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重组伪狂犬病病毒介导的siRNA对高致病性PRRSVN蛋白基因表达的抑制作用
被引量：
2
1
作者
曹素芳
王岩
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第8期1142-1149,1153,共9页
构建表达HP-PRRSV河南分离株HN1N蛋白基因的siRNA重组伪狂犬病病毒3株,将其感染PK-15细胞,在细胞水平上评价重组伪狂犬病病毒介导的siRNA对N蛋白表达的抑制效果。PCR扩增带CMV-siRNA-poly(A)片段和新霉素基因,通过酶切将CMV-siRNA-poly...
构建表达HP-PRRSV河南分离株HN1N蛋白基因的siRNA重组伪狂犬病病毒3株,将其感染PK-15细胞,在细胞水平上评价重组伪狂犬病病毒介导的siRNA对N蛋白表达的抑制效果。PCR扩增带CMV-siRNA-poly(A)片段和新霉素基因,通过酶切将CMV-siRNA-poly(A)片段和新霉素基因分别插入伪狂犬病病毒转移载体pUSKBH中,构建重组伪狂犬病病毒通用转移载体pUsiRNA。分别用BamHⅠ和HindⅢ酶切pUsiRNA,回收后与HPPRRSV河南分离株HN1N蛋白基因的3个siRNA分子连接,构建表达N蛋白基因siRNA的重组伪狂犬病病毒表达载体。将鉴定正确的重组伪狂犬病病毒表达载体与伪狂犬病病毒DNA共转染PK-15细胞,经同源重组及噬斑纯化获得表达N蛋白基因siRNA的重组伪狂犬病病毒株,应用PCR及Southern blot鉴定重组病毒。将HN1株N蛋白基因的真核表达质粒pAcGFP1-N转染PK-15,经筛选获得稳定表达N蛋白基因的细胞。将鉴定正确的表达N蛋白基因siRNA的重组伪狂犬病病毒接种于稳定表达N蛋白基因的细胞,利用绿色荧光蛋白基因及半定量RT-PCR检测重组伪狂犬病病毒介导的N蛋白基因siRNA对N蛋白表达的抑制效果。结果显示,PCR扩增到的CMV-siRNA-poly(A)片段约为0.7kb,新霉素基因约1.5kb。经酶切、PCR及测序鉴定,构建了表达siRNA的通用伪狂犬病病毒转移载体pUsiRNA。经PCR及Southern blot检测,获得了3株表达HP-PRRSV河南分离株HN1N蛋白基因siRNA的重组伪狂犬病病毒gG-/siRNAN1、gG-/siRNAN2和gG-/siRNAN3;经荧光显微镜观察和半定量RT-PCR检测表明,重组伪狂犬病病毒介导的N蛋白基因siRNA能够显著抑制N蛋白在PK-15细胞中表达,其中gG-/siRNAN2抑制效果最好。这为深入研究N蛋白基因siRNA抑制HP-PRRSV复制奠定基础,并为HP-PRRSV的防制提供新的思路。
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关键词
高致病性
PRRS
N蛋白基因
SIRNA
重组伪狂犬病病毒
原文传递
靶向HP-PRRSV ORF7基因的siRNA重组伪狂病病毒的体外复制抑制效果
被引量：
1
2
作者
曹素芳
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第11期2044-2050,共7页
为了评价靶向高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）ORF7的siRNA重组伪狂犬病病毒（rPRV）对HP-PRRSV复制的体外抑制效果。将500MOI的siRNA rPRV：rPRV gG-/siRNA N1、rPRV gG-/siRNA N2、rPRV gG-/siRNA N3分别感染Marc-145细胞,...
为了评价靶向高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）ORF7的siRNA重组伪狂犬病病毒（rPRV）对HP-PRRSV复制的体外抑制效果。将500MOI的siRNA rPRV：rPRV gG-/siRNA N1、rPRV gG-/siRNA N2、rPRV gG-/siRNA N3分别感染Marc-145细胞,24h后再分别接种10 MOI PRRSV,感染病毒48h后,观察其抑制HPPRRSV HN1株复制效果;待细胞感染病毒72h后,应用间接免疫荧光试验（IFA）、实时荧光定量PCR及Western blot检测重组rPRV介导的siRNA对HP-PRRSV在细胞中复制的抑制作用。结果显示,与表达突变siRNA的rPRV gG-/siRNA Neg及接毒对照组相比,HP-PRRSV在细胞中的复制均可被3个siRNA rPRV有效抑制,其中重组病毒rPRV gG-/siRNA N2抑制效果最佳;进一步检测siRNA重组rPRV在Marc-145细胞中抑制HP-PRRSV HN1株的复制效果,结果显示,与对照组相比,重组病毒rPRV gG-/siRNA N1和rPRV gG-/siRNA N3抑制作用不明显,而rPRV gG-/siRNA N2不但能够有效抑制HP-PRRSV引起的细胞病变,而且能够消减HP-PRRSV N蛋白的表达,明显降低ORF7mRNA的表达水平（P〈0.05）,且其抑制作用具有剂量依赖性,其抑制效果至少可持续5d,但随着时间的延长逐渐减弱。结果提示siRNA rPRV在体外能抑制HP-PRRSV的复制。
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关键词
高致病性PRRSV
重组伪狂犬病病毒
RNA干扰
SIRNA
原文传递
题名
重组伪狂犬病病毒介导的siRNA对高致病性PRRSVN蛋白基因表达的抑制作用
被引量：
2
1
作者
曹素芳
王岩
机构
郑州牧业工程高等专科学校动物医学系
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第8期1142-1149,1153,共9页
基金
河南省高校科技创新人才支持计划资助项目(2008HASTIT01)
河南省教育厅自然科学研究计划资助项目(2011A230012)
文摘
构建表达HP-PRRSV河南分离株HN1N蛋白基因的siRNA重组伪狂犬病病毒3株,将其感染PK-15细胞,在细胞水平上评价重组伪狂犬病病毒介导的siRNA对N蛋白表达的抑制效果。PCR扩增带CMV-siRNA-poly(A)片段和新霉素基因,通过酶切将CMV-siRNA-poly(A)片段和新霉素基因分别插入伪狂犬病病毒转移载体pUSKBH中,构建重组伪狂犬病病毒通用转移载体pUsiRNA。分别用BamHⅠ和HindⅢ酶切pUsiRNA,回收后与HPPRRSV河南分离株HN1N蛋白基因的3个siRNA分子连接,构建表达N蛋白基因siRNA的重组伪狂犬病病毒表达载体。将鉴定正确的重组伪狂犬病病毒表达载体与伪狂犬病病毒DNA共转染PK-15细胞,经同源重组及噬斑纯化获得表达N蛋白基因siRNA的重组伪狂犬病病毒株,应用PCR及Southern blot鉴定重组病毒。将HN1株N蛋白基因的真核表达质粒pAcGFP1-N转染PK-15,经筛选获得稳定表达N蛋白基因的细胞。将鉴定正确的表达N蛋白基因siRNA的重组伪狂犬病病毒接种于稳定表达N蛋白基因的细胞,利用绿色荧光蛋白基因及半定量RT-PCR检测重组伪狂犬病病毒介导的N蛋白基因siRNA对N蛋白表达的抑制效果。结果显示,PCR扩增到的CMV-siRNA-poly(A)片段约为0.7kb,新霉素基因约1.5kb。经酶切、PCR及测序鉴定,构建了表达siRNA的通用伪狂犬病病毒转移载体pUsiRNA。经PCR及Southern blot检测,获得了3株表达HP-PRRSV河南分离株HN1N蛋白基因siRNA的重组伪狂犬病病毒gG-/siRNAN1、gG-/siRNAN2和gG-/siRNAN3;经荧光显微镜观察和半定量RT-PCR检测表明,重组伪狂犬病病毒介导的N蛋白基因siRNA能够显著抑制N蛋白在PK-15细胞中表达,其中gG-/siRNAN2抑制效果最好。这为深入研究N蛋白基因siRNA抑制HP-PRRSV复制奠定基础,并为HP-PRRSV的防制提供新的思路。
关键词
高致病性
PRRS
N蛋白基因
SIRNA
重组伪狂犬病病毒
Keywords
highly
pathogenic
porcine
reproductive
and
respiratory
syndrome
N
protein
gene
smallinterfering
RNA（siRNA）
recombination
pseudorabies
virus
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
靶向HP-PRRSV ORF7基因的siRNA重组伪狂病病毒的体外复制抑制效果
被引量：
1
2
作者
曹素芳
机构
河南牧业经济学院动物医学院
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第11期2044-2050,共7页
基金
河南省高校科技创新人才支持计划资助项目(2008HASTIT01)
文摘
为了评价靶向高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）ORF7的siRNA重组伪狂犬病病毒（rPRV）对HP-PRRSV复制的体外抑制效果。将500MOI的siRNA rPRV：rPRV gG-/siRNA N1、rPRV gG-/siRNA N2、rPRV gG-/siRNA N3分别感染Marc-145细胞,24h后再分别接种10 MOI PRRSV,感染病毒48h后,观察其抑制HPPRRSV HN1株复制效果;待细胞感染病毒72h后,应用间接免疫荧光试验（IFA）、实时荧光定量PCR及Western blot检测重组rPRV介导的siRNA对HP-PRRSV在细胞中复制的抑制作用。结果显示,与表达突变siRNA的rPRV gG-/siRNA Neg及接毒对照组相比,HP-PRRSV在细胞中的复制均可被3个siRNA rPRV有效抑制,其中重组病毒rPRV gG-/siRNA N2抑制效果最佳;进一步检测siRNA重组rPRV在Marc-145细胞中抑制HP-PRRSV HN1株的复制效果,结果显示,与对照组相比,重组病毒rPRV gG-/siRNA N1和rPRV gG-/siRNA N3抑制作用不明显,而rPRV gG-/siRNA N2不但能够有效抑制HP-PRRSV引起的细胞病变,而且能够消减HP-PRRSV N蛋白的表达,明显降低ORF7mRNA的表达水平（P〈0.05）,且其抑制作用具有剂量依赖性,其抑制效果至少可持续5d,但随着时间的延长逐渐减弱。结果提示siRNA rPRV在体外能抑制HP-PRRSV的复制。
关键词
高致病性PRRSV
重组伪狂犬病病毒
RNA干扰
SIRNA
Keywords
HP-PRRSV
recombination
pseudorabies
virus
RNAi
siRNA
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组伪狂犬病病毒介导的siRNA对高致病性PRRSVN蛋白基因表达的抑制作用
曹素芳
王岩
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
2
原文传递
2
靶向HP-PRRSV ORF7基因的siRNA重组伪狂病病毒的体外复制抑制效果
曹素芳
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
1
原文传递
已选择
0
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