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呼吸道合胞病毒对上呼吸道感染儿童呼吸道上皮细胞自噬和mTOR信号通路基因的影响
1
作者 胡丹 邢佳 《南昌大学学报（医学版）》 2024年第3期52-58,71,共8页
目的 探讨呼吸道合胞病毒(RSV)对上呼吸道感染儿童呼吸道上皮细胞自噬和mTOR信号通路相关基因的影响。方法 选择2022年11月至2023年12月唐山职业技术学院附属医院收治的145例上呼吸道感染儿童为研究对象,同时纳入同期体检的年龄和性别... 目的 探讨呼吸道合胞病毒(RSV)对上呼吸道感染儿童呼吸道上皮细胞自噬和mTOR信号通路相关基因的影响。方法 选择2022年11月至2023年12月唐山职业技术学院附属医院收治的145例上呼吸道感染儿童为研究对象,同时纳入同期体检的年龄和性别匹配的健康儿童(n=10)为健康对照组。采集所有儿童鼻咽分泌物标本(NPA),利用RT-PCR进行RSV筛查,通过G(黏附)基因扩增测定RSV毒株的分子特征并进行系统发育分析。利用qRT-PCR检测25例RSV阳性NPA样本(RSV组)和10例健康对照NPA样本(健康对照组)的呼吸道上皮细胞自噬相关基因(BECN1、ATG3、ATG5、NPC1与GABARAP)和mTOR信号通路相关基因(AKT1、mTOR、PDPK1、RICTOR与TSC1)的表达水平。结果 在145份上呼吸道感染儿童NPA样本中,69份(47.6%)为RSV阳性。对31株有代表性的RSV进行循环基因型检测,经BLAST分析,31株RSV均为RSV-A型。通过靶向G基因的胞外域部分,系统发育分析发现31株RSV-A聚类为具有72 bp核苷酸重复的ON1基因型。此外,毒株分别属于谱系1(51.6%),其次是谱系3(29%)和谱系2(19.4%)。RSV组呼吸道上皮细胞中ATG3和NPC1 mRNA表达水平显著高于健康对照组(均P<0.001)。RSV组呼吸道上皮细胞中AKT1、mTOR和TSC1 mRNA表达水平显著低于健康对照组(均P<0.001)。结论 RSV感染可以提高上呼吸道感染儿童呼吸道上皮细胞中自噬相关基因(ATG3和NPC1)的表达,抑制mTOR信号通路相关基因(AKT1、mTOR和TSC1)的表达,进而逃避宿主免疫系统,以实现其在宿主内的生存方式。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 上呼吸道感染 呼吸道上皮细胞 自噬 MTOR信号通路
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摩托车尾气对人体呼吸道细胞氧化应激水平的影响
2
作者 周玉梅 鱼涛 +4 位作者 张雪艳 李国梁 李斌 戴宇飞 宾萍 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2023年第5期535-539,545,共6页
目的探讨摩托车尾气(ME)对人呼吸道不同部位细胞氧化应激水平的影响。方法取对数生长期BEAS-2B和A549细胞随机分为对照组、低剂量组和高剂量组。采用气-液界面染毒技术,对生长在Transwell插件多孔膜上的2种细胞持续染毒60 min;其中,低... 目的探讨摩托车尾气(ME)对人呼吸道不同部位细胞氧化应激水平的影响。方法取对数生长期BEAS-2B和A549细胞随机分为对照组、低剂量组和高剂量组。采用气-液界面染毒技术,对生长在Transwell插件多孔膜上的2种细胞持续染毒60 min;其中,低、高剂量组细胞分别采用ME与洁净空气体积比1∶20和1∶10的稀释气体刺激,对照组细胞予洁净空气处理。染毒结束后收集细胞,采用CCK-8法检测细胞相对存活率;采用比色法检测细胞内丙二醛、谷胱甘肽水平和超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果细胞的相对存活率在ME染毒剂量上存在主效应(P<0.01),呈随着ME染毒剂量增加而下降的趋势(P值均<0.05);但在细胞类型主效应和ME染毒剂量与细胞类型的交互效应上均无统计学意义(P值均>0.05)。细胞内谷胱甘肽水平和SOD活力在ME染毒剂量和细胞类型的交互效应上均有统计学意义(P值均<0.01),丙二醛水平在细胞类型主效应上有统计学意义(P<0.01)。其中,对于BEAS-2B细胞,低剂量组细胞内谷胱甘肽水平和SOD活力分别与对照组比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05);但高剂量组细胞内谷胱甘肽水平和SOD活力均高于对照组与低剂量组(P值均<0.05)。对于A549细胞,细胞内谷胱甘肽水平随着ME染毒剂量的增加而下降(P值均<0.05);低剂量组细胞内SOD活力高于对照组(P<0.05),高剂量组A549细胞内SOD活力分别低于对照组与低剂量组(P值均<0.05);A549细胞内丙二醛水平高于BEAS-2B细胞(P<0.05)。结论ME可引起呼吸道不同部位细胞的氧化应激生物标志物生成量的变化;呼吸道不同部位细胞对ME诱导的氧化应激响应具有差异性。 展开更多
关键词 摩托车尾气 气-液界面 氧化应激 呼吸道细胞 丙二醛 谷胱甘肽 超氧化物歧化酶
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木犀草素降低大肠埃希菌对呼吸道上皮细胞感染的作用机制研究 被引量：4
3
作者 黄志勇 孙凤军 +3 位作者 袁慊 王瑜 熊丽蓉 冯伟 《中国医院药学杂志》 CAS 北大核心 2020年第7期781-785,共5页
目的:探讨亚抑菌浓度(sub-minimal inhibitory concentration,亚-MIC)木犀草素降低临床分离大肠埃希菌对呼吸道上皮细胞HBE感染的作用机制,为临床抗感染的治疗提供新的思路。方法:采用微量肉汤稀释法检测木犀草素对大肠埃希菌临床株E367... 目的:探讨亚抑菌浓度(sub-minimal inhibitory concentration,亚-MIC)木犀草素降低临床分离大肠埃希菌对呼吸道上皮细胞HBE感染的作用机制,为临床抗感染的治疗提供新的思路。方法:采用微量肉汤稀释法检测木犀草素对大肠埃希菌临床株E367的MIC值,采用多功能酶标仪测定亚-MIC木犀草素对细菌生长的影响,采用CCK-8法测定亚-MIC木犀草素处理大肠埃希菌对HBE细胞毒性的影响,采用ELISA试剂盒测定细胞炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-8及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平,采用Western Blot测定p-p65/p65、p-IκBα/IκBα蛋白表达水平。结果:1/4 MIC-1/32 MIC木犀草素对大肠埃希菌的生长没有影响,且能剂量依赖性地降低大肠埃希菌对呼吸道上皮细胞的毒性。大肠埃希菌感染细胞后其炎症因子IL-6、IL-8、TNF-α水平和p-p65/p65、p-IκBα/IκBα蛋白表达水平均显著增高。与细菌处理组相比,木犀草素和大肠埃希菌共同处理细胞后其IL-6、TNF-α水平及p-p65/p65、p-IκBα/IκBα蛋白表达水平显著降低,而细胞因子IL-8水平几乎不变。结论:木犀草素可能通过免疫调节抑制大肠埃希菌对呼吸道上皮细胞的感染作用。 展开更多
关键词 木犀草素 大肠埃希菌 呼吸道上皮细胞 亚抑菌浓度 细胞毒性
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香烟烟雾提取物诱导呼吸道上皮细胞间质性转化的实验研究 被引量：3
4
作者 刘振峰 刘建英 +3 位作者 刘代顺 周国旗 陈乾 王海霞 《重庆医学》 CAS 北大核心 2017年第3期318-321,共4页
目的探讨香烟烟雾提取物(CSE)在呼吸道上皮细胞间质性转化(EMT)中的作用,为进一步研究香烟烟雾提取物在慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道重构发生机制提供新的线索。方法用不同浓度(0%、0.5%、1.0%、2.5%、5.0%,其中浓度0作为对照组)的CSE刺... 目的探讨香烟烟雾提取物(CSE)在呼吸道上皮细胞间质性转化(EMT)中的作用,为进一步研究香烟烟雾提取物在慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道重构发生机制提供新的线索。方法用不同浓度(0%、0.5%、1.0%、2.5%、5.0%,其中浓度0作为对照组)的CSE刺激呼吸道上皮细胞BEAS-2B72h,逆转录PCR检测E钙粘蛋白(E-cad)、N钙粘蛋白(N-cad)mRNA表达情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中TGF-β1浓度;用2.5%CSE刺激BEAS-2B细胞不同时长(0、12、24、48h,其中时间0h作为对照),倒置显微镜下观察细胞形态变化,逆转录PCR检测E-cad、N-cad、补体C3mRNA表达情况,ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1、过敏毒素C3a浓度。结果在不同浓度的CSE刺激BEAS-2B细胞72h后,CSE各浓度刺激组较对照组E-cad mRNA表达下调,N-cad mRNA表达增加,且呈浓度依赖性(P<0.05);ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1水平,CSE各浓度刺激组较对照组增加(P<0.05);2.5%CSE在不同时间点作用BEAS-2B细胞,刺激组细胞呈梭形改变,CSE各时间段刺激组较对照组E-cad mRNA表达减少,补体C3、N-cad mRNA表达增加,且呈时间依赖性(P<0.05),CSE各时间段刺激组细胞培养上清液中TGF-β1、C3a水平较对照组增加(P<0.05)。结论 CSE可诱导正常的呼吸道上皮细胞BEAS-2B发生EMT,补体C3激活可能参与此过程。 展开更多
关键词 肺疾病 慢性阻塞性 香烟烟雾提取物 呼吸道上皮细胞 上皮间质转化 过敏毒素C3a
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维生素A对呼吸道上皮细胞线粒体功能的作用机制 被引量：1
5
作者 张轩 侯静 +4 位作者 曹海霞 黄登亮 张耀刚 袁馥梅 马艳艳 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2021年第11期1126-1131,共6页
目的维生素A(VA)能够促进呼吸道上皮细胞增殖.分化,但作用机制尚不明确,文章旨在探索VA是否通过调控线粒体功能影响人正常主支气管上皮细胞生长代谢以及初步的作用机制。方法采用CCK-8检测VA对细胞增殖及毒性影响并结合VA缺乏的诊断标... 目的维生素A(VA)能够促进呼吸道上皮细胞增殖.分化,但作用机制尚不明确,文章旨在探索VA是否通过调控线粒体功能影响人正常主支气管上皮细胞生长代谢以及初步的作用机制。方法采用CCK-8检测VA对细胞增殖及毒性影响并结合VA缺乏的诊断标准确定VA给药量,将人主支气管上皮细胞分为4组,即对照组、VA-0.1 mg/L组、VA-0.5 mg/L组、VA-2 mg/L组,培养24.48 h。采用细胞能量代谢仪检测不同浓度VA对细胞线粒体有氧代谢的影响;qPCR分析细胞线粒体DNA拷贝数及线粒体自噬相关P62基因表达水平。结果VA处理HNTEC细胞24h后线粒体耗氧量相较于对照组增高,处理浓度为0.5mg/L时细胞线粒体耗氧量最高、ATP生成最多、最大呼吸潜能最高、质子漏增加;处理48h,0.1.0.5 mg/L处理组的结果与24h-致。VA-0.5 mg/L组、VA-2 mg/L组24 h线粒体拷贝数(328 333.00±66 583.28、3553 333.00±262 742.00)较对照组(2813 333.00±40 414.52)和VA-0.1 mg/L(2953 333.00±40 414.52)明显升高(P<0.01);VA-2 mg/L组.VA-0.5 mg/L组24 h线粒体拷贝数较VA-0.1 mg/L组明显升高(P<0.01);VA-2 mg/L组24 h线粒体拷贝数较VA-0.5 mg/L组明显升高(P<0.05)。VA-0.1 mg/L组48 h线粒体拷贝数(8475715.00+44489.78)较对照组(8331 365.00±5 435.18)明显升高(P<0.01);VA-2 mg/L组.VA-0.5 mg/L组48 h线粒体拷贝数较VA-0.1 mg/L组明显降低(P<0.01);VA-2 mg/L组48 h线粒体拷贝数较VA-0.5 mg/L组明显降低(P<0.01)。VA处理24.48 h后,P62基因的表达较对照组明显升高,且随着VA浓度的增加而增加.差异有统计学意义(P<0.01),但在48h,干预浓度为2mg/L较0.5mg/L P62基因表达稍降低(P<0.05)。结论VA可以通过降低线粒体自噬及增加线粒体DNA拷贝数影响呼吸道上皮细胞线粒体功能。 展开更多
关键词 维生素A 呼吸道上皮细胞 线粒体能量代谢 线粒体DNA拷贝数 自噬
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A549细胞和Hep-2细胞表面糖链类型鉴定及其与H5N1型禽流感病毒结合的特性 被引量：1
6
作者 黄丽 郭显蓉 +3 位作者 屠宴会 宋德禄 杨浩 尹洪超 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2010年第12期1318-1324,共7页
目的研究H5N1病毒对A549细胞和Hep-2细胞的黏附和进入特性。方法用凝集素染色技术和流式细胞术检测A549细胞和Hep-2细胞表面SAα2,3Gal和SAα2,6Gal的表达;用间接免疫荧光法检测H5N1病毒进入细胞情况;用Western blot法分析病毒进入A549... 目的研究H5N1病毒对A549细胞和Hep-2细胞的黏附和进入特性。方法用凝集素染色技术和流式细胞术检测A549细胞和Hep-2细胞表面SAα2,3Gal和SAα2,6Gal的表达;用间接免疫荧光法检测H5N1病毒进入细胞情况;用Western blot法分析病毒进入A549细胞和Hep-2细胞的效率。结果 A549细胞和Hep-2细胞表面有大量SAα2,3Gal,但SAα2,6Gal含量却很少。Hep-2细胞表面SAα2,3Gal受体的表达水平高于A549细胞。H5N1病毒能够进入A549细胞和Hep-2细胞,而且H5N1病毒对A549细胞的亲嗜性更强。与A549细胞相比,Hep-2细胞对H5N1病毒诱导的细胞死亡更敏感。结论细胞表面唾液酸-α2,3-半乳糖的表达与H5N1病毒的黏附一致。然而,唾液酸受体可能不是介导病毒进入的唯一因素。 展开更多
关键词 H5N1病毒 呼吸道上皮细胞 唾液酸-α2 3-半乳糖 唾液酸-α2 6-半乳糖 细胞死亡
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不同类型呼吸道上皮细胞感染金黄色葡萄球菌的基因表达差异研究
7
作者 尹僖 谢伟 《现代医药卫生》 2021年第14期2384-2388,共5页
目的从分子水平研究不同呼吸道上皮细胞感染金黄色葡萄球菌的机制,为临床诊治提供数据依据。方法在GEO基因芯片数据库中得到不同呼吸道上皮细胞感染金黄色葡萄球菌后的表达谱数据,筛选出前50个最显著的差异基因。对差异基因进行GO和Path... 目的从分子水平研究不同呼吸道上皮细胞感染金黄色葡萄球菌的机制,为临床诊治提供数据依据。方法在GEO基因芯片数据库中得到不同呼吸道上皮细胞感染金黄色葡萄球菌后的表达谱数据,筛选出前50个最显著的差异基因。对差异基因进行GO和Pathway分析,筛选出在不同气道感染情况中金黄色葡萄球菌最显著的信号通路。结果在16HBE14o-和S9细胞株感染表达/非表达Hla毒素金黄色葡萄球菌中,分别筛选1164个和201个显著差异基因(差异大于1.5倍)。差异基因相关的信号通路中,主要是MAPK、JAK/STAT及Toll样受体通路等与免疫反应关系密切。S9细胞株中,主要是FOS蛋白、EGR1蛋白、DUSP1蛋白、ATF3蛋白互作联系紧密;而16HBE14o-细胞株中,蛋白互作不大。结论16HBE14o-和S9细胞株中,表达/非表达Hla毒素金黄色葡萄球菌感染时的基因表达差异显著,S9细胞株的蛋白互作联系紧密。 展开更多
关键词 生物信息学 金黄色葡萄球菌 基因差异表达 信号通路分析 呼吸道上皮细胞
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呼吸道上皮细胞培养模式与纤毛摆动频率的研究进展
8
作者 李童斐 秦生辉 《中国医药导报》 CAS 2016年第8期40-43,共4页
呼吸道上皮细胞在呼吸疾病的发生发展中占有重要的地位,哺乳动物呼吸道上皮表面覆盖有纤毛,纤毛的摆动可以保护呼吸系统免于细菌、病毒以及其他致病因素的损害。因此纤毛摆动频率(CBF)的调控成为许多呼吸疾病发生发展的关键因素,可以用... 呼吸道上皮细胞在呼吸疾病的发生发展中占有重要的地位,哺乳动物呼吸道上皮表面覆盖有纤毛,纤毛的摆动可以保护呼吸系统免于细菌、病毒以及其他致病因素的损害。因此纤毛摆动频率(CBF)的调控成为许多呼吸疾病发生发展的关键因素,可以用来研究呼吸道炎症、吸烟、感染、呼吸系统肿瘤等多种疾病。体外研究CBF的方法多是采用借助呼吸道上皮细胞培养以及活体呼吸道上皮分离等手段,但呼吸道上皮细胞的原代培养具有杂细胞多、不易分化纤毛等诸多问题。呼吸道上皮细胞的培养模式不断发展,本文简述了呼吸道上皮细胞主要的两种原代培养模式及各自的主要培养方法及改进发展情况,同时介绍并总结了呼吸道上皮细胞纤毛分化的鉴定及其摆动频率的检测,明确了各类培养模式对操作流程、培养周期、尤其是纤毛分化及摆动频率的影响,为在现有培养模式下改进技术得到能够诱导纤毛分化的有效培养方法奠定了基础。 展开更多
关键词 呼吸道上皮细胞 纤毛摆动频率 培养模式 纤毛分化
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呼吸上皮细胞在臭氧气液界面暴露后的氧化损伤效应研究 被引量：6
9
作者 王科霖 管东波 宋宏 《环境与健康杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期397-400,F0003,共5页
目的探讨臭氧(ozone,O3)对人呼吸上皮细胞(human respiratory epithelial cells,BEAS-2B)的氧化损伤效应及氧化损伤与炎症效应分子分泌的关系。方法利用完全融合并分化完全的人呼吸上皮细胞及petri-PERM透气培养皿建立臭氧体外暴露系统... 目的探讨臭氧(ozone,O3)对人呼吸上皮细胞(human respiratory epithelial cells,BEAS-2B)的氧化损伤效应及氧化损伤与炎症效应分子分泌的关系。方法利用完全融合并分化完全的人呼吸上皮细胞及petri-PERM透气培养皿建立臭氧体外暴露系统,设立对照(无菌空气)组和高(0.50 mg/m3)、低剂量(0.16 mg/m3)臭氧暴露组以及低剂量(0.16 mg/m3)臭氧暴露+N-乙酰半胱氨酸(NAC,0.01 mol/L)保护组,分别培养1、8 h。测定细胞内GSH、GSSG含量和SOD活力以及细胞培养上清液中IL-2和NO浓度,并观察细胞形态。结果与对照组比较,低剂量和高剂量臭氧暴露组BEAS-2B细胞内GSH/GSSG值较低,细胞内SOD活力以及细胞培养上清中NO和IL-2浓度较高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与低剂量臭氧暴露组比较,低剂量臭氧暴露+NAC保护组BEAS-2B细胞内GSH/GSSG值较高,细胞内SOD活力以及细胞培养上清中NO和IL-2浓度较低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。低剂量臭氧暴露+NAC保护组与对照组BEAS-2B细胞内GSH/GSSG值和SOD活力以及细胞培养上清液中IL-2和NO浓度间比较,差异均无统计学意义。在细胞形态上,随着臭氧暴露浓度的升高,BEAS-2B死亡细胞数明显增加,细胞变小变圆;而经NAC保护的细胞生长规则,排列紧密,与对照组基本一致。结论臭氧能对支气管上皮细胞造成氧化损伤,改变细胞内氧化还原状态,并可能诱导支气管上皮细胞合成炎症介质参与气道炎症的启动;而抗氧化剂NAC可以抑制低剂量臭氧暴露对支气管上皮细胞的氧化损伤和炎症介质释放。 展开更多
关键词 臭氧 气液界面 人呼吸上皮细胞 氧化损伤
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