目的 建立针对H10N8禽流感病毒特异、灵敏的real time RT-PCR检测方法.方法 通过比对现有H10N8病毒血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）全长基因序列,分别针对HA和NA基因设计引物和探针6套（P1-P6）和3套（P7-P9）,建立鉴别H10N8禽流感病毒r...目的 建立针对H10N8禽流感病毒特异、灵敏的real time RT-PCR检测方法.方法 通过比对现有H10N8病毒血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）全长基因序列,分别针对HA和NA基因设计引物和探针6套（P1-P6）和3套（P7-P9）,建立鉴别H10N8禽流感病毒real time RT-PCR方法,分别对筛选的引物进行特异性、灵敏性和临床标本检测适应性等评价.结果 特异性检测显示6套针对HA的引物和探针中的3套能够检测H10N8病毒,其中2套（P5和P6）与其他非H10亚型流感病毒无交叉反应;3套针对NA的引物和探针均能检测H10N8病毒,其中2套（P7和P9）与其他非N8亚型流感病毒无交叉反应.灵敏性检测显示,P5和P6以及P7和P9均能检出最大稀释度为109的H10N8病毒RNA,重复性显示4组的Ct值CV均＜3％.使用P6和P9对3例H10N8病例呼吸道标本份进行real time RT-PCR检测均为阳性,其中2例病毒分离阳性,4份病毒分离阳性的活禽相关环境样本检测均为阳性.结论 建立了H10N8禽流感病毒荧光定量PCR检测方法,该方法具有良好的特异性和敏感性.展开更多
文摘目的 建立针对H10N8禽流感病毒特异、灵敏的real time RT-PCR检测方法.方法 通过比对现有H10N8病毒血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）全长基因序列,分别针对HA和NA基因设计引物和探针6套（P1-P6）和3套（P7-P9）,建立鉴别H10N8禽流感病毒real time RT-PCR方法,分别对筛选的引物进行特异性、灵敏性和临床标本检测适应性等评价.结果 特异性检测显示6套针对HA的引物和探针中的3套能够检测H10N8病毒,其中2套（P5和P6）与其他非H10亚型流感病毒无交叉反应;3套针对NA的引物和探针均能检测H10N8病毒,其中2套（P7和P9）与其他非N8亚型流感病毒无交叉反应.灵敏性检测显示,P5和P6以及P7和P9均能检出最大稀释度为109的H10N8病毒RNA,重复性显示4组的Ct值CV均＜3％.使用P6和P9对3例H10N8病例呼吸道标本份进行real time RT-PCR检测均为阳性,其中2例病毒分离阳性,4份病毒分离阳性的活禽相关环境样本检测均为阳性.结论 建立了H10N8禽流感病毒荧光定量PCR检测方法,该方法具有良好的特异性和敏感性.
