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蛋白质快速定量法及其在rhZP3纯化中的应用 被引量:1
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作者 谢琪璇 郑育声 +3 位作者 彭雅林 肖銮娟 余巍 潘善培 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1208-1210,共3页
目的 建立层析过程中洗脱峰蛋白质含量的快速定量法。方法 利用蛋白质的紫外吸收原理和层析软件的积分功能,即A2 80 和峰面积计算层析过程中洗脱峰蛋白质含量。结果 洗脱峰大小与蛋白质含量呈线性关系,洗脱峰蛋白质含量可用方程X =Y ... 目的 建立层析过程中洗脱峰蛋白质含量的快速定量法。方法 利用蛋白质的紫外吸收原理和层析软件的积分功能,即A2 80 和峰面积计算层析过程中洗脱峰蛋白质含量。结果 洗脱峰大小与蛋白质含量呈线性关系,洗脱峰蛋白质含量可用方程X =Y A进行估算,X为待测蛋白含量(mg) ,Y为洗脱峰面积(mAU×ml) ,A为1g L待测蛋白在层析系统的紫外吸收值(mAU)。将其应用于重组人卵透明带ZP3蛋白(rhZP3 )的纯化,用该方程估算的纯化蛋白含量与用Low ry法测定结果相似。结论 该法简便、快速、重复性好,具有一定实用价值。 展开更多
关键词 层析 蛋白 定量 重组人卵透明带ZP3蛋白 纯化
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重组人卵透明带蛋白(rhZP3)对人精子顶体反应的诱导作用 被引量:1
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作者 谢琪璇 史卫卫 +4 位作者 张韫 李文星 张春雪 肖銮娟 潘善培 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期746-750,共5页
目的:观察重组人卵透明带蛋白(rhZP3)对人精子顶体反应的诱导作用。方法:正常生育力人精子经过获能后,分别用BSA、孕酮和含不同浓度的重组人ZP3蛋白的培养液共孵育,诱导精子顶体反应,对实验组和对照组的精子的顶体发生状态用考马斯亮蓝... 目的:观察重组人卵透明带蛋白(rhZP3)对人精子顶体反应的诱导作用。方法:正常生育力人精子经过获能后,分别用BSA、孕酮和含不同浓度的重组人ZP3蛋白的培养液共孵育,诱导精子顶体反应,对实验组和对照组的精子的顶体发生状态用考马斯亮蓝染色法进行评价。结果:精子与培养液共孵育30 min后,rhZP3组与BSA组之间差异有显著性(P<0.05),顶体反应率随rhZP3质量浓度增加而升高。结论:重组人ZP3蛋白对人精子顶体反应有显著的诱导效应,且在一定范围内与质量浓度成正相关,重组人ZP3蛋白具有发展精子顶体反应试剂盒的潜能。 展开更多
关键词 重组人透明带蛋白 精子 顶体反应
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重组人卵透明带蛋白及其多克隆抗体对精子-透明带结合的影响
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作者 谢琪璇 马丽 +5 位作者 潘善培 张韫 张春雪 肖銮娟 史卫卫 李文星 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期108-112,共5页
为了探讨毕赤酵母表达的重组人卵透明带ZP3蛋白(recombinant human zona pellucida-3 protein,rhZP3)及其多克隆抗体对小鼠和人精卵结合的影响,采用不同浓度的rhZP3以及空白培养液分别处理小鼠精子,然后再与小鼠卵子进行结合实验,观察... 为了探讨毕赤酵母表达的重组人卵透明带ZP3蛋白(recombinant human zona pellucida-3 protein,rhZP3)及其多克隆抗体对小鼠和人精卵结合的影响,采用不同浓度的rhZP3以及空白培养液分别处理小鼠精子,然后再与小鼠卵子进行结合实验,观察经过不同处理的精子对透明带黏附及体外受精率的影响;用rhZP3以及空白培养液分别处理人精子,然后再与人卵子进行结合实验,观察经过不同处理的精子对透明带黏附的影响;用抗rhZP3抗体与阴性血清分别处理小鼠和人卵子,再与精子进行结合实验,观察多克隆抗体对精子粘附以及小鼠体外受精率的影响。实验结果表明,rhZP3和抗rhZP3多克隆抗体既能抑制人的体外精卵结合,也能抑制小鼠体外精卵结合,提示rhZP3具有天然透明带的特性,有发展成避孕疫苗和作为检测透明带抗体检测试剂的可能。 展开更多
关键词 卵透明带 重组人卵透明带蛋白3 多克隆抗体 精子-透明带结合 避孕疫苗
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人卵透明带蛋白3差异表达菌的鉴定及比较
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作者 周文燊 熊波 +4 位作者 李文星 谢琪璇 肖銮娟 张春雪 潘善培 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期117-122,共6页
目的:研究重组人卵透明带ZP3蛋白的差异表达情况。方法:构建8个重组rhZP3的差异表达质粒在毕赤酵母中进行诱导表达,研究跨膜区保留与否、潜在酶切位点突变与否及多聚组氨酸纯化标签设计的位置是否影响rhZP3的表达情况。结果:保留跨膜区... 目的:研究重组人卵透明带ZP3蛋白的差异表达情况。方法:构建8个重组rhZP3的差异表达质粒在毕赤酵母中进行诱导表达,研究跨膜区保留与否、潜在酶切位点突变与否及多聚组氨酸纯化标签设计的位置是否影响rhZP3的表达情况。结果:保留跨膜区会影响重组蛋白泌出胞外而使表达量降低,潜在酶切位点存在会导致重组蛋白被不完全降解,而多聚组氨酸纯化标签设计位置对表达也有一定影响。结论:从表达量和产物完整性综合考虑,以突变型成熟肽为佳,含跨膜区的蛋白则应选用pPICZaA质粒,以便富集得到完整的表达蛋白。 展开更多
关键词 重组人卵透明带ZP3蛋白 表达 跨膜区 酶切位点突变 组氨酸纯化标签
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