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题名弓形虫ROP18基因原核表达载体的构建及表达
被引量：10
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作者
赵焕阁
韦祎
黄用豪
梁丽娟
林映莹
谭光宏
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机构
海南医学院
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出处
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2013年第6期527-529,534,共4页
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基金
海南省自然科学基金项目(No.809018)
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文摘
目的采用PCR方法从刚地弓形虫RH株基因组DNA中扩增弓形虫ROP18基因,构建原核表达载体pET-ROP18,并检测融合蛋白ROP18的免疫反应原性。方法采用PCR技术扩增弓形虫ROP18基因,将其插入原核表达载体pET-28a中,构建原核表达质粒pET-ROP18,PCR和双酶切鉴定正确的重组质粒pET-ROP18转入大肠埃希菌BL21中,在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下表达融合蛋白,诱导产物裂解后进行SDS-PAGE电泳,观察重组蛋白的诱导表达情况,Western blot分析重组蛋白的反应原性。结果以弓形虫基因组DNA为模板,PCR扩增出约1.6kb的ROP18基因片段。将其定向插入原核表达载体pET-28a,构建原核表达质粒pET-ROP18,经PCR和双酶切鉴定后测序,显示重组质粒包含ROP18蛋白基因读码框内的完整序列,能完整表达ROP18抗原蛋白。重组质粒转化菌经IPTG诱导后表达分子质量单位约63ku的融合蛋白,以37℃1mmol/L IPTG诱导4h表达量最大。Western blot分析重组蛋白能被鼠抗弓形虫血清识别。结论成功构建了原核表达载pET-ROP18,重组蛋白ROP18具有免疫反应原性。
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关键词
弓形虫
rop18
原核表达
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Keywords
Toxoplasma gondii
rhoptry proteinl8 （rop18）
prokaryotic expression
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分类号
R382.5
[医药卫生—医学寄生虫学]
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