基因在胃癌组织及细胞中的表达

11

作者 刘新法 陈明军 谢国柱 《南昌大学学报（医学版）》 CAS 2010年第12期66-69,共4页

目的探讨RASSF1-A基因和RASSF1-C基因在胃癌组织及细胞中的表达特点。方法采用http://www.ncbi.nl m.nih.gov/及DNAstar软件对80例胃癌(胃癌组)及相对应的癌旁组织(对照组)标本RASSF1-A基因和RASSF1-C基因进行生物信息学分析。采用半定... 目的探讨RASSF1-A基因和RASSF1-C基因在胃癌组织及细胞中的表达特点。方法采用http://www.ncbi.nl m.nih.gov/及DNAstar软件对80例胃癌(胃癌组)及相对应的癌旁组织(对照组)标本RASSF1-A基因和RASSF1-C基因进行生物信息学分析。采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测2组组织及胃癌细胞系BGC-823、SGC-7901细胞中RASSF1-A mRNA、RASSF1-C mRNA相对表达量。结果经RT-PCR扩增后,RASSF1-C mRNA在肿瘤细胞系BGC-823、SGC-7901细胞中的相对表达量分别为0.62±0.07、0.66±0.08RASSF1-A mRNA在肿瘤细胞系BGC-823、SGC-7901细胞中的相对表达量分别为0.23±0.10、0.58±0.07,二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。RASSF1-A mRNA在对照组组织中相对表达量为0.81±0.07,显著高于胃癌组0.31±0.03,差异有统计学意义(P<0.05)。RASSF1-C mRNA在胃癌组组织中相对表达量为0.87±0.04,对照组组织中相对表达量为0.84±0.03,2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 RASSF1-A、RASSF1-C基因在胃癌组织中的表达下调。 展开更多

关键词 胃癌 RASSF1-A基因 RASSF1-C基因 表达 半定量逆转录聚合酶链反应

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cDNA末端快速扩增法克隆高山离子芥原叶绿酸酯氧化还原酶基因及其表达特异性分析

12

作者 李玉华 邓培渊 +1 位作者 赵奇 雷志华 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期374-379,410,共7页

用cDNA末端快速扩增技术从高山离子芥中克隆得到完整的原叶绿酸酯氧化还原酶(POR,EC:1.3.1.33)基因,命名为CbPORB,DNAMAN软件分析CbPORB和其他几种植物的POR基因,有很高的同源性,将其cDNA序列提交到NCBI数据库(序列接受号为FJ390503)。C... 用cDNA末端快速扩增技术从高山离子芥中克隆得到完整的原叶绿酸酯氧化还原酶(POR,EC:1.3.1.33)基因,命名为CbPORB,DNAMAN软件分析CbPORB和其他几种植物的POR基因,有很高的同源性,将其cDNA序列提交到NCBI数据库(序列接受号为FJ390503)。CbPORB基因全长1444bp,包含1个1209bp的开放阅读框(ORF),编码402个氨基酸的蛋白CbPORB(序列号为ACJ12925)。NCBI数据库在线软件计算高山离子芥CbPORB蛋白的等电点为9.43,推测其相对分子量为43.37kD。组织特异性表达分析显示:CbPORB在叶、茎中表达,根中不表达,具有器官特异性;干旱胁迫处理抑制CbPORB的转录水平;而表油菜素内酯(24-epibrassinolide;EBR)处理提高了CbPORB的转录水平。 展开更多

关键词 CDNA末端快速扩增 CbPORB 半定量RT-PCR 高山离子芥

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大肠杆菌感染诱导的小尾寒羊外周血白细胞TLR1～5基因差异表达

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作者 唐然 张小丽 +5 位作者 马小军 李发弟 陈富强 贺佳慧 陈佳佳 李骄阳 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期281-286,共6页

i小尾寒羊经乳房实验性感染大肠杆菌，利用半定量RTPCR方法检测大肠杆菌感染后不同时间小尾寒羊外周血白细胞中TLR1～5基因mRNA的表达情况。结果显示，大肠杆菌感染后外周血白细胞中TLR1～5基因mRNA的表达均出现先升高后降低的趋势。其... i小尾寒羊经乳房实验性感染大肠杆菌，利用半定量RTPCR方法检测大肠杆菌感染后不同时间小尾寒羊外周血白细胞中TLR1～5基因mRNA的表达情况。结果显示，大肠杆菌感染后外周血白细胞中TLR1～5基因mRNA的表达均出现先升高后降低的趋势。其中TLR3、TLR4和TLR5基因的相对表达量于大肠杆菌感染后24，36，48h均出现显著或极显著升高，而TLR2和TLR4基因的相对表达量于感染后72h时出现显著降低。结果表明，大肠杆菌感染后，TLR3、TLR4和TLR5受体与细菌的识别、炎症的发生密切相关，为进一步研究TLR1～5基因在绵羊大肠杆菌乳房炎发病过程中的作用机制奠定了基础。 展开更多

关键词 小尾寒羊 大肠杆菌 TLR1~TI R5 半定量RT-PCR

原文传递

南瓜实蝇气味结合蛋白基因鉴定及组织分布

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作者 孔琼 王传铭 +6 位作者 汪斌伟 张晓媛 李珣 谢昆 舒茜 黄镜梅 袁盛勇 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2021年第12期2666-2672,共7页

【目的】克隆南瓜实蝇(Bactrocera tau)的气味结合蛋白(odorent binding proteins,OBPs)基因,并分析其相关生物学信息,为了解南瓜实蝇的嗅觉机制提供参考。【方法】基于南瓜实蝇转录组测序结果筛选获得OBPs基因并进行生物信息学分析,通... 【目的】克隆南瓜实蝇(Bactrocera tau)的气味结合蛋白(odorent binding proteins,OBPs)基因,并分析其相关生物学信息,为了解南瓜实蝇的嗅觉机制提供参考。【方法】基于南瓜实蝇转录组测序结果筛选获得OBPs基因并进行生物信息学分析,通过基因克隆测序验证鉴定OBPs基因,并采用sqRT-PCR检测OBPs在雌、雄虫不同组织中的分布情况。【结果】经PCR产物测序验证和BLAST比对后共鉴定得到6个南瓜实蝇OBPs基因,序列长度在498~955 bp,编码128~314 aa,预测分子量大小为14.67~36.24 kDa,等电点为4.69~8.16,且每个OBP序列的N端均具有16~26 aa组成的信号肽序列,属于1个Minus型和5个Classic型。不同类型的OBPs均具有各自典型保守的Cys位点。6个OBPs分化明显,序列相似度在30%~51%。系统进化树表明,6个OBPs与瓜实蝇(Zeugodacus cucurbitae)的OBPs亲缘关系较近,柑橘大实蝇(Bactrocera minax)次之。半定量RT-PCR检测显示,6个OBPs在雌、雄虫不同组织中均有表达,而OBP14在雄虫腹部不表达,OBP15在雌虫腹部不表达。【结论】上述研究结果为进一步研究南瓜实蝇嗅觉识别分子机制和引诱机制奠定了基础。 展开更多

关键词 南瓜实蝇 气味结合蛋白 基因鉴定 表达分布 半定量PCR

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